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文檔簡介
1、 茯苓合劑對凍融蟾蜍血液理化特性的影響 李凱霞,秦飛,秦世武,王杰作者單位:佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,黑龍江 佳木斯 154007;陜西省西安交通大學(xué)理學(xué)院,陜西 西安 710049【摘要】目的:本實驗旨在探討血液、細(xì)胞、亞細(xì)胞和分子、離子通道等不同水平的凍融損傷和低溫保護(hù)物理化學(xué)機(jī)制。方法:本實驗采用Spectrumlab22PC分光光度計分別觀察-2237復(fù)溫情況下凍融蟾蜍血液氧自由基與茯苓合劑保護(hù)作用。結(jié)果:茯苓合劑具有抗脂質(zhì)過氧化(LPO),保護(hù)GSHPX酶活力功能,減少MDA生成。結(jié)論:茯苓合劑對凍融血液有保護(hù)作用?!娟P(guān)鍵詞】 血液 物理化學(xué)
2、 GSHPxase LPO MDA 分光光度計22PC近年來,國內(nèi)外低溫生物物理學(xué)者對低溫?fù)p傷的機(jī)理進(jìn)行了大量的研究。由于生物物理技術(shù)發(fā)展迅速,對于人的血液、干細(xì)胞、粒細(xì)胞及心、腎、肝臟、角膜、精子、卵子、皮膚深低溫保存和移植均取得可喜的成果112。溫度由-20、-40、-80發(fā)展到液氮保存-196,保存期也由原來的42天延至10年,最長者甚至18年。而復(fù)溫后的細(xì)胞仍保持其有效活性和功能,為此,對于獲取何種生物樣品的技術(shù)、環(huán)境、條件要求更加嚴(yán)格。本實驗觀察在降溫和復(fù)溫凍融蟾蜍血液抗氧自由基和保護(hù)劑整體血液流體學(xué)變化513。首先發(fā)生的是物理和化學(xué)變化。結(jié)冰、融冰、胞內(nèi)外溶液、溶質(zhì)濃度、離子通道變
3、化Na+、K+、CL-、Ca2+、酶的變化。水通過胞膜向胞內(nèi)或胞滲透等現(xiàn)象。在一個封閉的體系中是有液相變?yōu)楣滔嗟南嘧冞^程。體系是隨著臨界壓力和臨界溫度變化而變化19,而凍融血液體系和時間、溫度關(guān)系非常密切的,我們工作如下。1 材料和方法實驗用冬眠狀態(tài)下中華大蟾蜍,體溫1215,體重3050g,性別不限,隨機(jī)分三組,每組20只,分為藥物復(fù)溫組,RS(任氏液)正常冬眠對照組。將實驗蟾蜍整體置于-20冰箱內(nèi)冷凍130min,在蟾蜍凍僵硬休克狀態(tài)下,將其從冰箱中取出,速將蟾蜍分別置于RS和500mL的茯苓合劑中3740復(fù)溫。復(fù)溫溶液主要成份:茯苓20g、雞血藤20g、三七15g、甘油10mL、5%的G
4、lucose250mL水煎制劑。凍融蟾蜍在復(fù)溫溶液中110min復(fù)活,肢體活動自由,視覺反射正常。速將其開胸心臟穿刺取血,加0.1%肝素抗凝,取抗凝血測定:(1)用改良的硫代巴比妥酸(TRA)和22PC分光光度計測量血漿LPO和細(xì)胞膜MDA含量。(2)用改良Hfemen法測定全血GSHPX活力,以新單位(8mL全血在37反應(yīng)5min,扣除酶反應(yīng)后,使GSHPX濃度降低1nmol為一個酶活力單位)。2 結(jié)果見表1。表1 三組LPO和MDA含量GSHPXase活力變化(略)實驗結(jié)果表明:藥物復(fù)溫組血漿LPO含量MDA明顯低于對照組(P<0.01),全血GSHPXase活力顯著高于對照組(P&
5、lt;0.01)。3 討論在低溫凍融蟾蜍情況下,茯苓合劑對冷休克狀態(tài)下蟾蜍復(fù)活是有保護(hù)作用的。細(xì)胞、組織、器官在凍融過程中是一系列復(fù)雜的物理化學(xué)變化,無論是細(xì)胞內(nèi)外液各種帶電粒子(Na+、K+、CL-、Ca2+、Mg2+、P3+、Fe3+等變化,或是細(xì)胞膜、脂質(zhì)、抗原、抗體、ATP、CAMP、AKP酶的變化和H2O每種離子都應(yīng)在漂移擴(kuò)散中達(dá)到平衡態(tài)。結(jié)果將在不同濃度區(qū)域累積電荷產(chǎn)生電場19)。實驗結(jié)果證明,分子在液體中的擴(kuò)散系數(shù)與液體的溫度T,分子半徑r,以及液體的粘性系數(shù)有關(guān)即:D=KT/r此式稱為愛因斯坦斯托克斯關(guān)系式,由此可知,溫度越高,分子半徑越小,液體的粘性系數(shù)越小,擴(kuò)散就進(jìn)行得越快
6、612。選擇最佳凍結(jié)溫度-224,最佳復(fù)溫保護(hù)液的溫度是0437,最佳凍融時間對細(xì)胞、組織、器官存活都是非常重要的。根據(jù)熱力學(xué)原理導(dǎo)出組織臨界溫度過冷公式:T=2MTi/Hr, T為組織臨界溫度,為表面張力,M為摩爾質(zhì)量,Ti為熔點,為密度,H為熔解熱,r為冰胚半徑,該公式可知組織臨界溫度與表面張力成正比,與冰胚半徑成反比,組織溫度在冰點以下是不凍結(jié)狀態(tài)稱為組織臨界溫度1013。一般認(rèn)為,冷和熱的耐受特性是自然界生物生存的本能。如有些植物、蟲、蛹、蟲卵、微生物等,在冬季就是處于冬眠狀態(tài)存活。由于春夏溫度回升加之空氣水分營養(yǎng)自身新陳代謝,逐漸復(fù)活19。在一個封閉的體系中無論其初態(tài)還是終態(tài)其過程是
7、一個相變過程,即由液相轉(zhuǎn)變?yōu)楣滔?,再由冰晶體的固相隨溫度、保護(hù)液而轉(zhuǎn)變液相。這一物理化學(xué)變化過程中,其體系是隨著臨界壓力和臨界溫度變化而變化,而凍融的時間、溫度和其體系能量熱力學(xué)原理是一致,同時取決其存在與消失的結(jié)果69。茯苓合劑對血液中氧自由基、羥自由基OH、過氧化氫H2O2、單線氧O2有清除作用。增強(qiáng)GSH-Pxase和Na+、K+、ATP酶的活性。這對紅細(xì)胞、粒細(xì)胞、血小板、干細(xì)胞的保存至關(guān)重要,為臨床醫(yī)學(xué)和藥物的開發(fā)利用提供了理論基礎(chǔ)和廣泛的物質(zhì)資源113?!緟⒖嘉墨I(xiàn)】1R,L,levin and EG,Cravalho.A membrane model Describing the
8、effect of Temperature on the Water conductivity of erythrocyte membranes at subzero TemperaturesJ.Cryobiology,1976,13:415I4202Roberth,Miller,and Peter mazur.Survial of frozn-thawed human red cells as a function of cooling and warming velocitiesJ.Cryobiology,1976,13:4044143Sunao Kubota,Edmund.The eff
9、ect of freeze rate duration of phase transition and warming rate on survival of frozen canine kidneysJ.Cryobiology,1976,13:4554624Ralph.Fcosx and John Gbaust.Variations in myocardial CPK and Na+-K+-ATPase following long-term freezingJ.Cryobiology,1978,15:5305365M,J,Taylor and D,E.Pegg. The Effect lc
10、e Formation on the function of smooth muscle tissue stored at -21 or -60 J.Cryobiology 1983,20:36406Garyj Schwartz and Kenneth R Diller.Osmotic response of individual cells during freezing J.Cryobiology,1983,20 :61777FW.luscinskas f,j Lionetti. Long term cryopreservation of dog granulocytesJ.Cryobio
11、logy,1983,20:168Jfrim RA,Snydor L,E,Mcgann.Growfh kinetics of cell following freezing in liguid nitrogen J.Cryobiology,1978,15 :5025169Jens,OM, karlisson.A theoretical model of intracellular devitrification J.Cryobiology,2001,42:15416910TeTsuol.Thermal analysis of cryoptective solutions for red bloo
12、d cell J.Cryobiology 1998,36: 16517311Yujianping,Liu jinhan,Pu lq,et al.Freeze-dying of human red blood cells influence of carbohydrates and their concentration J.Cell Preseration Technology,2004,2(4):27027512Kra J cawan and Kenneth B.Freezing thawing effects on storey metabolic enzymes in wood frog
13、 organsJ.Cryobiology,2001,43:324513DEPegg.Viability assays for preserved. Cell, tissues,and organsJ. Cryobiology,1989,26(3):212225 考試寶典-高分練兵場 揭秘論文“低價”根源
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