霉菌的培養(yǎng)和觀察

1、實(shí)驗(yàn)七霉菌的培養(yǎng)和觀察 生命科學(xué)學(xué)院生科四班 張行潤(rùn)200900140177摘要 通過(guò)在一定固定環(huán)境下培養(yǎng)根霉，毛霉，黑曲霉，青霉四種霉菌，先通過(guò)菌種的外形對(duì)其有一個(gè)“宏觀”的認(rèn)識(shí)，然后再在顯微鏡低倍或高倍鏡下分別觀察四種菌的形態(tài)，孢子囊及孢子形態(tài)，菌絲形態(tài)等方面。發(fā)現(xiàn)根霉，黑曲霉和青霉菌絲均有橫隔；青霉的分生孢子小梗呈掃帚狀等現(xiàn)象。關(guān)鍵詞土豆培養(yǎng)基（PDA） 分生孢子梗（Conidiophore） 載片培養(yǎng)一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?) 學(xué)習(xí)并掌握觀察霉菌形態(tài)的基本方法；2) 了解常見(jiàn)霉菌（根霉、毛霉、曲霉、青霉、黑曲霉）的基本形態(tài)特征。二、 實(shí)驗(yàn)原理霉菌的菌絲體由基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和繁殖菌絲組成，其菌

2、絲比細(xì)菌及放線菌粗幾倍到幾十倍?？梢圆捎幂d玻片培養(yǎng)觀察法來(lái)觀察，通過(guò)無(wú)菌操作將薄層培養(yǎng)基瓊脂置于載玻片上，接種后蓋上蓋玻片培養(yǎng)，使菌絲體在蓋玻片和載玻片之間的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，將培養(yǎng)物直接置于顯微鏡下可觀察到霉菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)并可連續(xù)觀察不同時(shí)期發(fā)育期的菌體結(jié)構(gòu)特征的變化。 對(duì)霉菌也可以用乳酸石炭酸棉藍(lán)染液進(jìn)行染色，石炭酸可以殺死菌體及孢子并可以防腐，乳酸可以保持菌體不變形，棉藍(lán)使菌體著色。同時(shí)，這種霉菌制片不易干燥，能防止孢子飛散，用樹(shù)膠封固后可制成永久標(biāo)本長(zhǎng)期保存。三、實(shí)驗(yàn)材料及步驟2.1 實(shí)驗(yàn)材料根霉（Rhizopus），毛霉（Mucor），黑曲霉（Aspergillus niger），青霉（

3、Penicillium），土豆瓊脂培養(yǎng)基（PDA），培養(yǎng)皿，載玻片，蓋玻片，鑷子，顯微鏡，小刀，U形管等。2.2 實(shí)驗(yàn)步驟1配置培養(yǎng)基：根據(jù)原料用量配置土豆培養(yǎng)基。配置時(shí)，先急火煮沸，在溫火加熱20min，若有渾濁出現(xiàn)，則需過(guò)濾，然后定容。包扎土豆培養(yǎng)基，甘油等其他用品。滅菌后取出備用。2培養(yǎng)小室準(zhǔn)備及滅菌在培養(yǎng)皿底部鋪一張略小于皿底的圓形濾紙片，濾紙片上依次放上“U”形載玻片擱架、載玻片、蓋玻片（四片），蓋上皿蓋，牛皮紙包扎，于121滅菌30min烘干備用；3瓊脂薄片制作：a) 將稍微冷卻的培養(yǎng)基，倒在培養(yǎng)皿中，做成薄平板。培養(yǎng)基應(yīng)該要倒得薄而均勻。注意無(wú)菌操作。b) 用解剖刀將瓊脂薄平板切

4、成邊長(zhǎng)不大于1cm的瓊脂薄片c) 用解剖刀將瓊脂薄片移至小室載玻片上（一個(gè)載玻片上方兩塊薄片）4取菌接種：用接種環(huán)挑取少量待觀察的霉菌孢子（霉菌菌種的表面輕輕刮取即可），接種于固體培養(yǎng)基邊緣，以便于霉菌生長(zhǎng)。接種時(shí)只要將帶菌的接種環(huán)在載玻片上輕輕碰幾下即可。接種量要少，以免培養(yǎng)后菌絲過(guò)于稠密而影響觀察。5 加蓋玻片：用無(wú)菌鑷子將皿內(nèi)的蓋玻片蓋在瓊脂薄層上，用鑷子輕壓蓋玻片，使蓋玻片和載玻片之間的距離相當(dāng)接近，但不能壓扁。蓋玻片不能緊貼載玻片，要彼此留有小縫隙，一是為了通氣，二是使各部分結(jié)構(gòu)平行排列，易于觀察。6倒保濕劑：每皿倒入約2-3mL 20%的經(jīng)滅菌處理的甘油，使皿內(nèi)濾紙完全濕潤(rùn)，以保持

5、皿內(nèi)濕度，蓋上皿蓋。制成載玻片濕室。7正置培養(yǎng)：將平皿置于27恒溫箱中培養(yǎng)一周。8觀察：將培養(yǎng)好的載玻片取出，置于顯微鏡下直接觀察。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析3.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1.1 根霉：菌絲無(wú)隔，有假根、匍匐菌絲。假根著生處有向上直立的孢囊梗，其頂端膨大成孢子囊，底部為半球形囊軸。3.1.2 毛霉：孢囊梗直接由菌絲出，頂端為球形孢子囊3.1.3 黑曲霉：菌絲有隔，氣生菌絲分化為分生孢子梗（無(wú)隔），頂端膨脹為球狀頂囊。3.1.4 青霉：菌絲有隔，分生孢子梗頂端不膨大，無(wú)頂囊，多次分枝成幾輪小梗，小梗頂端長(zhǎng)孢子。分生孢子梗呈掃帚狀。圖1. 根霉菌的假根（10x40）圖2. 根霉菌的匍匐枝（10x40

6、）圖3. 毛霉的球狀孢囊（10x40）圖4. 黑曲霉的球狀頂囊（10x40）3.2 實(shí)驗(yàn)分析霉菌菌絲比較粗大（菌絲和孢子的直徑達(dá)到310m），通常是細(xì)菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因而可用低倍、高倍鏡觀察。在顯微鏡下觀察時(shí)，圖5. 青霉的帚狀分生孢子梗（10×40）就在于接種時(shí)涂菌太厚太多，導(dǎo)致霉菌局部或全部長(zhǎng)得太密，反而不易于觀察。因此，在接種時(shí)輕輕涂抹即可。四、實(shí)驗(yàn)小結(jié) 本次試驗(yàn)的成功需要注意幾個(gè)方面的問(wèn)題。首先，在接種的時(shí)候不應(yīng)該在固體培養(yǎng)基上接種太多太厚的孢子，并且接種需要接在固體培養(yǎng)基小塊兒的邊緣，以便于霉菌的生長(zhǎng)。其次，無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行各種操作也是非常重要的，這樣可以保證菌種不被污染。再者，本次實(shí)驗(yàn)在觀察霉菌的形態(tài)的時(shí)候，有特別的關(guān)注不