獨活寄生口服液質量標準的研究

1、    獨活寄生口服液質量標準的研究        摘要目的：為控制獨活寄生口服液的質量，建立獨活、人參、肉桂的薄層色譜鑒別及二氫歐山芹醇乙酸酯的薄層掃描定量方法。方法：樣品中的獨活、人參及肉桂進行薄層色譜鑒別。對獨活中的二氫歐山芹醇乙酸酯進行薄層掃描定量。結果：鑒別方法專屬性強，定量方法簡便、準確，平均回收率為96.5%，RSD為2.44%。結論：本質量標準可有效地控制獨活寄生口服液的質量。關鍵詞獨活寄生口服液；獨活；人參；肉桂；二氫歐山芹醇乙酸酯；薄層掃描Quality

2、standard of Duhuo Jisheng KoufuyeWang Hongyan(Wang HY),Xu Suixu(Xu SX),Zhang Lei(Zhang L)，et al (Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang110015)ABSTRACTOBJECTIVE：To control the quality of Duhuo Jisheng?an Koufuye.The TLC identification method of Angelica pubescens,Panax ginseng and Cinnamomum cas

3、sia and the quantitative determination of columbianetin acetate by TLCS were established. METHODS:Samples were identified respectively by TLC in contrast with Angelica Pubescens,Panax ginseng and Cinnamoum cassia drugs after treated.Columbianetin acetate in Duhuo Jisheng?an Koufuye was extracted ref

4、luxenthy with CHCl3 and determined by dual wavelength thin layer chromatography scanning. RESULTS:The TLC identification was highly specific and the spots were clear and concentrated.The average recovery of columbianetin acetate in samples was 96.5%(n=5).with RSD 2.44%. CONCLUSION:The quantitative m

5、ethod was simple,sensitive,reproducible and accurate.This quality standard was capable to effectively control real quality of Duhuo Jisheng?an Koufuye.KEYWORDSDuhuo Jisheng?an Koufuye,Angelica pubescens,Panax ginseng,columbianetin acetate,TLCS獨活寄生湯由獨活、桑寄生、秦艽、人參、肉桂等15味中藥組成。具有祛風濕，止痹痛，益肝腎、補氣血。用于治療風寒濕痹、

6、日久正虛，見腰膝冷痛，下肢屈伸不利，肌膚麻木等癥，效果顯著。但由于用藥劑量較大，不易保存、攜帶等，從而給臨床應用帶來不便。為使這一藥物更好地用于臨床，我們研制了獨活寄生口服液，克服了上述不足。為了有效地控制其內在的質量，進行了定性及定量研究，制定了獨活、人參、肉桂的薄層色譜鑒別及獨活中二氫歐山芹醇乙酸酯的含量測定。1材料與儀器1.1材料獨活寄生口服液(自制)；處方中的各味中藥原料藥由沈陽藥科大學中藥鑒定室鑒定，符合藥典規(guī)定；二氫歐山芹醇乙酸酯、人參皂苷-Re(沈陽藥科大學天然藥物教研室提供)；硅膠G(青島海洋化工廠)；其它試劑均為分析純。1.2儀器CS-910型雙波長薄層掃描儀(日本島津)；定

7、量毛細管(美國Drummond)2實驗方法與結果2.1薄層色譜鑒別2.1.1獨活的薄層鑒別取本品10ml，加硅藻土10g，攪拌均勻，自然晾干。置沙氏提取器中，加150ml氯仿回流6h，回收氯仿，濃縮液置5ml量瓶中并加氯仿定容，作為供試品溶液。另取獨活對照藥材粗粉3g，按上法制成對照藥材溶液。取二氫歐山芹醇乙酸酯對照品適量，加氯仿溶解制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述三種溶液各10l，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(10.5)為展開劑展開，取出晾干，在紫外燈(254nm)下檢視。供試品色譜中在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同的暗紫色斑點。見1。1獨活的

8、薄層色譜1-陰性對照品；2-二氫歐山芹醇乙酸酯對照品；3-供試品；4-獨活對照藥材2.1.2人參的薄層鑒別取本品10ml，加水飽和正丁醇萃取3次，每次用量40ml，回收正丁醇，加甲醇溶解，作為供試品溶液。另取人參對照藥材粗粉2g，按上述方法制備對照藥材溶液。取人參皂苷-Re對照品適量，加甲醇溶解制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品溶液。取供試液15l點于硅膠G薄層板(10×10cm)右下角距兩邊各1cm處，以氯仿-甲醇-水(653510，下層)為第一向展開劑橫向展開，取出，晾干。以正丁醇-乙酸乙酯-水(411)為第二向展開劑縱向展開，另取對照藥材溶液及對照品溶液各10l點于薄層板上作

9、為一維隨行對照，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，110加熱5min。供試品色譜中在與對照藥材及對照藥品色譜相應的位置上，顯相同的粉紅色斑點。見2，3。2人參的薄層色譜1供試品；2人參皂苷-Re對照品；3人參對照藥材3人參的薄層色譜1陰性對照品；2人參皂苷-Re對照品；3人參對照藥材2.1.3肉桂的薄層鑒別取肉桂對照藥材粗粉2g，按獨活鑒別項下的供試品制法制備，作為對照藥材溶液。另取肉桂醛1ml，加氯仿1ml稀釋，作為對照品溶液。吸取對照藥材溶液、對照品溶液與獨活鑒別項下的供試品溶液各5l，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿為展開劑展開，取出晾干，噴以0.2% 2，4-二硝基苯肼乙醇溶液。供

10、試品色譜中在與對照藥材及對照品色譜的相應位置上，顯相同的橙黃色斑點，見4。4肉桂的薄層色譜1陰性對照品；2肉桂醛對照品；3供試品；4肉桂對照藥材2.2含量測定2.2.1薄層掃描條件采用雙波長反射鋸齒掃描法。掃描寬度：10.0mm。線性參數Sx3，由掃描確定S320nm,R400nm。2.2.2標準曲線精密稱取二氫歐山芹醇乙酸酯對照品適量，加體積分數為95%的乙醇制成0.068mg.ml-1的標準溶液。精密吸取4，8，12，16，20，24l，分別點于同一硅膠G薄層板上，上行展開約10cm，取出晾干。在UV254nm條件下，掃描測定，以面積積分值對二氫歐山芹醇乙酸酯濃度繪制標準曲線，回歸方程：Y

11、=3.33+84.77x,r=0.999 4。結果表明：二氫歐山芹醇乙酸酯在0.2721.7mg.ml-1濃度范圍內呈現(xiàn)良好的線性關系。2.2.3穩(wěn)定性實驗吸取二氫歐山芹醇乙酸酯對照品溶液8l，點于薄層板上展開，取出晾干。每隔30min，掃描一次，結果在2h內穩(wěn)定，RSD2.50%(n=5)。2.2.4精密度實驗板內：同一板上點同樣量的同一樣品，結果RSD4.45%(n=5)。板間：二塊相同厚度的硅膠G板上點同樣量的同一樣品，按實驗條件測定，結果RSD5.29%(n=5)。2.2.5重現(xiàn)性實驗準確稱取樣品5份，按含量測定方法測定。結果樣品每支平均含量為0.307mg，RSD為2.85%2.2.

12、6樣品的測定精密取供試品10.0ml，加硅藻土10g攪拌均勻，自然晾干。置沙氏提取器中，用氯仿150ml回流提取6h，回收氯仿至干，加甲醇溶液并定容于5ml量瓶中，作為供試液。分別吸取標準品溶液12l，供試品溶液10l，點于同一硅膠G薄層板上，按標準曲線項下展開，掃描，采用外標兩點法計算含量。測定了3批獨活寄生口服液中二氫歐山芹醇乙酸酯的含量。測定結果見表1。表1獨活寄生口服液中二氫歐山芹醇乙酸酯測定結果.n=4樣品批號每支含量/mgRSD/%10.2922.620.3162.530.3362.22.2.7加樣回收率試驗精密稱取已知含量的獨活寄生口服液，加入一定量的二氫歐山芹醇乙酸酯對照品，按

13、樣品液制備，點樣，展開，晾干，掃描測定，結果見表2。 表2回收率測定結果樣品量加入量測得量回收率RSD/g/g/g/%/%/%0.5440.7161.2095.20.5440.7161.1893.60.5440.7161.2196.096.52.440.2720.9731.2298.00.2720.9731.2499.62.2.8獨活寄生口服液中獨活原料藥的測定取獨活原料10g，按口服液制備方法制成10支單味藥口服液。精密取其10.0ml，按樣品的測定項下操作，測定了2批獨活原料中二氫歐山芹醇乙酸酯的含量，測定結果見表3。 表3獨活原料藥中二氫歐山芹醇乙酸酯測定結果.n=4樣品批號每支含量/mgRSD10.2991.620.3084.2由表1，3可見，二氫歐山芹醇乙酸酯的含量相當,說明樣品中原料藥與制劑中其它成分干擾較少。 3討論3.1本實驗曾選用獨活中主要有效成分二氫歐山芹醇作為含量測定指標，但后經實驗發(fā)現(xiàn)，其它成分對它有干擾，故選擇極性較小的相應的乙酸酯。關于二氫歐山芹醇乙酸酯分析方法的報道有雙