人和常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物正常涎腺中肌上皮細(xì)胞定量組織學(xué)研究

1、    人和常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物正常涎腺中肌上皮 細(xì)胞定量組織學(xué)研究        人和常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物正常涎腺中肌上皮 細(xì)胞定量組織學(xué)研究摘要目的:了解人與不同實(shí)驗(yàn)動(dòng)物涎腺中肌上皮細(xì)胞的差異。方法:用HHF35對(duì)人和動(dòng)物涎腺進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，用計(jì)算機(jī)像分析系統(tǒng)測(cè)量肌上皮細(xì)胞的平均體積比并進(jìn)行比較。結(jié)果:人和動(dòng)物涎腺中肌上皮細(xì)胞的平均體積比存在不同程度的差異。除嚙齒類動(dòng)物外，人和其它動(dòng)物粘液腺中肌上皮細(xì)胞的平均體積比高于漿液腺中者。結(jié)論:涎腺肌上皮細(xì)胞的平均體積比與動(dòng)物種類

2、和涎腺分泌物性能有關(guān)。關(guān)鍵詞實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肌上皮細(xì)胞免疫組織化學(xué)An Immunohistochemical and Morphometric Study of Myoepithelial Cells in Salivary Glands of Human and Experimental AnimalsMa Wenbo, He Zhixiu, Lu Yong,et alCollege of Stomatology, West China University of Medical SciencesAbstractObjective:To investigate whether difference

3、s exist between myoepithelial cells of human beings and experimental animals.Methods: Myoepithelial cells(MeCs) of 8 kinds of experimental animals were studied immunohistochemically using muscle-acting-specific monoclonal antibody HHF35 and morphometrically using image-analysis.Results: There were d

4、ifferences in mean proportional volumes of MeCs between human beings and experimental animals. The mean proportional volumes of mucous acini were more than those of serous acini except salivary glands of rodents.Conclusion: The mean proportional volume of MeCs in salivary glands associates with anim

5、al species and secretion of salivary glands.Key words:experimental animalmyoepithelial cellimmunohistochemistry肌上皮細(xì)胞（myoepithelial cells，MeCs）是動(dòng)物多種外分泌腺（唾液腺、乳腺、淚腺、汗腺,等）的組織成分之一，它位于腺上皮和基底膜之間1,2。肌上皮細(xì)胞的功能目前尚不完全清楚，但是許多研究發(fā)現(xiàn)其胞漿內(nèi)含相當(dāng)多的肌動(dòng)蛋白，因此一般認(rèn)為它具有收縮功能，與腺體細(xì)胞的分泌有關(guān)3,4。光鏡下，通過HE染色是不能區(qū)分肌上皮細(xì)胞的，需要利用酶組化、免疫組化等特殊染色方法來

6、顯示。HHF 35是近幾年開始使用的識(shí)別特異性肌動(dòng)蛋白（muscle-actin-specific）的單克隆抗體，作者使用它來區(qū)別肌上皮細(xì)胞和腺泡，希望通過定量測(cè)定比較肌上皮細(xì)胞的平均體積比，以了解不同動(dòng)物涎腺中肌上皮細(xì)胞的發(fā)育是否存在物種間的差異及與分泌功能的關(guān)系。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)對(duì)象實(shí)驗(yàn)所用動(dòng)物均取自華西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心。選正常成年昆明小白鼠、SD大白鼠、金黃地鼠、中國白兔、山羊、家豬、土種狗、獼猴各5只，雌雄不限，分別以斷頸、放血方法處死，解剖出腮腺、頜下腺、舌下腺。小鼠、大鼠、金黃地鼠的腺體全部用于實(shí)驗(yàn)，其它動(dòng)物則隨機(jī)切取部分組織。另取成人（2035歲）正常腮腺、頜下腺、舌下腺各

7、5例。1.2免疫組化染色使用特異性肌動(dòng)蛋白HHF35單克隆抗體(DAKO公司，美國)和SP試劑盒(ZYMED公司,美國),用常規(guī)方法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，抗體濃度為150。1.3形態(tài)計(jì)量方法將所染切片在40倍物鏡下用Mias-2000型像分析系統(tǒng)（四川大學(xué)計(jì)算機(jī)系像形研究所開發(fā)）進(jìn)行測(cè)試，每張切片隨機(jī)選擇10個(gè)視野，測(cè)量肌上皮細(xì)胞的平均體積比。所得結(jié)果均用±s表示,用t檢驗(yàn)判斷有無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2結(jié)果2.1形態(tài)學(xué)觀察HHF35免疫組化顯示陽性的肌上皮細(xì)胞為棕黃色，鏡下所見，肌上皮細(xì)胞呈薄的、連續(xù)或不連續(xù)的環(huán)狀包繞在腺泡和閏管。在嚙齒類動(dòng)物的腺體中，肌上皮細(xì)胞較稀疏、較細(xì)、陽性信號(hào)也較淡

8、。在人的腮腺中，除了在腺泡和閏管周圍，少數(shù)紋管周圍也可見肌上皮細(xì)胞。在家兔腮腺和小鼠頜下腺未見到肌上皮細(xì)胞的陽性信號(hào)。2.2定量組織學(xué)研究通過像分析儀測(cè)得各種動(dòng)物和人的涎腺組織中肌上皮細(xì)胞的平均體積比(表1)。在腮腺中，猴、狗的肌上皮細(xì)胞明顯多于人，而其它動(dòng)物與人差別不明顯；頜下腺中，豬、狗的肌上皮細(xì)胞多于人，金黃地鼠、大白鼠和兔的肌上皮細(xì)胞少于人，羊和猴與人相差不明顯；舌下腺中，豬、狗、猴的肌上皮細(xì)胞與人的無明顯差異，其它動(dòng)物少于人。表1不同實(shí)驗(yàn)對(duì)象涎腺中肌上皮細(xì)胞平均體積比實(shí)驗(yàn)對(duì)象腮腺頜下腺舌下腺金黃地鼠1.86±0.281.67±0.32*2.17±0.38

9、*小白鼠1.72±0.212.04±0.22*大白鼠1.58±0.351.81±0.25*1.83±0.31*兔1.97±0.34*2.42±0.51*羊2.26±0.193.13±0.563.02±0.39*豬1.98±0.293.79±0.56*4.59±0.66狗3.51±0.47*4.36±0.37*3.48±0.52猴2.88±0.59*2.67±0.354.23±0.73人2.05±0

10、.462.94±0.234.12±0.55*與人相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）3討論肌上皮細(xì)胞是一類兼有上皮和平滑肌特性的細(xì)胞5,6。位于涎腺腺泡和小導(dǎo)管周圍，與上皮細(xì)胞構(gòu)成雙層結(jié)構(gòu)，它與腺泡細(xì)胞、閏管細(xì)胞一樣源于干細(xì)胞。電鏡下觀察，它位于基底膜上，通過橋粒附著在腺泡和導(dǎo)管上，胞漿內(nèi)含有肌動(dòng)蛋白和肌凝蛋白構(gòu)成的肌絲。肌動(dòng)蛋白收縮可幫助腺體排出分泌物。對(duì)肌上皮細(xì)胞進(jìn)行研究的一個(gè)難點(diǎn)是在光鏡下HE切片不能區(qū)分它，需借助于特殊染色。曾有多種組織學(xué)、酶組化染色用于此，但效果不理想。在用免疫組化染色時(shí)，抗體的選擇很重要。有人用 CK14或者肌球蛋白識(shí)別肌上皮細(xì)胞，但 CK14缺乏特異

11、性，它除了作用于人涎腺的肌上皮細(xì)胞外，還作用于導(dǎo)管的外周細(xì)胞，而且對(duì)不同動(dòng)物涎腺的反應(yīng)也不一致；抗肌球蛋白抗體只能用于冰凍組織，應(yīng)用受到限制。作者使用特異性肌動(dòng)蛋白抗體HHF35對(duì)人和動(dòng)物涎腺肌上皮細(xì)胞進(jìn)行染色，取得了良好效果，證明它是一種較適合于肌上皮細(xì)胞免疫組化染色的一種抗體，在動(dòng)物組織中也有較廣泛的交叉反應(yīng)。多數(shù)研究發(fā)現(xiàn)肌上皮細(xì)胞位于腺泡和閏管周圍，在腺泡外其形狀為星形。由胞體向四周伸出多個(gè)突起包繞腺泡；在閏管外它呈梭形，長軸平行于導(dǎo)管。此外Chaudhry發(fā)現(xiàn)人腮腺中的肌上皮細(xì)胞可伸展到紋管，本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了這點(diǎn)，在少數(shù)紋管外可見肌上皮細(xì)胞。各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物涎腺肌上皮細(xì)胞的比較研究尚未見報(bào)道。

12、本實(shí)驗(yàn)通過HHF35免疫組化研究，顯示除家兔的腮腺和小鼠的頜下腺外，8種動(dòng)物和人的涎腺腺泡和閏管外周均有HHF35陽性的肌上皮細(xì)胞。Nagato7認(rèn)為在大鼠腮腺腺泡周圍沒有肌上皮細(xì)胞這點(diǎn)與本文結(jié)果不一致，本實(shí)驗(yàn)觀察到大鼠腮腺腺泡周圍有清晰的肌上皮細(xì)胞。至于兔的腮腺、小白鼠的頜下腺檢查未見到HHF35的陽性反應(yīng)細(xì)胞，是由于它們的肌上皮細(xì)胞不與HHF35反應(yīng)或者是它們本身就缺乏肌上皮，還有待于進(jìn)一步研究。由于肌上皮細(xì)胞主要附著在腺泡，因此它在腺體中的平均體積比不僅與它本身的大小、分布有關(guān)，還與腺泡的多少有關(guān)。在腮腺中，除狗和猴外，其它動(dòng)物的肌上皮細(xì)胞平均體積比與人相似；在頜下腺中，猴和羊的肌上皮細(xì)

13、胞平均體積比與人相似；在舌下腺，猴、豬和狗的肌上皮細(xì)胞平均體積比與人相似。肌上皮細(xì)胞的發(fā)育與許多因素有關(guān)8,而各種動(dòng)物涎腺中的腺泡類型、分泌物是不同的，那么，腺泡分泌物特性的不同是否影響肌上皮細(xì)胞的發(fā)育程度？Nagato認(rèn)為，腺體分泌物的物理性能是其中影響因素之一，粘稠性分泌物的腺體中肌上皮細(xì)胞的發(fā)育要好于水樣分泌物的腺體;同時(shí)他發(fā)現(xiàn)淚腺中肌上皮細(xì)胞的胞漿突起較窄，覆蓋腺泡面積較少，而舌下腺中肌上皮細(xì)胞胞體大、突起寬、覆蓋較大的細(xì)胞面積。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與此一致，粘液腺中肌上皮細(xì)胞的平均體積比普遍大于漿液腺和漿粘液腺，但是這種差別在嚙齒類動(dòng)物不明顯，這說明肌上皮細(xì)胞的發(fā)育與物種有密切的關(guān)系。推測(cè)可能

14、是由于同樣類型的腺體在不同動(dòng)物中其分泌物的性能仍存在著差異。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了在不同動(dòng)物中肌上皮細(xì)胞的發(fā)育存在差異，這種差別與腺體分泌物的性能有一定關(guān)系。但是，肌上皮細(xì)胞發(fā)育的差別是否由細(xì)胞大小或數(shù)目的不同引起還需要進(jìn)一步研究。本課題由衛(wèi)生部科學(xué)基金資助(編號(hào) 94-1-221)作者單位:華西醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院610041參考文獻(xiàn)1Riva A, Serra GP, Proto E, et al. The myoepithelial and basal cells of ducts of human major salivary glands: SEM study. Arch Histol Cyto

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