Agilent Zorbax色譜柱介紹及選擇_圖文

1、 安捷倫液相色譜柱介紹及選擇建議 主要內(nèi)容üZorbax 液相色譜柱介紹üZorbax反相色譜柱選擇建議 Zorbax Eclipse Plus柱Zorbax Eclipse XDBZorbax Stable Bond 柱Zorbax Extend C18柱Zorbax Bonus-RP 柱Zorbax SB-Aq 柱Zorbax RX HPLC 柱原先的Zorbax ODS柱Zorbax 正相柱其他Zorbax 柱Zorbax 300 SB 柱Zorbax 300Extend柱Zorbax Poroshell柱Zorbax Eclipse AAA柱Zorbax GF-25

2、0/450 凝膠柱Zorbax SAX和SCX 柱MARS mRP columnZorbax 高通量柱，LC/MS HPLC柱Zorbax 快速分離柱Zorbax 快速分離高通量柱Zorbax 溶劑節(jié)省色譜柱Zorbax 微徑色譜柱Zorbax 毛細(xì)管柱和納流柱Zorbax PrepHT制備柱Zorbax®液相色譜柱Agilent®液相色譜柱Agilent TC-C18柱Agilent HC-C18柱Agilent HC-C8柱Agilent TC-C18(2柱Agilent HC-C18(2柱Agilent Prep-C18安捷倫Zorbax ®HPLC 色譜柱

3、產(chǎn)品研究與開發(fā)硅膠生產(chǎn)鍵合柱裝填具可追溯性可定購(gòu)生產(chǎn)批號(hào)不同的色譜柱特殊規(guī)格定制StableBondEclipseBonus RPExtend Original ZORBAX SIL (1970s由于帶負(fù)電荷的殘留硅羥基和酸性表面上金屬含量高(硅羥基的pKa 低, 導(dǎo)致堿性化合物發(fā)生拖尾ZORBAX Rx-Sil (1987由于金屬含量低, 硅羥基pKa 高, 堿性化合物不發(fā)生拖尾Zorbax Rx-SIL: 11種金屬< 35 ppm (未檢出其他雜質(zhì), <1ppm; 99.995% 純度的二氧化硅ZORBAX ®硅膠類型選擇適用于pH7.5流動(dòng)相的色譜柱流動(dòng)相:乙腈:

4、 50 mMK2HPO 4: 55: 45, pH 7.5UV: 224 nm23°C進(jìn)樣量: 20 µL (0.5 µg / µLZorbax Eclipse XDB-C18(B類硅膠ZORBAX SB-C18(B類硅膠ODS (A類硅膠封端ODS (A類硅膠不封端由于帶負(fù)電荷的殘留硅羥基和酸性表面上金屬含量高(硅羥基的pKa 低, 導(dǎo)致堿性化合物發(fā)生拖尾由于金屬含量低, 硅羥基pKa 高, 堿性化合物不發(fā)生拖尾 Zorbax 液相色譜柱硅膠特點(diǎn)Zorbax 硅膠的制備方法由液相色譜柱著名創(chuàng)始人J.J. Kirkland發(fā)明，屬于安捷倫公司的專利技術(shù)。

5、高純度硅膠 游離硅羥基活性降低提供更好的峰形專利的硅珠堆砌法更好的重現(xiàn)性填料顆粒更好的強(qiáng)度提供不同粒徑的顆粒 硅膠+脲(pH=2+甲醛CH 2O 80A & 300A安捷倫擁有此項(xiàng)填料專利技術(shù)ZORBAX Rx多孔硅膠微球或：三聚氰氨甲醛樹脂純度，強(qiáng)度，對(duì)孔徑與粒度嚴(yán)格控制優(yōu)級(jí)ZORBAX 鍵合相基礎(chǔ)Zorbax 液相色譜柱硅膠特點(diǎn)專利的硅珠堆砌技術(shù)Zorbax 主要的幾種鍵合相技術(shù) Zorbax 主要鍵合相技術(shù)介紹üZorbax Eclipse XDB/Plus鍵合相Zorbax StableBond 鍵合相Zorbax Extend 鍵合相Zorbax Bonus RP

6、鍵合相 Zorbax Eclipse鍵合相Eclipse PlusEclipse XDB致密鍵合雙封端超純堅(jiān)固的ZORBAX 硅膠寬的pH 使用范圍2-9對(duì)于所有樣品都有較好的峰形專利技術(shù)完整的質(zhì)控過程方法開發(fā)的首要選擇Ø行業(yè)領(lǐng)先的峰形Ø更好的專利技術(shù)處理硅膠基質(zhì)Ø改進(jìn)的雙封端技術(shù)：改進(jìn)的鍵合試劑及鍵合過程Ø更加嚴(yán)格的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，批與批之間更加好的重現(xiàn)性Ø不同粒徑1.8, 3.5, 5umØ最高的分離效率ØC18，C8，PAH ，苯基-己基ØC18, C8, 苯基, CNØ不同粒徑1.8, 3.5, 5，7

7、um Ø對(duì)于快速方法開發(fā)有很廣泛的應(yīng)用譜圖庫(kù)Ø多種色譜柱規(guī)格，從毛細(xì)柱到制備柱Ø使用1.8um 顆粒實(shí)現(xiàn)快速有效的方法轉(zhuǎn)化Eclispe 系列的色譜柱所適合的pH 范圍為2-9，是液相中最為常見的流動(dòng)相范圍。而且在中等pH 時(shí)，由于其對(duì)堿性化合物的峰形分離優(yōu)異(尤其是Eclipse Plus，因此一般做為方法開發(fā)的首選色譜柱。 ZORBAX Eclipse Plus 解決了“峰形”問題由于硅膠上殘留的硅羥基，堿性化合物通常會(huì)出現(xiàn)拖尾的現(xiàn)像低的靈敏度很差的分離度在指定時(shí)間內(nèi)分離的峰數(shù)少很難定量 min10 min需要改進(jìn)的峰形阿米替林0.1ug, 60% 乙腈8mM

8、 磷酸鉀緩沖鹽pH 7.0, 215nm, 1.0mL/min, 4.6x100mm 5µ色譜柱PLUS-針對(duì)堿性化合物而特別研制的色譜柱 ZORBAX Eclipse Plus在甲醇流動(dòng)相中分離阿米替林時(shí)峰形出色Eclipse Plus C18Phenomenex Gemini C18Phenomenex Luna C18 (2Waters SunFire C18Ace C18(2Inertsil ODS (3Tf = 1.00Tf = 1.25Tf = 1.26Tf = 1.20Tf = 1.92Tf = 1.11阿米替林 0.1µg 80% 甲醇8mM 磷酸鉀緩沖鹽p

9、H 7.0,檢測(cè)器: UV 215 nm, 流速: 1.0 mL/min 色譜柱: 4.6x100mm 5µm在甲醇中峰形通常會(huì)比較好，Eclipse Plus 在這個(gè)條件下非常出色。 Eclipse Plus C18 對(duì)于酸堿混合物的分離峰形都是最好min023457Eclipse Plus C18Phenomenex Gemini C181. 水楊酸2. 乙酰水楊酸3. 右美沙芬1233Tf = 1.01Tf = 1.21Tf = 1.12Tf = 1.37Eclipse Plus色譜柱對(duì)各種類型的化合物酸、堿和中性化合物也可以得到優(yōu)秀的結(jié)果 Eclipse Plus 分析樣品的

10、峰形最好色譜柱: 4.6 x150 mm, 5um 流動(dòng)相: 60:40 水:甲醇流速: 1 ml/min 柱溫: 40 °C UV 254 nm樣品: 皮質(zhì)類固醇: 1. 曲安西龍2. 潑尼松3. 氫化可的松4. 可的松Eclipse Plus C18N= 10747Tf= 1.03N=10968TF=1.045101520253035Waters XBridge C18N=8598TF= 1.14N=8737TF=1.15min5101520253035Phenomenex Luna C18 (2N=9307TF=1.09N=9377TF= 1.085101520253035類固

11、醇不是堿性化合物Eclipse Plus 同樣有最好的峰形和柱效! Zorbax Eclipse 色譜柱Eclipse Plus：填料鍵合相：C18, C8, PAH，苯基己基。填料粒徑：1.8 um, 3.5 um, 5 um。色譜柱規(guī)格：內(nèi)徑2.1 mm 3.0mm 4.6 mm，長(zhǎng)度從30 mm到250mm 。Eclipse XDB：填料鍵合相：C18, C8, CN, Phenyl。填料粒徑：1.8 um, 3.5 um, 5 um, 7 um。色譜柱規(guī)格：內(nèi)徑從2.1 mm 21.2 mm，長(zhǎng)度從30 mm到250mm 。以及毛細(xì)管柱(0.3 mm和0.5 mm。(可定制規(guī)格Zorb

12、ax 主要鍵合相技術(shù)介紹üZorbax Eclipse XDB/Plus鍵合相üZorbax StableBond 鍵合相Zorbax Extend 鍵合相Zorbax Bonus RP 鍵合相 專利的鍵合技術(shù)，為鍵合相提供了空間保護(hù)作用。具有行業(yè)領(lǐng)先的低pH 流動(dòng)相穩(wěn)定性。pH 可以低至1，且允許在高溫(80o C 下操作。ZORBAX StableBond色譜柱特點(diǎn)鍵合相流失, 保留減弱另一個(gè)裸露的硅羥基, 潛在的拖尾因素Zorbax StableBond空間位阻保護(hù)-抗水解能力普通硅膠柱低pH <2不穩(wěn)定, 發(fā)生水解 在低pH 和高溫(pH 0.8,90

13、6;C 時(shí) 卓越的穩(wěn)定性0.60.0沖洗用流動(dòng)相柱體積相對(duì)保留StableBond SB-C18(二異丁基-C18 ZORBAX Rx-C18(二甲基-C18 Competitor A-C18Competitor B-C18Competitor C-C18Competitor D-C18Competitor E-C18ZORBAX StableBond色譜柱從上面的對(duì)比實(shí)驗(yàn)可以看出，StableBond 系列色譜柱在低pH 及高溫下具有很好的穩(wěn)定性。SB 系列中不容忽視的C18鍵合相：SB -Aq通用性強(qiáng)100水相及100有機(jī)流動(dòng)相推薦用于強(qiáng)極性組分的分離在含高水相的流動(dòng)相中可獲得高的保留高純

14、度去活硅膠基質(zhì)超乎想象的穩(wěn)定性在低pH 和高溫(<80o C 下, 具有最長(zhǎng)的柱壽命和最好的重現(xiàn)性可用于PH 1的酸性流動(dòng)相最高可用到80o C 的條件保留的重現(xiàn)性較好-不發(fā)生“固定相坍塌”品種齊全提供從窄徑柱, 常規(guī)柱, 到制備柱液質(zhì)聯(lián)用短柱及快速分離柱等高酸性流動(dòng)相高極性樣品100純水流動(dòng)相兼容如果流動(dòng)相中水相或緩沖鹽相的比例超過85%，強(qiáng)烈推薦選用能耐高水相的色譜柱，請(qǐng)看以下兩張幻燈片對(duì)比實(shí)驗(yàn)。 Column: Eclipse XDB-C8 4.6 x 150 mmMobile Phase: 90% 50 mM KH2PO 410% ACNFlow Rate: 1.0 mL/min

15、Temperature: RTSample: 1. Uracil2. Procainamide3. N-acetylprocainamide 4. N-propionylprocainamide 5. Caffeine051012345Example: Procainamides on Hydrophobic-C8 Column高水相比例的流動(dòng)相往往會(huì)導(dǎo)致普通C18/C8鍵合相出現(xiàn)保留時(shí)間的變化Equilibrate with 50% ACN, then mobile phaseSB-Aq 在高水相比例的流動(dòng)相條件下保留時(shí)間具有很好的重現(xiàn)性min 010155min10155Column: Z

16、ORBAX SB-Aq 4.6 x 150 mm, 5 µm Mobile Phase: 90% 50 mM KH2PO 4, pH 3.510% ACNFlow Rate: 1.0 mL/minTemperature: RT Detection:UV 254 nm, 4 nmSample: 1. Uracil2. Procainamide3. N-acetylprocainamide 4. N-propionylprocainamide5. Caffeine1234554321No Phase CollapseNo loss in ResolutionAfter equilibra

17、ting with 100% bufferGood peak shape on all peaksEquilibrate with 50% ACN, then mobile phase 耐100%水相色譜柱SB-Aq塔板數(shù):12283拖尾因子:1.01供試品制備：精密量取本品1.0ml ，置10ml 量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻，精密量取該溶液1.0ml 置100ml 量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻，制成每ml 約0.25mg 溶液，即得。卡那霉素注射液 :Zorbax SB-Aq, 4.6 x 150 mm, 5um動(dòng)相:95% 0.1% TFA5% 甲醇度:35°C:2.0 mL/

18、min.測(cè)器:UV 254 nm未使用離子對(duì)試劑, SB-Aq 色譜柱對(duì)極性組分也能提供較好的保留方法重復(fù)性比使用離子對(duì)試劑更好H 32水溶性維生素(不需離子對(duì)試劑SB-Aq 可增強(qiáng)強(qiáng)極性樣品的保留1. 維生素B12. 煙酸3. 維生素B6 4. 煙酰胺B3Zorbax StableBond 色譜柱StableBond(80Å 色譜柱鍵合相：C18, C8, CN, C3, Phenyl, Aq填料粒徑：1.8 um, 3.5 um, 5 um, 7 um規(guī)格：毛細(xì)管柱，快速分離柱，分析柱，半制備柱，高通量制備柱。StableBond (300Å 色譜柱鍵合相：C18, C

19、8, CN, C3填料粒徑：3.5 um, 5 um, 7 um規(guī)格：納流色譜柱，毛細(xì)管柱，標(biāo)準(zhǔn)分析柱，半制備柱，高通量制備柱。 大孔徑填料適用于大分子分析大孔徑300Å全多孔色譜柱可用于分離蛋白質(zhì)和多肽分子量雖小但流體動(dòng)力學(xué)體積較大的分子Poroshell (多孔殼 色譜柱高流速下, 高柱效分析大分子的蛋白質(zhì)和多肽 色譜柱填料孔徑必須適合待測(cè)物分子自由進(jìn)出填料孔, 與孔內(nèi)表面的鍵合相進(jìn)行分離分配 300Å孔徑可改善蛋白質(zhì)和多肽峰形 300Å孔徑可改善大分子的峰形色譜柱: 4.6 x 150 mm, 5 mm流動(dòng)相: 60% MeOH: 40% 0.1% 三氟乙酸

20、流速: 0.75 mL/min 溫度: RT檢測(cè)器: UV 282 nm溶液中的分子尺寸決定適宜的色譜柱孔徑窄的峰寬表明待測(cè)分子進(jìn)入填料孔沒有受到阻礙SB-C3(80Å300SB-C3 (300ÅPw 1/2= 0.442Pw 1/2=0.125OCHO HO O HO HCH 333OCH 3CH 322CH 33H 3H 3H 30 510Time (min0 510Time (minTylosin(泰樂菌素 MW. 926分子量雖小但hydrodynamic volume(水動(dòng)力學(xué)體積 較大的分子 多肽和蛋白質(zhì)分析 多孔外殼 Poroshell 填料是快速分離蛋白質(zhì)和

21、多肽的理想色譜柱Poroshell 填料顆粒由實(shí)心硅膠核和300Å孔徑表面多孔層構(gòu)成蛋白質(zhì)(分子量可達(dá)1,000 kDa和單克隆抗體的高柱效和高回收率四種不同的鍵合相，300SB-C18，300SB-C8，300SB-C3和300Extend-C18，優(yōu)化回收率和選擇性 完成一次單獨(dú)的蛋白質(zhì)消解產(chǎn)物色譜分析要用一小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間。采用ZORBAX Poroshell 色譜柱，同樣的復(fù)雜分離在1/10 的時(shí)間內(nèi)就可完成。儀器：Agilent 1100二元泵系統(tǒng)流動(dòng)相：A ：95%水，5%乙腈，0.1% 三氟乙酸(TFAB ：5% 水，95%乙腈，0.07%三氟乙酸(TFA流速：如圖示活塞

22、沖程：20 µL 檢測(cè)：UV:215 nm溫度：70°C進(jìn)樣體積：20 µL(0.22 µg/1 µL 樣品：BSA 的胰蛋白酶消解產(chǎn)物(15小時(shí)，70 pmol快速，高分辨率分離蛋白質(zhì)和多肽Zorbax 主要鍵合相技術(shù)介紹üZorbax Eclipse XDB/Plus鍵合相üZorbax StableBond 鍵合相üZorbax Extend 鍵合相Zorbax Bonus RP 鍵合相 專利雙齒鍵合技術(shù)，為高pH 流動(dòng)相設(shè)計(jì)最寬的pH 流動(dòng)相使用范圍，可用于pH 2-11.5雙封端保證了堿性化合物優(yōu)異的峰形

23、硅膠基質(zhì)，比聚合物基質(zhì)有更高柱效和更好峰形 ZORBAX Extend-C18色譜柱特點(diǎn)Si OSi OSilica SupportC18C18Zorbax Extend C18高pH 流動(dòng)相分析堿性成分色譜柱: ZORBAX Extend-C18, 4.6 x 150 mm, 5 mm流動(dòng)相: 30% 緩沖液: 70% MeOH pH 7 緩沖液20 mM Na2HPO 4 pH 11緩沖液20 mM TEA 流速: 1.0 mL/min 溫度: RT檢測(cè)器: UV 254 nmExtend-C18pH 1112,345Time (min6Extend-C18pH 7t R = 8.50 5

24、101234Time (min657t R = 11.4樣品:1. Maleate 馬來酸鹽2. Scopolamine 東莨菪堿pKa 7.6 3. PseudoEphedrine 假麻黃堿pKa 9.8 4. Doxylamine 抗敏安(多西拉敏 pKa 9.2 5. Chlorpheniramine 氯苯吡胺pKa 9.1 6. Triprolidine 苯丙烯啶pKa 6.5 7. Diphenhydramine 苯海拉明pKa 9.0 ZORBAX Extend-C18 HPLC色譜柱Extend -C18 在高pH 有長(zhǎng)的柱壽命 Zorbax Extend C18色譜柱Zorba

25、x Extend (80Å 色譜柱填料粒徑：1.8 um, 3.5 um, 5 um色譜柱規(guī)格：內(nèi)徑(mm：1.0, 2.1, 3.0, 4.6, 21.2長(zhǎng)度(mm：30, 50, 100, 150, 250Zorbax Extend (300Å 色譜柱填料粒徑：3.5 um, 5 um色譜柱規(guī)格：內(nèi)徑(mm ：2.1, 4.6長(zhǎng)度(mm ：50, 100, 150, 250以及毛細(xì)管柱規(guī)格。 Zorbax 主要鍵合相技術(shù)介紹üZorbax Eclipse XDB/Plus鍵合相üZorbax StableBond 鍵合相üZorbax Extend 鍵合相üZ