生物制藥工藝復習資料匯總

1、生物制藥工藝 整理者：王思雨 第一章 生物藥物概論 1藥物(Medicine)：用于預防、治療、診斷疾病或調(diào)節(jié)機體生理功能、促進機體康復保健的物質(zhì)。 （有4大類: 預防藥 治療藥 診斷藥 康復保健品）2藥品(Drug)：直接用于臨床的藥物制劑產(chǎn)品，是特殊商品。 藥品的特點：有固定組成，規(guī)定有適應癥、用法與用量和療程，說明毒副反應。 還要有使用有效期，過期藥品不準使用。3. 藥品的特殊性l 社會公共性。藥品是增進健康、延長生命的必要手段，關系到整個人類社會的繁衍和發(fā)展.l 缺乏需求價格彈性.患者不會因為藥品價格的上升而減少或停止購買、使用藥品；對健康人群來說，藥品是無用之物.l 消費者低選擇性。

2、由于用藥需要專業(yè)的醫(yī)學和藥學理論知識，患者一般都不可能自行選擇使用藥品.l 需要迫切性.4.處方藥：必須憑醫(yī)師處方方可調(diào)配、零售、購買和使用的藥品。非處方藥（OTC）：可不憑醫(yī)師處方方可調(diào)配、零售、購買和使用的藥品。l 甲類非處方藥（包裝或使用說明書上標有警示語,“請仔細閱讀藥品使用說明書并按說明使用或在藥師指導下購買和使用！”l 乙類非處方藥5. 中國的三大藥源：化學藥、生物藥、中草藥6.生物藥物（Biopharmaceutics）： 是利用生物體、生物組織或其成分，綜合應用生物化學、微生物免疫學和藥學等原理與方法制造的一大類用于預防、診斷、治療的制品。7.現(xiàn)代生物藥物分四大類：1) 重組D

3、NA藥物（基因工程藥物和蛋白質(zhì)工程藥物）：重組蛋白、多肽、疫苗、單克隆抗體與細胞因子等。2) 基因藥物（genetic medicine）(核酸類藥物)，以遺傳物質(zhì)DNA、RNA為治療物質(zhì)基礎的藥物），如核酸疫苗、反義藥物。3) 天然生物藥物：來自動物、植物、微生物和海洋生物的天然產(chǎn)物。4) 合成或半合成生物藥物:以天然生物藥物為分子母體，經(jīng)化學或生物學方法修飾結(jié)構(gòu)合成的生物藥物。8. 現(xiàn)代生物制藥發(fā)展與展望（1）生物藥物的發(fā)展已走過傳統(tǒng)生物制藥技術(shù)和工業(yè)化生物制藥時代，從1982年10月rhIns（重組人胰島素）上市，正式步入現(xiàn)代生物制藥階段。 第一代重組藥物時代 ：一級結(jié)構(gòu)與功能和天然活性

4、蛋白質(zhì)完全一樣； 第二代重組藥物時代：對天然產(chǎn)物表達物進行簡單修飾，如PEG化或糖基化；第三代重組藥物時代：蛋白質(zhì)工程藥物，在DNA水平上，合理設計、改造、創(chuàng)制新型治療蛋白。目的： 提高活性；減少或消除毒副作用； 提高體內(nèi)外穩(wěn)定性；產(chǎn)生新的功能特性。研究熱點l 哺乳動物細胞表達產(chǎn)物所占比重快速增加l 治療性抗體發(fā)展迅猛；l 干涉RNA（RNAi）RNA interference，是細胞內(nèi)外源性或內(nèi)源性雙鏈RNA，可引起與其同源的mRNA特異性降低，抑制基因表達，是抗病毒、抗腫瘤治療劑的重要設計方向。l 基因治療劑：DNA疫苗與基因藥物發(fā)展迅速，將功能基因與表達載體重組，導入人體細胞，使其在體內(nèi)

5、表達活性蛋白，產(chǎn)生免疫或治療作用。l 新型疫苗的研制： 新型疫苗指應用基因工程技術(shù)和生物化學合成技術(shù)生產(chǎn)的疫苗，包括基因工程亞單位疫苗、重組疫苗、合成肽疫苗、基因工程載體疫苗、核酸疫苗和抗獨特型抗體疫苗等。9. 抗體人源化分為（1）嵌合抗體：用人源抗體恒定區(qū)替換鼠源抗體恒定區(qū)，保留抗體可變區(qū)。 (2)人源化抗體:可變區(qū)中僅CDR（輕鏈可變區(qū)）為鼠源，其FR及恒定區(qū)均來自人源。10.生物藥物的特性 （1）藥理學特性： l 治療的針對性強 ,治療的生理、生化機制合理，療效可靠。細胞色素針對組織缺氧所致疾病具有顯著成效l 藥理活性高-IFN純品的比活mgl 毒副作用小，營養(yǎng)價值高.-氨基酸、蛋白質(zhì)、

6、脂類 l 生物副作用常有發(fā)生.-過敏反應、發(fā)熱。（2）在生產(chǎn)、制備中的特殊性l 原料中的有效物質(zhì)含量低.胰島素的含量0.002%l 生物活性物質(zhì)組成復雜、穩(wěn)定性差大分子物質(zhì)（分子量大，結(jié)構(gòu)復雜）l 易腐敗、染菌l 注射用藥特殊要求（無熱源、不過敏、無不溶顆粒）（3）檢驗上的特殊性：均一性安全性、穩(wěn)定性、有效性、理化檢驗、生物活性檢驗11.生物藥物的分類：1、按藥物的化學本質(zhì)和化學特性來分（1）氨基酸及其衍生物類藥物胱氨酸（2）多肽和蛋白質(zhì)類藥物-白蛋白、免疫球蛋白（3）酶和輔酶類藥物-胃蛋白酶、胰酶、尿激酶（4）核酸及其降解物和衍生物類藥物（5）糖類藥物-粘多糖殼聚糖（6）脂類藥物卵磷脂（7）

7、細胞生長因子類（8）生物制品類-疫苗類2. 按原料的來源分類（1）人體組織來源的生物藥物（2）動物組織來源的生物藥物（3）植物組織來源的生物藥物（4）微生物來源的藥物（5）海洋生物來源的藥物3.按生理功能和用途分類 （1）治療藥物腫瘤、愛滋病、心腦血管疾病等。 （2）預防藥物傳染性強的疾病，菌苗、類毒素 （3）診斷藥物速度快、靈敏度高、特異性強。免疫診斷、酶診斷、放射性診斷、基 因診斷試劑。 （4）其它生物醫(yī)藥用品生化試劑、保健品、化妝品、食品、醫(yī)用材料。 回顧1、人類預防疾病、治療疾病的三大藥源化學藥物、生物藥物、中草藥。2、生物藥物分為基因工程藥物、基因藥物 、天然生化藥物、 合成或半合成

8、藥物四大類。3、下列藥物不屬于萜類藥物的是：青蒿素、b. 紫杉醇、c. 齊墩果酸、d.槲皮素4、下列藥物中不屬于黃酮類藥物的是：a.山奈酚、b. 花青素、c.異鼠李素、d.金線蓮苷5、下列物質(zhì)不屬于抗生素的是a. 乙酰水楊酸、b. 青霉素、C.頭孢菌素、d. 紅霉素第二章：生物制藥工藝技術(shù)基礎1. 天然生化藥物：以人體組織、動物、植物、微生物和海洋生物為原料，應用生物化學的原理、方法與生物分離技術(shù)加工制造的一大類天然生物藥物。2.生物材料來源:動物臟器；血液、分泌物和其他代謝物；海洋生物；植物；微生物；3.生物材料的選擇原則:（1）有效成分的含量生物品種，選擇含有效成分并且含量高的生物品種。合

9、適的組織器官。（2）雜質(zhì)情況避免與目的物性質(zhì)相似的雜質(zhì)對純化過程的干擾。（3）來源來源豐富的材料，最好能一物多用。4.生物材料采集、預處理與保存 （1）防止污染與感染 （2）防止生物活性成分的失活與變性常用的保存方法：1冷凍法，先速凍后，置于 40 低溫保存；2有機溶劑脫水法 : 丙酮3防腐保鮮劑5. 常用的提取方法有那些?每種提取方法適用于那些生物活性物質(zhì)?1）酸、堿、鹽水溶液提取法（提取各種水溶性、鹽溶性的生化物質(zhì)）2）表面活性劑提取方法與反膠束提取方法l 陽離子 型表面活性劑，易引起蛋白質(zhì)等生物大分子變性。CTAB可以用于核酸的提取。l SDS 可以破壞核酸與蛋白質(zhì)的結(jié)合，又可以抑制核酸

10、酶活性，用于核酸提取。l 非離子型去污劑用于蛋白質(zhì)和酶的提取。l 反膠束：表面活性劑分散于連續(xù)的有機相中自發(fā)形成非極性基團在外，極性基團則在內(nèi)的納米尺度的聚集體。極性核具有溶解極性物質(zhì)的能力3）有機溶劑提?。ㄓ糜诓蝗苡谒闹?、脂蛋白和膜結(jié)合蛋白） 分為： 固-液提取、液-液萃取 4）雙水相萃取法：水相中加入兩種親水性聚合物，超過一定濃度時，會產(chǎn)生兩相。利用生化活性物質(zhì)在兩相中分配能力的不同，實現(xiàn)分離。l 親水聚合物：聚乙二醇（PEG)/葡聚糖、PEG/無機鹽l 應用范圍： 對有機溶劑敏感的生物活性物質(zhì)5）超臨界萃取法： 超臨界流體與待分離的物質(zhì)接觸，選擇性地把極性大小、沸點高低和分子量大小的

11、成分依次萃取出來。然后通過減壓、升溫的使超臨界流體變成氣體，被萃取物質(zhì)則完全或基本析出，達到分離提純的目的。6.影響提取效率的因素1 殘留量（生產(chǎn)上2-3次提取，溶劑用量為生物材料的2-5倍。）2 溫度（多數(shù)物質(zhì)溶解度隨溫度升高而增加；多糖類浸煮提取，酶類物質(zhì)、萜類物質(zhì)低溫提取）3 酸堿度（ 選擇合適PH，直接影響目的物與雜質(zhì)的溶解度；抑制酶類的水解破壞作用）4 鹽濃度（鹽溶現(xiàn)象、緩沖溶液）7.提取方法的選擇1）溶劑選擇 依據(jù)生物材料和目的物性質(zhì)選擇合適的溶劑。2）選擇添加劑l 緩沖系統(tǒng)：磷酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、Tris緩沖溶液l 添加保護劑：對生理活性物質(zhì)的活性集團進行保護；巰基乙醇抗

12、氧化劑,防止酚類物質(zhì)氧化褐變。酶抑制劑EDTA抑制DNAase活性3）其他保護措施 避光保存、劇烈震蕩、過酸或高溫等8. 常用濃縮方法：鹽析：添加中性鹽，使蛋白質(zhì)或酶從稀溶液中沉淀出來 （硫酸氨）有機溶劑沉淀：在生物大分子水溶液中加入有機溶劑，生物大分子的溶解度明顯降低。高分子化合物脫水：（1）葡聚糖凝膠濃縮（2）聚乙二醇濃縮超濾：用不同型號的超率膜濃縮不同分子量的生物大分子。真空濃縮或薄膜濃縮：原理：增加汽化表面積，使液體形成薄膜而蒸發(fā)。兩種方式：（1）液膜流過加熱面蒸發(fā)；（2）料液劇烈沸騰，形成泡沫，通過泡沫內(nèi)外面蒸發(fā)。9.干燥：減壓干燥；噴霧干燥；冷凍干燥2）噴霧干燥：通過機械作用，將需

13、干燥的物料，分散成很細的像霧一樣的微粒與熱空氣接觸，在瞬間將大部分水分除去，使物料中的固體物質(zhì)干燥成粉末。3）冷凍干燥：含水物料冷凍到冰點以下，使水轉(zhuǎn)變?yōu)楸?，然后在真空下將冰轉(zhuǎn)變?yōu)檎魵舛サ母稍锓椒?。冷凍工藝三個階段：預凍結(jié)、升華、再干燥。10. 生化制藥工藝中分離制備方法的特點生物材料組成復雜；含量極低；生物活性物質(zhì)易變性；采用逐級分離的方法；各種參數(shù)不穩(wěn)定；純度均一性11. 分離制備方法的原理分子形狀和大??；帶電性差異；極性大小和溶解度不同；吸附性質(zhì)不同；配體特異性。12.分離制備方法的基本程序和設計（1）分離物研究目的、建立相應的分析鑒定方法（2）制備物理化性質(zhì)和穩(wěn)定性預備實驗（3）材

14、料處理、抽提方法的選擇（4）分離純化方法的摸索（5）產(chǎn)物均一性測定13.分離純化方法綜合評價：分辨能力；重現(xiàn)性；回收率14.微生物菌種選育菌種的分離和篩選：1含菌樣品的收集、2富集培養(yǎng)、3菌種的分離純化菌種選育：（1）自然選育：依據(jù)微生物在一定條件下自發(fā)突變原理，通過分離、篩選，除去衰變菌株，獲取高產(chǎn)菌株，達到強化、復壯菌種、穩(wěn)定生產(chǎn)目的。（2）誘變育種：將生物體暴露于物理的、化學的或生物的誘變因子下，促使生物體發(fā)生突變，從而篩選優(yōu)良突變株的過程。出發(fā)菌株的選擇：a. 穩(wěn)定性挑選純系菌株，排除異核體系和異質(zhì)體菌株。b. 具備某種優(yōu)良性狀的菌株；c. 對誘變劑敏感; d. 生理狀態(tài)及生長發(fā)育時間

15、，處于轉(zhuǎn)錄或翻譯狀態(tài)優(yōu)于靜止或休眠狀態(tài)誘變處理：物理（紫外、射線）、化學（堿基類似物、化學修飾堿基的突變劑、移碼突變劑）作用于生長態(tài)的細胞、生物誘變（噬菌體）。突變的篩選：隨機篩選和半理化篩選。（3）現(xiàn)代菌種選育：雜交育種、原生質(zhì)體融合、基因工程技術(shù)15.菌種保藏方法：斜面低溫保存、液體石蠟法、甘油冷凍保藏法、冷凍干燥、液氮保藏法16.滅菌方法：加熱滅菌、輻射滅菌、過濾滅菌、化學滅菌、氣體滅菌法17.培養(yǎng)基與發(fā)酵設備的滅菌：1）實罐滅菌（實消）、2）空罐滅菌（空消）3）連續(xù)滅菌 優(yōu)點：滅菌溫度較高（126-132）、時間短（5-7min） 不足：操作麻煩，相對染菌的機會多。4）發(fā)酵附屬設備和管

16、路的滅菌回顧：1. 生物材料的選擇原則（1）有效成分的含量 生物品種，選擇含有效成分并且含量高的生物品種。 合適的組織器官。（2）雜質(zhì)情況避免與目的物性質(zhì)相似的雜質(zhì)對純化過程的干擾。（3）來源來源豐富的材料，最好能一物多用。2. 黃酮類化合物生物合成的起始前體是 苯丙氨酸，分叉前體是 黃烷酮，直接前體是二氫黃酮醇。3. 單萜和二萜合成于植物的質(zhì)體中, 三萜和倍半萜的中間前體是FPP。第三節(jié) 看書第三章 預處理和固液分離1.選擇預處理方法的依據(jù)（防止目的物失活放在首位）l 生物活性物質(zhì)來源、存在狀態(tài)“胞內(nèi)” 、“胞外” 如： 微生物酶胞外培養(yǎng)液 DNA與電子傳遞系統(tǒng)物質(zhì)（氧化磷酸化的酶系）線粒體

17、l 后續(xù)工藝要求l 目的物穩(wěn)定性可被材料中酶、微生物破壞，還可能受酸、堿、鹽、重金屬離子、機械攪拌、溫度、甚至空氣和光線作用改變活性。 2. 細胞培養(yǎng)液的預處理（一）雜蛋白質(zhì)的去除 1、凝聚作用：在某些電解質(zhì)作用下，使擴散雙電層的排斥電位（即電位）降低，破壞膠體系統(tǒng)的分散狀態(tài)，而使膠體粒聚集的過程。（ Al2(SO4)3.18H2O(明礬）、 AlCl3.6H2O、FeCl3.ZnSO4） 2、絮凝作用：指在某些高分子絮凝劑存在下，在懸浮粒子之間產(chǎn)生架橋作用而使膠粒粗大絮凝團的過程。（殼聚糖、海藻酸鈉） 3、變性沉淀加熱 紫外 有機溶劑等 4、等電點沉淀 5、加各種沉淀劑沉淀-三氯乙酸鹽 各種

18、金屬(Ag+ Cu2+ Zn2+)等 6、吸附-例如四環(huán)素發(fā)酵液中加入黃血鹽和硫酸鋅，生成亞鐵氰化 鋅鉀的膠狀沉淀，能將雜蛋白質(zhì)和菌體等黏附在其中而除去。（二）、多糖的去除 可用酶轉(zhuǎn)化為單糖黏多糖可與一些陽離子表面活性劑如十六烷基溴化銨（CTAB）生成沉淀去除。（三）、高價金屬離子的去除 1、離子交換法 2、沉淀法 Ca2+ -草酸 Mg2+- 磷酸鹽 Fe3+- 黃血鹽3.破碎細胞的目的使細胞壁和細胞膜受到不同程度的破壞（增大通透性）或破碎，釋放其中的目標產(chǎn)物。（1） 機械法1、高壓勻漿器：利用液相剪切力與固定表面撞擊所產(chǎn)生的應力，使細胞破碎。2、珠磨法：珠子之間及珠子與細胞之間相互剪切、碰

19、撞，促使細胞壁破裂，釋出內(nèi)含物。3. 超聲波破碎：在超聲波作用下液體發(fā)生空化作用，空穴的形成、增大和閉合產(chǎn)生極大的沖擊波和剪切力，使細胞破碎。（二）非機械法 1、干燥法空氣干燥、真空干燥、噴霧干燥、冷凍干燥2、物理法1）滲透壓沖擊法-先把細胞放在高滲溶液中，細胞發(fā)生收縮，然后將介質(zhì)快速稀釋或?qū)⒓毎D(zhuǎn)入水或緩沖液中，細胞快速膨脹，使產(chǎn)物釋放至溶液2）反復凍融法 3）微波加熱3、化學法：通過改變細胞壁或膜的通透性，從而使內(nèi)含物有選擇地滲透出來，這種處理方法稱為滲透法?；瘜W滲透法的優(yōu)缺點：（與機械法比較）1)優(yōu)點： 對產(chǎn)物釋放有一定的選擇性. 細胞外形保持完整，碎片少，有利于后分離. 核酸釋出量少，

20、漿液粘度低，便于進一步提取.2）缺點： 時間長，效率低. 化學試劑具有毒性,進一步分離時需要用透析法除去. 通用性差,某種試劑只用于某些特定類型的細胞.4、 酶溶法生物法：利用溶解細胞壁的酶處理菌體細胞，使細胞壁消化溶解，受到部分或完全破壞的方法。溶菌酶: 它是一個小分子酶，能破壞細菌細胞壁的糖鏈，從而破壞其完整結(jié)構(gòu)，使細菌裂解死亡。 酶溶法處理細胞存在的問題： 存在酶產(chǎn)物的抑制問題，使胞內(nèi)物質(zhì)釋放率降低。 酶價高，限制了大規(guī)模應用。目前僅用于實驗室規(guī)模。 通用性差，不同的菌株用不同的酶。5. 選擇破碎方法的依據(jù)： 1、規(guī)模及成本 2、目的物的穩(wěn)定性3、破碎效果和產(chǎn)物釋放率6. 液-固分離(過

21、濾）l 常規(guī)過濾：溶劑和小于膜孔的溶質(zhì)在壓力的驅(qū)動下透過膜，大于膜孔的顆粒被截留，通常堆積在膜面上.但是,隨著時間的增加，膜面上堆積的顆粒也在增加，過濾阻力增大，膜滲透速率下降。因此必須周期性的停下來清洗膜表面的污染層，或者更換膜.操作簡單，適于小規(guī)模場合。 l 錯流過濾：在泵的推動下料液平行于膜面流動，與死端過濾不同的是料液流經(jīng)膜面時產(chǎn)生的剪切力把膜面上滯留的顆粒帶走，從而使污染層保持在一個較薄的水平。7. 固相析出分離法一 、鹽析Ø 定義：是利用各種生物分子在濃鹽溶液中溶解度的差異，通過向溶液中引入一定數(shù)量的中性鹽，使目的物或雜蛋白以沉淀析出。Ø 原理：（1）形成離子對

22、，部分中和了蛋白質(zhì)的電性，排斥作用減弱而能相互靠攏，聚集起來。 （2）中性鹽的親水性比蛋白質(zhì)大，使蛋白質(zhì)脫去了水化膜，使其沉淀。Ø 影響鹽析的因素1無機鹽的種類（半徑小的高價離子在鹽析時的作用較強，陰離子的鹽析效果比陽離子好，尤其以高價陰離子更為明顯）、2溶質(zhì)（蛋白質(zhì)等）種類的影響、3蛋白質(zhì)濃度的影響、4溫度的影響、5 pH的影響2. 有機溶劑沉淀法：向水溶液中加入一定量親水性的有機溶劑，降低溶質(zhì)的溶解度，使其沉淀析出的分離純化方法。l 原理：（1）降低了介質(zhì)的介電常數(shù)，使溶質(zhì)分子之間的靜電引力增加，聚集形成沉淀。 （2）水溶性有機溶劑本身的水合作用降低了自由水的濃度，壓縮了親水溶質(zhì)

23、分子表面原有水化層的厚度，降低了它的親水性，導致脫水凝集。l 優(yōu)點：乙醇等有機溶劑易除去，產(chǎn)品更純凈；密度差較大，離心收集。l 缺點： 容易使蛋白質(zhì)變性，操作常需低溫， 成本高，需防火防爆.三、等電點沉淀法 蛋白質(zhì)在靜電狀態(tài)時顆粒之間的靜電斥力最小，因而溶解度也最小，各種蛋白質(zhì)的等電點有差別， 可利用調(diào)節(jié)溶液的pH達到某一蛋白質(zhì)的等電點使之沉淀。與鹽析法結(jié)合用。4. 生物堿試劑和某些酸類沉淀法五、重金屬鹽沉淀法 ：當溶液PH>PI，蛋白質(zhì)顆粒帶負電荷，易與重金屬離子生成沉淀六、高分子聚合物沉淀： 水溶性非離子型高分子聚合物，能使蛋白質(zhì)水合作 用減弱而發(fā)生沉淀。 七、表面活性劑 8.結(jié)晶技

24、術(shù)（很好的選擇性、同類分子或離子排列、純度較高、成本低、設備簡單、操作方便）結(jié)晶：溶液中的溶質(zhì)在一定條件下，因分子有規(guī)則的排列而結(jié)合成晶體，晶體的化學成分均一，具有各種對稱的晶體，其特征為離子和分子在空間晶格的結(jié)點上呈規(guī)則的排列。固體有結(jié)晶和無定形兩種狀態(tài)(1)結(jié)晶：析出速度慢，溶質(zhì)分子有足夠時間進行排列，粒子 排列有規(guī)則。(2)無定形固體：析出速度快，粒子排列無規(guī)則.穩(wěn)定區(qū)和亞穩(wěn)定區(qū)而在SS曲線和TT曲線之間的區(qū)域為亞穩(wěn)定區(qū)，此刻如不采取一定的手段（如加入晶核），溶液可長時間保持穩(wěn)定；加入晶核后，溶質(zhì)在晶核周圍聚集、排列，溶質(zhì)濃度降低，并降至SS線；介于飽和溶解度曲線和過飽和溶解度曲線之間的

25、區(qū)域，可以進一步劃分刺激結(jié)晶區(qū)和養(yǎng)晶區(qū)不穩(wěn)定區(qū)該區(qū)域任意一點溶液均能自發(fā)形成結(jié)晶，溶液中溶質(zhì)濃度迅速降低至SS線（飽和）；晶體生長速度快，晶體尚未長大，溶質(zhì)濃度便降至飽和溶解度，此時已形成大量的細小結(jié)晶，晶體質(zhì)量差；工業(yè)生產(chǎn)中通常采用加入晶種，并將溶質(zhì)濃度控制在養(yǎng)晶區(qū)，以利于大而整齊的結(jié)晶包括三個過程：(1) 形成過飽和溶液;溶液達到過飽和狀態(tài)是結(jié)晶的前提；過飽和度是結(jié)晶的推動力。(2) 晶核形成;(3) 晶體生長。影響晶體生長速度的因素：(1)雜質(zhì)：改變晶體和溶液之間界面的滯留層特性，影響溶質(zhì)長入晶體、改變晶體外形、因雜質(zhì)吸附導致的晶體生長緩慢；(2)攪拌：加速晶體生長、加速晶核的生成；(3

26、)溫度：促進表面化學反應速度的提高，增加結(jié)晶速度；提高晶體質(zhì)量的方法（晶體質(zhì)量包括三個方面的內(nèi)容：晶體大小、形狀和純度）(1)影響晶體大小的因素：溫度、晶核質(zhì)量、攪拌等(2)影響晶體形狀的因素：改變過飽和度、改變?nèi)軇w系、雜質(zhì)(3)影響晶體純度的因素：母液中的雜質(zhì)、結(jié)晶速度、晶體粒度及粒度分布9. 生物制藥工藝中試放大設計中試放大目的與規(guī)模1目的：（1）建立穩(wěn)定工藝、大批量制備足量合格產(chǎn)品，供應臨床前與臨床研究；（2）研究工藝參數(shù)制定工藝規(guī)程和檢定規(guī)程，為正式生產(chǎn)提供工藝參數(shù)，保證能在以后生產(chǎn)中應用。第十章 離心技術(shù)1. 離心技術(shù):利用旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的離心力代替重力，加速固體沉降速度的一種分離方式。

27、2. 沉降作用：懸浮液靜置時，在重力作用下，密度大于周圍溶液的固體顆粒逐漸下沉。3.沉降速度：即在離心力作用下，物質(zhì)粒子于單位時間內(nèi)沿離心力方向移動的距離。4.沉降系數(shù)：在單位離心力場中，顆粒的沉降速度謂之“沉降系數(shù)”5.離心機的分類 1按轉(zhuǎn)速高低及是否有冷凍來分 （1）普通離心機，小于6000rpm （2）高速離心機，800025000rpm （3）超速離心機，25000-80,000rpm 可以達到10萬轉(zhuǎn)以上 2按結(jié)構(gòu)分類 （1）臺式離心機 （2）立式離心機 （3）沉降式離心機 （4）轉(zhuǎn)頭式離心機 （5）電動式離心機6. 轉(zhuǎn)子(1) 角度轉(zhuǎn)子 (2)水平轉(zhuǎn)子 (3)區(qū)帶轉(zhuǎn)子 (4) 垂直

28、管轉(zhuǎn)子 (5) 連續(xù)離心轉(zhuǎn)子 (6)細胞洗脫轉(zhuǎn)子7. 離心管：由管體和蓋組件兩部分組成 1)容量 2)形狀 3)最大離心力 4)耐腐蝕性 5)滅菌 6)透明度 7)能否刺穿 8)管帽8.超速離心機（由驅(qū)動、真空、恒溫、控制、潤滑系統(tǒng)組成）9.離心方法：1）差分離心法（差速離心法）：根據(jù)不同大小和密度的顆粒在離心場中沉降速度的差異進行離心分離。2）速率區(qū)帶離心：主要是利用生物大分子或亞細胞顆粒不同的沉降常數(shù)，在離心后分布在不同的預先鋪制好的介質(zhì)密度區(qū)，從而達到分離、純化的目的。離心密度介質(zhì)主要用蔗糖也可用甘露糖、甘油、多聚糖類、中性硅膠油。3）等密度梯度離心：主要是利用離心管某些適當?shù)牡头肿欲}(

29、如氯化艷，硫酸艷等)的水溶液，在離心過程中由離心力和溶質(zhì)分子擴散力達成平衡后形成溶質(zhì)分子的密度梯度。這些大分子按其固有的密度(浮標密度)分布在相應的密度區(qū)。第四章 萃取分離1.廣義的溶劑萃取法包括液-固萃取(浸取)和液-液萃取。2.萃取: 一般指用有機溶劑將物質(zhì)從水相轉(zhuǎn)移到有機相的過程.（利用分配系數(shù)的差別）3.反萃取: 將萃取液與反萃取劑（一般為水溶液）相接觸，使某種被萃入有機相的溶質(zhì)轉(zhuǎn)入水相的過程，可看作是萃取的逆過程。4.萃取分類根據(jù)操作方式可分為：單級萃取、多級萃取。根據(jù)萃取特征可分為： 雙水相萃取、超臨界萃取、反膠束萃取Ø 單級萃取最多為一次平衡，故分離程度不高，只適用于溶

30、質(zhì)在萃取劑中的溶解度很大或溶質(zhì)萃取率要求不高的場合。Ø 多級錯流萃取：料液經(jīng)過萃取后的萃余液再用新鮮的萃取劑進行萃取的方法。 （特點：萃取率比較高，但萃取劑用量較大，溶劑回收處理量大，能耗較大。）Ø 多級逆向萃?。涸弦汉洼腿┮来伟捶捶较蛲ㄟ^各級，最終萃取相從加料一端排出，并引入溶劑回收設備中，最終萃余相從加入萃取劑的一端排出，引入溶劑回收設備中。 （特點：可用較少的萃取劑獲得比較高的萃取率，工業(yè)上廣泛采用）5. 萃取劑的選擇：1）化學穩(wěn)定性2）物理性質(zhì)（1）溶解度（2）密度（3）界面張力（4）粘度3）回收難易度4）其他因素6.影響溶劑萃取的因素：分配系數(shù)（主要）、過程中

31、產(chǎn)物的局部破壞、蛋白質(zhì)的乳化、pH、溫度和萃取時間、鹽析作用的影響7.乳化和破乳化乳化劑（多為表面活性劑） 分子結(jié)構(gòu)特點：一般是由親油基和親水基兩部分組成的，即一端為親水基團或極性部分，另一端為疏水性基團或非極性部分 乳化劑使乳狀液穩(wěn)定與以下因素有關： （1）界面膜形成 （2）界面電荷的影響 （3）介質(zhì)黏度乳狀液的破壞： 加入表面活性劑、 離心、 加電解質(zhì)、 加熱、 吸附法破乳、高壓電破乳、稀釋法8.雙水相萃取：利用不同的高分子溶液相互混合可產(chǎn)生兩相或多相系統(tǒng)，靜置平衡后，分成互不相溶的兩個水相，利用物質(zhì)在互不相溶的兩水相間分配系數(shù)的差異來進行萃取的方法，稱為雙水相萃取法。 特點：能保留產(chǎn)物的

32、活性，操作可連續(xù)化，可純化蛋白質(zhì)25倍。葡聚糖與聚乙二醇：上相富含PEG，下相富含葡聚糖PEG/硫酸鹽或磷酸鹽體系相圖相圖右上部為兩相區(qū)，左下部為均相區(qū)，兩相與均相的分界線叫雙節(jié)線。組成位于A點的系統(tǒng)實際上由位于C、B兩點的兩相所組成，BC稱為系線。當系線向下移動時，長度逐漸減小，表明兩相的差別減小，當達到K點時，兩相間差別消失，K點稱為臨界點。影響雙水相萃取的因素：（1） 成相高聚物的分子量：一般原則，對于給定的相系統(tǒng)，如果一種高聚物被低分子量的同種高聚物所代替，被萃取的大分子物質(zhì),如蛋白質(zhì)、核酸、細胞粒子等，將有利于在低分子量高聚物一側(cè)分配.對小分子物質(zhì)的分配，影響較小。（2） 成相聚合物

33、濃度界面張力雙水相萃取時，如果相系統(tǒng)組成位于臨界點附近，則蛋白質(zhì)等大分子的分配系數(shù)接近于1。高聚物濃度增加，系統(tǒng)組成偏離臨界點，蛋白質(zhì)的分配系數(shù)也偏離1，即K1或K1.（3）電化學分配鹽類的影響各種鹽的分配系數(shù)存在著微小的差異，產(chǎn)生了相間電位。由于蛋白質(zhì)等大分子在水溶液中常帶有電荷，相間電位造成的靜電力能影響所有帶電大分子和帶電細胞粒子在兩相中的分配。（4）疏水效應 （5）溫度及其它因素雙水相萃取的應用：蛋白質(zhì)、酶、核酸、人生長激素、干擾素等的分離純化。9.反膠束萃取反膠束（reversed micelle），也稱反膠團或反微團，是表面活性劑分散在連續(xù)的有機相中自發(fā)形成的納米尺度的一種聚集體。

34、基本原理：表面活性劑溶于非極性溶劑中，并使其濃度超過臨界膠束濃度，便會在有機溶劑內(nèi)形成聚集體，非極性基團在外，極性基團則排列在內(nèi)，形成一個極性核，此極性核具有溶解極性物質(zhì)的能力。當含有此種反膠束的有機溶劑與蛋白質(zhì)的水溶液接觸后，蛋白質(zhì)及其他親水性物質(zhì)能夠溶于極性核內(nèi)部的水中，由于周圍的水層和極性基團的保護，蛋白質(zhì)不與有機溶劑接觸，從而不會造成失活。目前用得最多的是AOT，化學名為丁二酸乙基己基酯-磺酸鈉反膠束分離目標蛋白分為兩個過程a. 萃取過程:目標蛋白質(zhì)從主體溶液轉(zhuǎn)移至反膠束溶液中的過程；b. 反萃取過程:目標蛋白質(zhì)從反膠束溶液中轉(zhuǎn)移至第二水相(或以固體的形式游離出來)的過程。這些過程可連

35、續(xù)操作，反膠束可在兩套系統(tǒng)中循環(huán)。影響因素1 表面活性劑的種類：早期用一種表面活性劑,現(xiàn)在混合體系的研究較多2 水相pH值：決定蛋白質(zhì)表面帶電基團的離子化狀態(tài),與表面活性劑的頭部基團有相互作用3 溫度：提高溫度可使反膠束排斥水,起濃縮作用4 離子強度：降低帶電蛋白與反膠束極性基團的相互作用,并導致高離子強度下反膠束顆粒變小5 親和反膠束萃?。簩胗H合配基,提高萃取率和選擇性10.超臨界流體萃取技術(shù)超臨界流體(SCF)：是指處于臨界溫度(Tc)和臨界壓力(Pc)以上，其物理性質(zhì)介于氣體與液體之間的流體。特性：(1)超臨界狀態(tài)下的流體對溶質(zhì)的溶解度大大地增加了，一般可達幾個數(shù)量級，而在某些條件下甚

36、至可達到按蒸氣壓計算的1010倍；(2)超臨界流體的密度與液體很接近，而它又具有氣體擴散性能；(3)在超臨界狀態(tài)下氣體和液體兩相的界面消失，表面張力為零，反應速度最大，熱容量、熱傳導率等出現(xiàn)峰值；(4)在臨界點附近，壓力和溫度的微小變化可對溶劑的密度、擴散系數(shù)、表面張力、黏度、溶解度、介電常數(shù)等帶來明顯的變化。(5)超臨界流體的這些特殊性質(zhì)，使其成為良好的分離介質(zhì)和反應介質(zhì)，根據(jù)這些特性發(fā)展起來的超臨界流體技術(shù)在分離、提取、反應、材料等領域得到了越來越廣泛的開拓利用。 常見的超臨界流體還有二氧化碳、乙烷、丙烷等。超臨界二氧化碳萃取的影響因素：溫度、壓力、助溶劑（夾帶劑）、二氧化碳流量。第十一章

37、 膜分離技術(shù)1.膜分離過程的特點： a. 高效：由于膜具有選擇性，它能有選擇性地透過某些物質(zhì)，而阻擋另一些物質(zhì)的透過。選擇合適的膜，可以有效地進行物質(zhì)的分離，提純和濃縮。b. 節(jié)能：多數(shù)膜分離過程在常溫下操作，被分離物質(zhì)不發(fā)生相變, 是一種低能耗，低成本的單元操作。c. 過程簡單、容易操作和控制。d. 分離系數(shù)大，應用廣泛。e. 適合熱敏物質(zhì)的分離。f. 工藝適應性強；無污染。2. 透析：采用半透膜為濾膜，使試樣中的小分子通過擴散作用不斷透出膜外，而大分子不能透過，從而實現(xiàn)分離的一種膜過濾方法。常用于脫鹽。3. 超濾：以特殊的超濾膜為分離介質(zhì)，以膜兩側(cè)的壓力差為推動力，將不同的分子量的物質(zhì)進行

38、選擇性分離的一種技術(shù)。用途： 膜質(zhì)分為兩層：功能層和支持層。超濾膜的選用應考慮：1） 分子量截留值：阻留率達90%以上的最小被截留物質(zhì)的分子量。2） 流動速度：一定壓力下，每分鐘通過單位面積膜的液體量。3） 其他：操作溫度、化學耐受性、膜的吸附性質(zhì)、無菌處理4. 微孔膜過濾技術(shù)：目前應用最廣泛的一種分離分析維西顆粒和超凈除菌的手段。特點：設備簡單、操作簡便、快速、分辨率高、重現(xiàn)性好。應用范圍：Ø 0.010.05m：噬菌體、病毒或大的膠體顆粒Ø 0.1m：試劑的超凈、分離沉淀和膠體懸液。Ø 0.2m：高純水的制備、制劑除菌、細菌計數(shù)、空氣病毒定量測定等。Ø

39、; 0.45m：水的超凈化處理、色譜分析時流動相的處理、放射免疫測定、光測介質(zhì)溶液的凈化以及鍋爐水Ø 中Fe(OH)3的分析等。微孔膜過濾的應用 l 在生化中的應用（1）溶液澄清（2） 結(jié)合測定（3） 蛋白質(zhì)及核酸含量測定l 在制藥工業(yè)中的應用（1） 藥液中微粒及細菌的濾除（2） 抗生素的無菌檢驗5.反滲透：在高于溶液滲透壓的壓力作用下，只有溶液中的水透過膜，而所有溶液中的大分子、小分子有機物及無機物全被戳留住，反滲透膜的孔徑為0.lnm1nm。6. 高效液相色譜制備型高效液相色譜與分析型高效液相色譜法的區(qū)別： 流速不同 檢測池不同 上樣量不同 色譜柱不同第14章 微生物制藥工藝（一

40、）內(nèi)脂類抗生素 （見書本）（二）氨基糖苷類抗生素（霉素；米星）1.抗菌作用1. 對需氧G-桿菌作用強大；大部分對銅綠假單胞菌有效（鏈霉素、卡那霉素除外） 2. 對G+、G-球菌有一定抗菌作用3. 少數(shù)對結(jié)核桿菌有抗菌作用（ 鏈霉素、卡那霉素）4. 對需氧菌有效，對厭氧菌無效，（厭氧菌天然耐藥）2.抗菌機制l 抑制細菌蛋白質(zhì)合成：抑制70S起始復合物形成；造成mRNA密碼錯譯；阻止肽鏈的脫落；與核糖體30S亞基結(jié)合干擾細菌蛋白合成的全過程l 干擾細菌細胞膜的通透性，細胞膜通透性增加，破壞細菌體屏障保護作用。3. 耐藥性靶位改變；膜對藥物通透性降低；產(chǎn)生鈍化酶 ： 如磷酸轉(zhuǎn)移酶、核苷轉(zhuǎn)移酶、乙酰轉(zhuǎn)

41、移酶4. 不良反應耳毒性 ototoxicity 腎毒性 nephrotoxicity 神經(jīng)肌肉接頭阻斷 neuromuscular blockade 過敏反應（鏈霉素） 5. 鏈霉素（強堿性、親水性、難溶于有機溶劑）Ø 鏈霉素(streptomycin)：第一個用于臨床的氨基糖苷類抗生素，亦是第一個抗結(jié)核藥。Ø 副作用：易引起過敏反應，引起前庭功能障礙和聽覺喪失，但腎毒性少見。Ø 穩(wěn)定性：鏈霉素比較穩(wěn)定；鏈霉素水溶液比較穩(wěn)定，但其穩(wěn)定性受溫度和PH影響較大Ø 鏈霉素的制備（離子交換法） 影響工藝的因素：1.發(fā)酵液的過濾處理. 2 樹脂的吸附、洗脫.3

42、活性炭脫色、低溫濃縮6. 卡那霉素（G-菌和結(jié)核桿菌）臨床上使用的主要成分是卡那霉素A（因為毒性較高，B5%，C含量極微）。穩(wěn)定性：PH 211范圍內(nèi)較穩(wěn)定，PH 68加熱煮沸，活力可維持30 min;暴漏陽光中變黑，效價沒有影響。7.阿米卡星 是卡那霉素的半合成衍生物。是抗菌譜最廣的氨基糖苷類抗生素。對多種氨基糖苷類抗生素滅活酶穩(wěn)定，故對耐藥菌感染仍能有效控制，常作為首選藥。（三）大環(huán)內(nèi)酯類抗生素1. 化學結(jié)構(gòu): 由鏈霉菌產(chǎn)生的弱堿性抗生素（大約為pH 8）， 大環(huán)內(nèi)酯作為糖配體（母體），以糖苷鍵和1-3個糖分子相連；2. 理化性質(zhì)l 無色的弱堿性化合物，易溶于有機溶劑；可與酸成鹽（葡萄糖酸

43、鹽、乳糖酸鹽、硬脂酸鹽、十二烷基硫酸鹽），其鹽易溶于水。l 化學性質(zhì)不穩(wěn)定，在酸性條件下易發(fā)生糖苷鍵水解，在堿性條件下其內(nèi)酯環(huán)易破裂。l 發(fā)酵過程中常產(chǎn)生多種結(jié)構(gòu)近似、性質(zhì)相仿的成分；菌種或生產(chǎn)工藝的不同，影響產(chǎn)品各組分的比例、質(zhì)量。3.抗菌作用Ø 應用僅次于-內(nèi)酰胺類抗生素；Ø 對G+和一些G-、支原體等有較強的作用； 特別是-內(nèi)酰胺類抗生素無效的支原體、衣原體等感染有效。Ø 治療艾滋病患者的弓形蟲感染。4.抗菌機理：v 抑制細菌核糖體50S亞基的形成；v 抑制蛋白質(zhì)翻譯：干擾蛋白質(zhì)延伸過程，促進tRNA脫落，釋放未成熟的多肽5.耐藥機制改變細胞膜滲透性;甲基化

44、修飾改變了核糖體靶位結(jié)構(gòu); 產(chǎn)生滅活酶 6. 紅霉素（堿性易溶于醇類、丙酮、三氯甲烷等，酸性條件下易溶于水， PH 6 8時水溶液最穩(wěn)定）（4） 四環(huán)類抗生素（黃顏色的一類廣譜抗生素）（環(huán)素）1.屬于兩性化合物：三羧基甲烷系統(tǒng) A（ pKa =3.3），酚二酮系統(tǒng)B（pKa=6.5），二甲胺基C（pKb=7.5）。A和C可形成內(nèi)鹽； 酮基和烯醇基共軛雙鍵系統(tǒng)，決定顏色和紫外吸收特點。2.溶解度：pH< 4，或8時，可得高濃度水溶液。pH=4.5-7.2難溶于水。3.穩(wěn)定性：固體很穩(wěn)定，可存放5年以上，效價無明顯下跌；l 酸性條件下 1）脫水反應，生成無活性橙黃色脫水四環(huán)素。2）差向異構(gòu)體

45、，在PH 2-6條件下發(fā)生可逆差向異構(gòu)化反應，磷酸根、醋酸根離子的存在，可加速l 堿性條件下 C環(huán)斷裂，生成無活性的具有四環(huán)素異構(gòu)體。4. 抗菌作用： 對支原體、衣原體、立克次體、某些螺旋體作用強。5. 抗菌機制：結(jié)合于30S亞基上抑制細菌蛋白質(zhì)合成u 起始階段：抑制70S起始復合物形成u 延伸階段：造成mRNA密碼錯譯，合成異常、或無功能的蛋白質(zhì)u 終止階段：阻止肽鏈的脫落和核糖體循環(huán)6. 耐藥機制 外排泵主動外排 核糖體保護蛋白7. 副作用：四環(huán)素類抗生素的毒性很低，但副作用較多。胃腸道障礙、過敏、誘發(fā)感染和維生素缺乏等。 幼兒可致骨發(fā)育障礙和牙齒色素沉積。含Ca、Mg、Fe的食物可與四環(huán)

46、素類抗生素形成鰲合物，會降低其口服吸收率。8. 四環(huán)素的提取和精制工藝要點：發(fā)酵液的預處理中酸化的作用、純化劑的選擇、結(jié)晶與尿素復鹽。第十五章 生物制品與生物技術(shù)藥物制造工藝1.生物制品： 以微生物、細胞、動物或人源組織和體液等為原料，利用傳統(tǒng)技術(shù)或用現(xiàn)代生物技術(shù)制成，用于人類疾病的預防、治療和診斷。（疫苗、抗血清、抗毒素、類毒素、免疫調(diào)節(jié)劑、診斷試劑）2.生物制品的分類1.） 預防類：細菌類疫苗(菌苗）、病毒類疫苗、類毒素和聯(lián)合疫苗。2.）治療類： 抗毒素及免疫血清、細胞因子、重組DNA產(chǎn)品、血液制品3）診斷類： 體外診斷制品：由特定抗原、抗體或有關生物物質(zhì)制成的免疫診斷試劑或試劑盒，用于體

47、外免疫診斷。 體內(nèi)診斷制品：由變態(tài)反應原或有關抗原制成的免疫診斷試劑，用于皮內(nèi)接種，診斷個體對病原的易感性或免疫狀態(tài)。4）其他制品 3.質(zhì)量要求（安全性、有效性和可控性）安全性：毒性試驗，防腐性試驗，熱原質(zhì)試驗，安全性試驗；有關安全性的特殊試驗；效力：濃度測定、活菌率或病毒滴定測定、動物保護率試驗、免疫抗體滴度測定，穩(wěn)定性試驗4.生物制品的標準品或參考品Def: 用于生物制品效價、活性或含量測定的或其特性鑒別、檢查的生物標準品或參考品。要求：準確單位數(shù)準確；凍干效價穩(wěn)定；溶封；瓶簽、說明書和實驗數(shù)據(jù)分級：國際生物標準、國際參考標準、國際生物參考試劑。5.疫苗分類（一 ）傳統(tǒng)病毒疫苗1、死疫苗（

48、dead Vaccine）利用物理或化學方法殺死或滅活培養(yǎng)增殖的標準微生物制成的預防制劑。2、活疫苗（attenuated vaccine） 用人工定向變異或從自然界篩選出毒力高度減弱或基本無毒的微生物制成的預防制劑。3、亞單位疫苗（subunit vaccine）利用病原體中有效的免疫原成分制成的疫苗，稱為亞單位疫苗 。（二）新一代疫苗1、基因工程疫苗：利用DNA重組技術(shù)克隆并表達保護性抗原基因，用表達的抗原產(chǎn)物或重組體本身制成的疫苗。包括： 基因工程亞單位疫苗：基因工程表達的蛋白抗原純化后制成的疫苗。優(yōu)點：產(chǎn)量高、純度高、安全性高；用于病原體難培養(yǎng)或有潛在致癌性，或有免疫病理作用的疫苗研究

49、。缺點：與傳統(tǒng)亞單位疫苗相比，免疫效果較差，加入有免疫佐劑 基因工程載體疫苗：利用微生物做載體，在微生物中表達保護性抗原基因，把微生物制成疫苗。優(yōu)點：1、活疫苗，抗原不需純化;2、不需多次免疫，載體本身可發(fā)揮免疫佐劑效果。缺點：載體為特定的微生物載體，曾感染過腺病毒或者接種卡介苗的人，對載體微生物已具有免疫力，再次接種后不易繁殖，會影響免疫效果。 核酸疫苗：用能夠表達抗原的基因制成疫苗。優(yōu)點：易于制備、便于保存、可多次免疫并且容易制成多聯(lián)多價疫苗。缺點：是否會整合到染色體上引起癌變；能否引起免疫病理作用，如自身抗核酸抗體的產(chǎn)生，免疫耐受等。 基因缺失活疫苗蛋白工程疫苗： 去除與毒力有關的基因獲

50、得的缺失突變毒株制成的疫苗。優(yōu)點：突變性狀明確、穩(wěn)定；不易返祖、毒力恢復；是研究安全有效的新型疫苗的重要途徑。蛋白工程疫苗：抗原基因加以改造，使之發(fā)生點突變、缺失、甚至進行不同基因或結(jié)構(gòu)域的人工組合，達到增強其免疫原性，去除有害作用或副反應的一類疫苗2、遺傳重組疫苗：用遺傳重組方法獲得重組微生物制成的疫苗。3、合成肽疫苗：用化學方法合成能夠誘發(fā)機體產(chǎn)生免疫保護的多肽制成的疫苗。優(yōu)點：純度和安全性高；副作用??；可長期在常溫下保存；缺點：抗原性單一；免疫原性弱。合成肽抗原聯(lián)合使用提高免疫原性。4、獨特型抗體疫苗：用與特定抗原的免疫原性相近的抗體（ab2）做抗原制成的疫苗。5.滅活菌苗通用制造程序滅

51、活菌苗通常根據(jù)細菌的特性加入最有效的滅活劑（甲醛），采取最適當?shù)臏缁顥l件進行。6. 菌種的選擇 產(chǎn)品副作用小、安全性好和效力高；生物學特性穩(wěn)定l 特定的抗原性l 典型的形態(tài)、培養(yǎng)特性和生化特性，并可長期持保持l 易在人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)l 菌種在培養(yǎng)過程中應產(chǎn)生較小的毒性（死菌苗）。l 菌種在培養(yǎng)過程中無毒性復原現(xiàn)象（活菌苗）l 在培養(yǎng)過程中，能產(chǎn)生大量典型毒素（類毒素）病毒疫苗制造繁殖方法：1、病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造2、 細胞培養(yǎng)制造疫苗3、病毒性動物組織疫苗制造7.疫苗和菌苗質(zhì)量檢定標準理化性質(zhì)檢定1、物理性狀檢查（外觀、真空度、裝量、溶解速度）等2、蛋白質(zhì)含量測定3、純度檢查及鑒別4、分子量

52、或分子大小的測定；5、防腐劑含量測定；安全實驗1、外源性污染的檢查野毒檢查、熱原質(zhì)檢查2、殺菌、滅活、脫毒情況的檢查無菌試驗、活毒檢查、解毒實驗、3、殘余毒力和毒性物質(zhì)檢查殘余毒力試驗、無毒性試驗、毒性試驗和防腐劑試驗4、過敏性物質(zhì)的檢查過敏性試驗、牛血清含量的測定、血型物質(zhì)的測定效力試驗1、免疫力實驗2、活菌數(shù)和活病毒滴度測定3、類毒素和抗毒素單位測定4、血清學試驗5、其他有關效力的檢定和評價乙型肝炎由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV) 1. HBV形態(tài)結(jié)構(gòu)：大球形顆粒、小球形顆粒、管狀顆粒2. 病毒表面顆粒（HBsAg）包括三種蛋白成分：小分子蛋白、中分子蛋白、大

53、分子蛋白、3. 乙肝疫苗生產(chǎn)方法：1、血源性疫苗2、重組蛋白疫苗3、多肽疫苗4、核酸疫苗干擾素（IFN）：由干擾素誘生劑誘導有關生物細胞 所產(chǎn)生的一類高活性，多功能的誘生蛋白。干擾素制備工藝： 體外誘生、人源轉(zhuǎn)化細胞系培養(yǎng)、基因工程大腸桿菌發(fā)酵、動物傳代細胞生產(chǎn)、基因工程假單胞桿菌發(fā)酵P490胰島素（Ins）：胰島素是由胰島細胞受內(nèi)源性或外源性物質(zhì)如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸等的刺激而分泌的一種蛋白質(zhì)激素。l 溶解度：PH 4.5 - 6.5的范圍內(nèi)，幾乎不溶于水，易溶于稀酸和稀堿溶液，在80 %的乙醇中也可以溶解。l 穩(wěn)定性：在弱酸性水溶液、中性緩沖液中穩(wěn)定；還原劑及多種金屬使Ins失活，紫外線、光氧化和超聲波會使Ins失活。l 胰島素制備工藝：以胰臟為原料提取、半合成胰島素、重組DNA技術(shù)生產(chǎn)（ AB鏈合成：分別表達AB鏈，化學方法連接 逆轉(zhuǎn)錄法：表達胰島素原，酶切得到重組人胰島素）l 酵