每日一菌之分枝桿菌

1、每日一菌之分枝桿菌小編正式開啟每日奉獻(xiàn)一菌的編輯模式，不要離開，總 有一株菌是您希望了解的 哦，對了，據(jù)說法國生物梅里埃 公司有一款小型儀器適用于分枝桿菌抗酸染色與熒光染色， 噓，小編也只是聽說啦 分枝桿菌分枝桿菌屬是一類細(xì)長或 略帶彎曲、為數(shù)眾多（包括 54 個(gè)種）呈分支狀生長的需氧 桿菌。因其繁殖時(shí)呈分支狀生長故稱分枝桿菌。本屬細(xì)菌的 主要特點(diǎn)是細(xì)胞壁含有大量脂類， 可占其干重的 60% ，這與 其染色性、抵抗力、致病性等密切相關(guān)。一般不易著色，若 經(jīng)加溫或延長染色時(shí)間而著色后，能抵抗 3% 鹽酸酒精的脫 色作用，故又稱抗酸桿菌。需氧生長，無鞭毛，無芽胞和莢 膜。引起的疾病均為慢性，有肉芽

2、腫病變的炎癥特點(diǎn)。分枝桿菌的種類較多，包括結(jié)核分枝桿菌、非典型分枝 桿菌和麻風(fēng)分枝桿菌。 一、結(jié)核分枝桿菌結(jié)核分枝桿菌簡稱結(jié)核桿菌，是引起人和動(dòng)物結(jié)核病的 病原菌。目前已知在我國引起人類結(jié)核病的主要有人型和牛 型結(jié)核分枝桿菌。（一）生物學(xué)特性1. 形態(tài)與染色： 結(jié)核分枝桿菌為細(xì)長或略帶彎曲的桿菌， 其大小約（14）卩mx 0.4卩m在培養(yǎng)基中可呈球狀或絲狀， 陳舊培養(yǎng)物或干酪化的淋巴結(jié)中可見到分枝狀?？顾崛旧珪r(shí) 菌體呈紅色。顯微鏡下常堆積成團(tuán)、成束，排列無序，也有 呈鏈狀、索狀者。革蘭染色陽性，既往在組織中曾發(fā)現(xiàn)革蘭 陽性的非抗酸顆粒，接種動(dòng)物可產(chǎn)生典型的結(jié)核病變，后被 稱為 Much 顆粒。

3、金胺“ 0”等染色，在熒光顯微鏡下菌體可發(fā) 生熒光。2. 培養(yǎng)特性：本菌專性需氧，在無氧條件下迅速死亡，在5%10%C02環(huán)境中可刺激其生長。燭缸不適合本菌培養(yǎng)，需用二氧化碳培養(yǎng)箱。培養(yǎng)溫度適應(yīng)范圍較大，3540 °C 均可生長，最適溫度為 3537C。最適pH為6.56.8。兼 性胞內(nèi)寄生菌，在細(xì)胞內(nèi)外均可發(fā)育繁殖，強(qiáng)毒株可長期生 存于巨噬細(xì)胞內(nèi)。生長時(shí)還需適當(dāng)?shù)臐穸?。本菌生長緩慢， 最快的分裂速度為 18h 一代。在固體培養(yǎng)基上，一般需 2 6 周才能長出菌落。菌落呈干燥顆粒狀，不透明，乳白色或米黃色，表面呈皺紋狀， 形似菜花。在液體培養(yǎng)基中生長較快，多為表面生長，形成菌膜， 且

4、干燥易碎而沉于管底。此種特性與菌體的疏水性有關(guān)。有 毒力菌株在液體培養(yǎng)基中可呈索狀生長，無毒株則無此現(xiàn)象。結(jié)核分枝桿菌營養(yǎng)要求較高，必須在血清、卵黃、馬鈴 薯、甘油以及某些無機(jī)鹽類的特殊培養(yǎng)基（羅氏培養(yǎng)基）上 才能生長。但經(jīng)多次傳代或長期保存的菌種，也能在營養(yǎng)較 簡單的培養(yǎng)基中生長。據(jù)報(bào)道少量鐵質(zhì)可促進(jìn)結(jié)核分枝桿菌生長，鐵質(zhì)可使細(xì) 菌產(chǎn)生分枝桿菌生長素。選擇培養(yǎng)基加有抗微生物藥物，以 抑制標(biāo)本中雜菌、真菌等污染菌的生長。常用的選擇劑有結(jié) 晶紫、孔雀綠、青霉素、萘啶酸、林可霉素、多粘菌素 B 等。3. 生化反應(yīng)：各型結(jié)核桿菌均不發(fā)酵糖類，能產(chǎn)生過氧 化氫酶，耐熱觸酶試驗(yàn)、聚山梨酯 -80 水解試

5、驗(yàn)和耐熱磷酸 酶試驗(yàn)均為陰性，脲酶試驗(yàn)和中性紅試驗(yàn)均為陽性。人型結(jié) 核分枝桿菌煙酸試驗(yàn)、硝酸鹽還原和煙酰胺酶試驗(yàn)均為陽性， 借此可與牛型結(jié)核分枝桿菌鑒別。4. 抵抗力：對酒精敏感。5. 變異性：形態(tài)、菌落、毒力、免疫原性和耐藥性等變 異。毒力變異：卡介苗（ BCG ）將有毒的牛型結(jié)核分枝 桿菌培養(yǎng)于含有甘油、膽汁、馬鈴薯的培養(yǎng)基中經(jīng) 13 年傳 種 230 代，獲得減毒菌株，再接種動(dòng)物，不能致病而使其獲 得免疫力。用于預(yù)防結(jié)核病。（二）臨床意義1. 致病性：該菌不產(chǎn)生內(nèi)毒素和外毒素和侵襲性酶。可 在細(xì)胞內(nèi)、 外生長與大量繁殖， 致病物質(zhì)主要是莢膜、 脂質(zhì)、 蛋白質(zhì)。結(jié)核分枝桿菌主要通過呼吸道、

6、消化道和受損傷的 皮膚侵入易感機(jī)體，引起多種組織器官的結(jié)核病，其中以通 過呼吸道引起的肺結(jié)核最多見。肺部感染可分為原發(fā)性感染 和繼發(fā)性感染。 肺外感染可發(fā)生在腦、 腎、腸、及腹膜等處。 機(jī)體對菌體成分和其代謝產(chǎn)物引起免疫損傷以及變態(tài)反應(yīng)， 從而導(dǎo)致一系列組織學(xué)上的病理變化。 （機(jī)理）2. Koch 現(xiàn)象：機(jī)體對結(jié)核分枝桿菌的特異性免疫和遲發(fā) 型超敏反應(yīng)同時(shí)存在。結(jié)核的特異性免疫是通過結(jié)核分枝桿 菌感染后所產(chǎn)生，試驗(yàn)證明，將有毒結(jié)核分枝桿菌純培養(yǎng)物 初次接種于健康豚鼠，不產(chǎn)生速發(fā)型過敏反應(yīng)，而經(jīng)1014d , 局部逐漸形成腫塊，繼而壞死，潰瘍，直至動(dòng)物死亡。若在 8 12 周之前給動(dòng)物接種減毒或

7、小量結(jié)核分枝桿菌，第二次 接種時(shí)則局部反應(yīng)提前，于 2 3d 內(nèi)發(fā)生紅腫硬結(jié)，后有潰 瘍但很快趨于痊愈。此現(xiàn)象為 Koch 在 1891 年觀察到的， 故稱為 Koch 現(xiàn)象。免疫性和遲發(fā)型超敏反應(yīng)由不同的 T 細(xì) 胞亞群介導(dǎo)。3. 結(jié)核菌素試驗(yàn)：利用W型變態(tài)反應(yīng)的原理，檢測機(jī)體是否感染過結(jié)核桿菌。本實(shí)驗(yàn)對嬰幼兒結(jié)核病的診斷有意義。（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)1. 標(biāo)本采集：根據(jù)感染部位的不同，可采集不同標(biāo)本。 結(jié)核患者各感染部位的標(biāo)本中大多都混有其他細(xì)菌，為此應(yīng) 采取能抑制污染菌的方法。若作分離培養(yǎng)，必須使用滅菌容 器，患者應(yīng)停藥 1 2 天后再采集標(biāo)本?？刹杉?、尿、糞 便、胃液、胸水、腹水、腦脊液

8、、關(guān)節(jié)液、膿液等。2. 檢驗(yàn)方法（1）涂片檢查直接涂片包括：1 ）薄涂片：挑取痰或其他處理過的標(biāo)本約0.01ml ，涂沫于載玻片上，用萋 -尼（熱染法）或 Kinyoun （冷染法）抗 酸染色，油鏡鏡檢，報(bào)告方法： -：全視野（或 100 個(gè)視野） 未找到抗酸菌；+ :全視野發(fā)現(xiàn)39個(gè)；+ :全視野發(fā)現(xiàn) 1099個(gè)；+ :每視野發(fā)現(xiàn)19個(gè)；+ :每視野發(fā)現(xiàn) 10 個(gè)以上（全視野發(fā)現(xiàn) 1 2 個(gè)時(shí)報(bào)告抗酸菌的個(gè)數(shù)） 。2 ）厚涂片:取標(biāo)本 0.1ml ，涂片，抗酸染色、鏡檢，報(bào) 告方法同上。3 ）集菌涂片:主要方法有沉淀集菌法和漂浮集菌法。4 ）熒光顯微鏡檢查法：制片同前。用金銨“O'染

9、色，在熒光顯微鏡下分枝桿菌可發(fā)出熒光。（2 ）分離培養(yǎng)1 ）固體培養(yǎng)法:結(jié)核分枝桿菌的分離培養(yǎng)對于結(jié)核病 的診斷、療效觀察及抗結(jié)核藥物的研究均具有重要意義。培 養(yǎng)前針對標(biāo)本應(yīng)做適當(dāng)?shù)那疤幚?，如痰可?4%H2S04 或 4%NaOH處理2030min，除去雜菌再接種于羅氏培養(yǎng)基， 37C 5%10%C02培養(yǎng)，定時(shí)觀察，至 48周。此方法可 準(zhǔn)確診斷結(jié)核桿菌。2）液體培養(yǎng)法: Bactec-460 半自動(dòng)培養(yǎng)方法， Bact ，Vitck-3D ，全自動(dòng)快速培養(yǎng)系統(tǒng)。3）噬菌體法。（ 3）基因快速診斷： PCR 反向膜探針雜交， DNA 探針， 16s rRNA 基因序列測定，高效液相色譜（

10、HPLC ）監(jiān)測分枝 菌酸。簡便快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)。但需注意實(shí)驗(yàn)器材 的污染問題，以免出現(xiàn)假陽性。（4）耐藥性： 結(jié)核桿菌對多種抗結(jié)核藥物產(chǎn)生耐藥性， 對利福平耐藥是由 rpoB 的基因突變，鏈霉素耐藥是和編碼 核糖體 S12 蛋白的 rpsl 基因發(fā)生突變以及編碼 16SrRNA 的 rrs 基因發(fā)生突變， 異煙肼的耐藥與過氧化氫酶和過氧化物酶 的失活有關(guān)。（四）治療原則 利福平、異煙肼、乙胺丁醇、鏈霉素為第一線藥物。利 福平與異煙肼合用可以減少耐藥的產(chǎn)生。對于嚴(yán)重感染，可 用吡嗪酰胺與利福平及異煙肼聯(lián)合使用。 二、非典型（非 結(jié)核）分枝桿菌分枝桿菌屬中除結(jié)核桿菌和麻風(fēng)桿菌以外，均稱為

11、非結(jié) 核分枝桿菌或非典型分枝桿菌。因其染色性同樣具有抗酸性 亦稱非結(jié)核抗酸菌，其中有1417個(gè)非典菌種能使人致病， 可侵犯全身臟器和組織，以肺最常見，其臨床癥狀、 X 線所 見很難與肺結(jié)核病區(qū)別，而大多數(shù)非典菌對主要抗結(jié)核藥耐 藥，故該菌的感染和發(fā)病已成為流行病學(xué)和臨床上的主要課 題，與發(fā)達(dá)國家一樣，我國近年來發(fā)現(xiàn)率也有增高趨勢。以第川群鳥-胞內(nèi)分枝桿菌和第W群偶發(fā)分枝桿菌及龜分枝桿 菌為多。 三、麻風(fēng)分枝桿菌麻風(fēng)分枝桿菌( M Leprae )簡稱麻風(fēng)桿菌，是麻風(fēng)病的 病原菌。首先由 Han-senl937 年從麻風(fēng)病人組織中發(fā)現(xiàn)。麻 風(fēng)分枝桿菌亦為抗酸桿菌，但較結(jié)核桿菌短而粗?？顾崛旧?著色均勻，呈束狀或團(tuán)狀排列。為典型的胞內(nèi)寄生菌，該菌 所在的細(xì)胞胞質(zhì)呈泡沫狀稱麻風(fēng)細(xì)胞。用藥后細(xì)菌可斷裂為 顆粒狀，鏈狀等，著色不均勻，叫不完整染色菌。革蘭陽性 無動(dòng)力、無莢膜和芽胞。麻風(fēng)分枝桿菌是麻風(fēng)的病原菌，麻風(fēng)是一種慢性傳染病， 早期主要損害皮膚、黏膜和神經(jīng)末梢，晚期可侵犯深部組織 和器官，此菌尚未人工