v24二硝基氟苯柱前衍生化HPLC法測(cè)定阿侖膦酸鈉片的含量

1、v2，4二硝基氟苯柱前衍生化HPLC法測(cè)定阿侖膦酸鈉片的含量         作者：林慧菁，楊樂，蔡爍佳，藍(lán)明雄 【摘要】 目的 建立2，4二硝基氟苯柱前衍生化HPLC法測(cè)定阿侖膦酸鈉片的含量。方法 堿性條件下供試品與2，4二硝基氟苯進(jìn)行衍生化反應(yīng)，采用Ultimate XBC18柱，流動(dòng)相為乙腈0.01 mol·L-1KH2PO4溶液(用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.0)            

2、;                     作者：林慧菁，楊樂，蔡爍佳，藍(lán)明雄【摘要】  目的 建立2，4二硝基氟苯柱前衍生化HPLC法測(cè)定阿侖膦酸鈉片的含量。方法 堿性條件下供試品與2，4二硝基氟苯進(jìn)行衍生化反應(yīng)，采用Ultimate XBC18柱，流動(dòng)相為乙腈0.01 mol·L-1KH2PO4溶液(用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.0)，梯度洗脫,流速為1.0 mL

3、83;min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為365 nm。結(jié)果 阿侖膦酸鈉質(zhì)量濃度在0.051.00 mg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系(r=0.999 6)，平均回收率為99.8%(n=9)。結(jié)論 該方法專屬性好，準(zhǔn)確、靈敏，適合用于阿侖膦酸鈉片的含量測(cè)定。 【關(guān)鍵詞】  阿侖膦酸鈉片;柱前衍生化;高效液相色譜法;含量(Dongguan Institute for Drug Control，Dongguan ,Guangdong 523109,China)Abstract:Objective To develop a HPLC method with precolumn deri

4、vatization for the determination of alendronate sodium tablets.Method Alendronate sodium was derivatized with 2,4dinitrofluorobenin,and the analytical column was Ultimate XBC18.The mobile phase was consisted of acetonitrile and 0.01 mol·L-1 potassium dihydrogen phosphate solution (pH adjusted t

5、o 7.0 with triethylamine). The flow rate was 1.0 mL·min-1. The detection wavelength was 365 nm.Results The linear range was 0.05-1.00 mg· mL-1(r=0.999 6)with the average recovery of 99.8%(n=9).Conclusion The method is simple,accurate,sensitive and suitable for the determination of alendron

6、ate sodium tablets.Key words:alendronate sodium tablets;precolumn derivatization;HPLC;content阿侖膦酸鈉(alendronate sodium)是一種骨代謝調(diào)節(jié)劑，為氨基二膦酸鹽，化學(xué)名為4氨基1羥基亞丁基，1995年被美國(guó)FDA推薦為骨質(zhì)疏松癥的治療用藥1，在國(guó)際上被認(rèn)為是21世紀(jì)最具潛力的骨質(zhì)疏松癥藥物。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中阿侖膦酸鈉片的含量測(cè)定法采用測(cè)量誤差較大的鉬藍(lán)比色法2，不利于控制藥品的質(zhì)量，因此建立一種簡(jiǎn)便的含量測(cè)定方法非常必要。文獻(xiàn)報(bào)道阿侖膦酸鈉片的含量測(cè)定方法有ELSDHPLC法3、FMOC柱前

7、衍生HPLC法4-5。本實(shí)驗(yàn)以2，4二硝基氟苯為衍生化試劑6，采用化學(xué)衍生技術(shù)接入強(qiáng)紫外吸收基團(tuán)，使轉(zhuǎn)化成強(qiáng)紫外吸收衍生物后測(cè)定其含量的方法進(jìn)行測(cè)定。選用的C18色譜柱使用廣泛，同時(shí)避免了FMOC衍生物出現(xiàn)水解的情況，且方法靈敏、操作方便，具有很大的實(shí)用價(jià)值。1 儀器與試藥高效液相色譜儀(Waters 515泵，Waters 2996 PDA檢測(cè)器，Waters Empower軟件);BP211D電子分析天平(德國(guó)Sartorius公司);WB14恒溫水浴箱(德國(guó)Memmert公司)。阿侖膦酸鈉工作對(duì)照品(成都天臺(tái)山制藥有限公司，含量為100.0%)、阿侖膦酸鈉片(成都天臺(tái)山制藥有限公司，批號(hào)

8、100101，標(biāo)示量0.01 g;杭州默沙東制藥有限公司，批號(hào)09440，標(biāo)示量0.07 g;北京萬生藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)20090602，標(biāo)示量0.07 g);2，4二硝基氟苯(東京化成工業(yè)株式會(huì)社，批號(hào)900280000);乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。2 方法與結(jié)果2.1 色譜條件色譜柱為Ultimate XBC18柱;以乙腈為流動(dòng)相A，0.01 mol·L-1 KH2PO4溶液(用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.0)為流動(dòng)相B，以1.0 mL·min-1的流速進(jìn)行梯度洗脫(00.1 min，A為10%25%;0.16.0 min，A為25%;6.06.1 m

9、in;A為25%10%;6.19 min，A為10%)，檢測(cè)波長(zhǎng)為365 nm，進(jìn)樣量為10 L。2.2 衍生化條件的選擇2.2.1 衍生反應(yīng)的pH值 2，4二硝基氟苯在堿性條件下能與含伯或仲胺基的化合物衍生。為確定本反應(yīng)pH值的條件，除了0.05 mol·L-1NaHCO3溶液(pH8.4)、0.05 mol·L-1 Na2CO3溶液(pH11.1)外，還在其基礎(chǔ)上用NaOH試液配制了pH值為9.0、10.0、11.5、12.0的一系列溶液，依法進(jìn)行衍生化反應(yīng)。精密吸取反應(yīng)后的溶液各10 L，分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)無明顯差異，因在pH11附近峰面

10、積達(dá)到最大，故選用0.05 mol·L-1 Na2CO3溶液。見圖1。2.2.2 衍生化試劑與樣品的質(zhì)量比 稱取2，4二硝基氟苯約1.5 g，置50 mL量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，配制成質(zhì)量濃度為30 mg·mL-1的衍生化溶液，并逐步稀釋成0.375、0.75、1.5、3.0、6.0、7.5、15、22.5、30 mg·mL-1的一系列溶液。各取2 mL，分別與對(duì)照品溶液(阿侖膦酸鈉質(zhì)量濃度為0.25 mg·mL-1)9份，每份各3 mL，依法進(jìn)行衍生化反應(yīng)，衍生化試劑與樣品的質(zhì)量比分別為1、2、4、8、16、20、40、60、80。精密吸取反應(yīng)

11、后的溶液各10 L，分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，衍生化試劑與樣品質(zhì)量比為16以上時(shí)，測(cè)得的衍生物峰面積無明顯變化，因此選用15 mg·mL-1的衍生化溶液進(jìn)行反應(yīng)。見圖2。2.2.3 反應(yīng)時(shí)間 取對(duì)照品溶液(阿侖膦酸鈉質(zhì)量濃度為0.25 mg·mL-1)9份，各3 mL，分置10 mL量瓶中，加衍生化溶液2 mL，置40 水浴中分別反應(yīng)2、5、10、20、30、40、60、120 min。取出，放冷，用0.05 mol·L-1Na2CO3溶液稀釋至刻度，搖勻。精密吸取反應(yīng)后的上述溶液各10 L，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，反應(yīng)時(shí)間在20 min后衍生峰面積無明顯變化，因此選用20 min作為反應(yīng)時(shí)間。見圖3。2.3 方法學(xué)考察2.3.1 衍生化溶液