BJS201601食品中那非類物質(zhì)的測(cè)定

1、附件1食品中那非類物質(zhì)的測(cè)定BJS2016011范圍本方法規(guī)定了食品（含保健食品）中西地那非、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、那莫西地那非、硫代艾地那非、紅地那非、那紅地那非、伐地那非、偽伐地那非、他達(dá)拉非、氨基他達(dá)拉非含量的液相色譜 -串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。本方法適用于酒、咖啡、功能飲料、瑪咖片、保健食品中西地那非、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、那莫西地那非、硫代艾地那非、紅地那非、那紅地那非、伐地那非、偽伐地那非、他達(dá)拉非、氨基他達(dá)拉非含量的測(cè)定。2原理試樣經(jīng)乙腈提取后，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)，外標(biāo)法定量。3試劑和材料注：水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。3.1試劑3.1.1乙腈（C

2、H3CN）:色譜純。3.1.2甲酸（CH2O2）:質(zhì)譜級(jí)。3.1.3 0.1%甲酸水溶液：取甲酸 1ml用水稀釋至1000ml,用濾膜（3.4）過(guò)濾后備用。3.1.4 0.1%甲酸乙腈溶液：取甲酸 1ml用乙腈稀釋至1000ml,用濾膜（3.4）過(guò)濾后備用。3.2標(biāo)準(zhǔn)品西地那非鹽酸鹽、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、那莫西地那非、硫代艾地那非、紅地那非、那紅地那非、伐地那非鹽酸鹽、偽伐地那非、他達(dá)拉非、氨基他達(dá)拉非標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量見(jiàn)附錄A表A.1，純度 98%3.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.3.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別稱取西地那非鹽酸鹽、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那

3、非、那莫西地那非、硫代艾地那非、紅地那非、那紅地那非、伐地那非鹽酸鹽、偽伐地那非、他達(dá)拉非、氨基他達(dá)拉非標(biāo)準(zhǔn)品（3.2） 0.1 g （精確至0.000 1 g）,用乙腈溶解，并轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，此溶液濃度為1 mg/mL。貯存于4 C冰箱中，有效期 3個(gè)月。3.3.2混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：分別準(zhǔn)確吸取西地那非鹽酸鹽、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、那莫西地那非、硫代艾地那非、紅地那非、那紅地那非、伐地那非鹽酸鹽、偽伐地那非、他達(dá)拉非、氨基他達(dá)拉非標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量（3.3.1）,用乙腈將其稀釋成含量分別為1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL

4、的標(biāo)準(zhǔn)系列混合工作液。臨用時(shí)配制。3.4微孔濾膜：0.22皿，有機(jī)相。4儀器和設(shè)備4.1高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源。4.2超聲波清洗器。4.3分析天平：感量分別為0.01 g和0.000 1 g。5分析步驟5.1試樣制備準(zhǔn)確稱取2g試樣（精確至0.01 g）于50 mL容量瓶中，加入 40mL乙腈，超聲30 min，冷卻至室溫，用乙腈定容至刻度，搖勻，上清液經(jīng)微孔濾膜（3.4）過(guò)濾。取續(xù)濾液 1.0mL于50 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。5.2儀器參考條件5.2.1色譜條件a） 色譜柱：C18柱，1.8 （1, 100 mmX2.1 mm （內(nèi)徑

5、），或性能相當(dāng)者；b） 流動(dòng)相：A為0.1%甲酸水溶液（3.1.3）, B為0.1%甲酸乙腈溶液（3.1.4），洗脫梯度見(jiàn)表1;c）流速：0.3 mL/min ;d）柱溫：35C；e）進(jìn)樣量：2 1。表1洗脫梯度時(shí)間（min）流速（L/min ）流動(dòng)相A （%）流動(dòng)相B （%）00.3901010.3901040.3604070.3109090.310909.10.39010120.390105.2.2質(zhì)譜條件a）電離方式：電噴霧正離子模式；b）檢測(cè)方式：多反應(yīng)檢測(cè)（ MRM ）;c）霧化氣壓力：30psi;d） 離子噴霧電壓：3500V ;e）干燥氣溫度：330 C；f）干燥氣流速：8 L/

6、min ;g）定性離子對(duì)、定量離子、碎裂電壓和碰撞能量見(jiàn)表2。表2那非類物質(zhì)的定性離子對(duì)、定量離子、碎裂電壓和碰撞能量中文名稱母離子（m/z）子離子（m/z）碎裂電壓（V）碰撞能量（eV）西地那非475311* ； 37713520/20豪莫西地那非489113* ； 31113520/20羥基豪莫西地那非505487* ； 37713520/20那莫西地那非460329* ； 37713520/20硫代艾地那非505393* ； 44813520/20紅地那非467396* ； 42013520/20那紅地那非453353* ； 40613520/20伐地那非489151* ； 299135

7、20/20偽伐地那非460432* ； 37713520/20他達(dá)拉非390268* ； 30213520/20氨基他達(dá)拉非391269* ； 26213520/20* :定量離子5.3定性測(cè)定按照上述條件測(cè)定試樣和混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，如果試樣中的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間與混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中的某種組分一致（變化范圍在±.5%之內(nèi)）；試樣中定性離子對(duì)的相對(duì)豐度與濃度相當(dāng)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的相對(duì)豐度一致，相對(duì)豐度偏差不超過(guò)表3規(guī)定的范圍，則可判定為試樣中存在該組分。表3定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度（%）> 50>2050>1020<10允許的最大偏差（%）&#

8、177;20±25±30±505.4定量測(cè)定5.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液（3.3.2）分別按儀器參考條件（5.2 ）進(jìn)行測(cè)定，得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液 的色譜峰面積。以混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn) 曲線。5.4.2試樣溶液的測(cè)定將試樣溶液（5.1）按儀器參考條件（5.2）進(jìn)行測(cè)定，得到相應(yīng)的樣品溶液的色譜峰面積。根 據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中組分的濃度，平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次；試樣待測(cè)液響應(yīng)值若低于 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍，應(yīng)取5.1中試樣提取續(xù)濾液進(jìn)行分析；試樣待測(cè)液響應(yīng)值若超出標(biāo)準(zhǔn)曲線 線性范圍，應(yīng)用乙腈稀釋后進(jìn)行分析。標(biāo)準(zhǔn)

9、品液相色譜圖參見(jiàn)附錄B的圖B.1-B.11。6結(jié)果計(jì)算結(jié)果按式（1）計(jì)算：c V 1000X （1）m式中：X試樣中某種組分的含量，單位為微克每千克（卩g/kg；c由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣液中某種組分的濃度，單位為微克每毫升（卩g/mL;V試樣溶液定容體積，單位為毫升（mL）;m試樣稱取的質(zhì)量，單位為克（g）;計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。7精密度在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。8其他當(dāng)稱樣量為2.00 g,定容體積為50mL時(shí)，西地那非、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、 那莫西地那非、伐地那非、偽伐地那非

10、、他達(dá)拉非檢出限為2卩g/kg硫代艾地那非、紅地那非、氨基他達(dá)拉非檢出限為 5卩g/kg那紅地那非檢出限為 8卩g/kg附錄A那非類標(biāo)準(zhǔn)品信息表A.1那非類標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量序號(hào)中文名稱英文名稱CAS登錄號(hào)分子式相對(duì)分子量1西地那非Silde nafil139755-83-2C22H 30N6O4S474.582豪莫西地那非HomoSilde nafil642928-07-2C23H 32N6O4S488.603羥基豪莫西地那非Hydroxyhomosilde nafil139755-85-4C23H 32N6O5S504.604那莫西地那非Norn

11、eosilde nafil371959-09-0C22H 29N5O4S459.565硫代艾地那非Thioailde nafil856190-47-1C22H 30N 6O3S2490.646紅地那非Acetilde nafil831217-01-7C25H 34N 6O3466.587那紅地那非Noracetilde nafil949091-38-7C24H32N6O3452.558伐地那非Varde nafil224785-91-5C23H 32N6O4S488.609偽伐地那非Pseudovarde nafil224788-34-5C22H 29N5O4S459.5610他達(dá)拉非Tada

12、lafil171596-29-5C22H 19N3O4389.4011氨基他達(dá)拉非Amino tadalafil385769-84-6C21H 18N 4O4390.39附錄B那非類標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖-i¥；xRJr«iFL)$MM?-.油 J lSIM"jiFTAi|fej.33.'：Y £2143.13 4» aa«-l：3. SK4ti -s：C =a? m r?i.|=q39- onr C|Cw±n a !£*0其T -圖B.1西地那非色譜圖 圖B.2豪莫西地那非色譜圖 圖B.3羥基豪莫西地那非色譜圖圖B.4那莫西地那非色譜圖圖B.5硫