穿山龍中薯蕷皂苷元的提取分離及鑒定

1、實(shí)驗(yàn)四 穿山龍中薯蕷皂苷元的提取分離及鑒定薯蕷皂苷元俗稱薯蕷皂素，存在于薯蕷科（Diocoreaceae）植物中，含量約為13。我國(guó)薯蕷科植物資源豐富，種類亦多，分布南北各地，其中作為薯蕷皂苷元生產(chǎn)原料的植物主要有盾葉薯蕷（）俗稱黃姜、穿山薯蕷（Dnipponica Makino）俗稱穿山龍，用其根莖作為原料提取薯蕷皂苷元。薯蕷皂苷屬甾體皂苷，水解可得薯蕷皂苷元，這種甾體皂苷元，是近代制藥工業(yè)中合成甾體激素和甾體避孕藥的重要原料。本實(shí)驗(yàn)以穿山龍為原料提取薯蕷皂苷元。穿山龍中含有多種甾體皂苷，根據(jù)其水溶性分為水溶性皂苷和水不溶性皂苷?？傇碥账饪傻檬硎氃碥赵?，其含量可達(dá)1.52.6。目的要求1、

2、掌握甾體皂苷元的理化性質(zhì)。2、掌握甾體皂苷元（親脂性、中性成分）的提取分離方法。3、掌握甾體皂苷元的檢識(shí)方法。實(shí)驗(yàn)原理薯蕷皂苷（dioscin）為無定形粉未或針狀結(jié)晶，mp288?？扇苡诩状肌⒁掖?、甲酸，難溶于丙酮和弱極性有機(jī)溶劑，不溶于水。薯蕷皂苷元（diosgenin）為白色粉末，mp204207， -129。 （C1.4三氯甲烷）?？扇苡谟袡C(jī)溶劑及甲酸中，不溶于水。薯蕷皂苷元在植物體內(nèi)與糖結(jié)合成苷，經(jīng)水解（酸水解、酶水解）可得薯蕷皂苷元和糖。利用薯蕷皂苷元不溶于水，溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì)，用石油醚連續(xù)回流提取，將其從原植物中提取出來。 薯蕷皂苷元 D葡萄糖 L鼠李糖薯蕷皂苷 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、預(yù)試

3、驗(yàn) 在研究天然藥物或中藥化學(xué)成分時(shí)，應(yīng)首先了解其所含化學(xué)成分類型，以便選擇一種適當(dāng)?shù)奶崛》蛛x方法，這就需要進(jìn)行化學(xué)成分的預(yù)試驗(yàn)。預(yù)試驗(yàn)分系統(tǒng)預(yù)試驗(yàn)和單項(xiàng)預(yù)試驗(yàn)。系統(tǒng)預(yù)試驗(yàn)旨在全面檢查各類成分，單項(xiàng)預(yù)試驗(yàn)則是重點(diǎn)檢查某類成分，本試驗(yàn)即選擇此法。要尋找含皂苷的天然藥物或中藥，可單純進(jìn)行皂苷的試驗(yàn)，具體試驗(yàn)方法采用泡沫試驗(yàn)和溶血試驗(yàn)。1泡沫試驗(yàn)取穿山龍粗粉1g，加水浸泡（1：10）1小時(shí)或置80水浴上溫浸30分鐘，過濾得濾液供以下試驗(yàn)。取供試液2ml于試管中，緊塞試管口后猛力振搖，試管內(nèi)液體則產(chǎn)生大量的持久性的似蜂窩狀泡沫（示有皂苷）。注：含蛋白質(zhì)和粘液質(zhì)的水溶液雖也能產(chǎn)生泡沫，但不持久，放置很快消

4、失。2溶血試驗(yàn)取2血球懸浮液1ml，加生理鹽水8ml，再加用于泡沫試驗(yàn)濾液1ml，混合均勻后放置，幾分鐘內(nèi)溶液由紅色混濁變成紅色透明，產(chǎn)生溶血現(xiàn)象（示有皂苷）。（注：此試驗(yàn)可同時(shí)作空白對(duì)照以比較現(xiàn)象更為明顯。操作方法相同，只以生理鹽水lml代替供試液即可）。二、薯蕷皂苷元的提取、分離穿山龍粗粉（50g）置圓底燒瓶中，加水250ml、濃H2SO 420ml， 室溫浸泡24小時(shí)，文火加熱回流46小時(shí)， 放冷，傾出酸水液酸性藥渣用清水漂洗3次，然后將藥渣倒入乳缽中，加Na2CO3粉末，反復(fù)研磨調(diào)PH至中性、水洗、抽干中性藥渣 低溫（80）干燥12小時(shí) 干燥藥渣置乳缽中研成細(xì)粉，置索氏提取器中，以石油

5、醚（60-90）為溶劑，連續(xù)回流提取4-5小時(shí)。 石油醚提取液回收石油醚至剩10-15ml，迅速傾入小三角燒瓶中、放置使充分冷卻，濾過 濾液 沉淀用少量冷石油醚洗二次，抽干薯蕷皂苷元粗品無水EtOH或CHCl3-MeOH（9：1）重結(jié)晶薯蕷皂苷元精品進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造各種不同的甾體藥物三、薯蕷皂苷元的鑒定1物理常數(shù)的測(cè)定：測(cè)定熔點(diǎn)和旋光。2化學(xué)檢識(shí)（1）醋酐濃硫酸反應(yīng)（Liebermann-Burchard反應(yīng)）取樣品適量，加冰醋酸0.5ml使溶解，續(xù)加醋酐0.5ml攪勻，再于溶液的邊沿滴加1滴濃硫酸，觀察并記錄現(xiàn)象。（2）三氯甲烷濃硫酸反應(yīng)（Salkowski反應(yīng)）取樣品適量，加三氯甲烷1ml使溶

6、解，沿試管壁加等量的濃硫酸，分別置可見光及紫外燈下，觀察并記錄現(xiàn)象3UV鑒定UvH2SO4maxnm（log）：334(3.68) 412(4.1) 512(3.52)4薄層色譜吸附劑：硅膠CMC薄層板樣 品：5%自制薯蕷皂苷元的乙醇液對(duì)照品：5%薯蕷皂苷元標(biāo)準(zhǔn)品的乙醇液展開劑：苯-乙酸乙酯（8:2）顯色劑： 5%磷鉬酸乙醇溶液，105加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。實(shí)驗(yàn)說明及注意事項(xiàng)1原料經(jīng)酸水解后應(yīng)充分洗滌呈中性，以免烘干時(shí)炭化。2在干燥水解原料的過程中，應(yīng)注意壓散團(tuán)塊和勤翻動(dòng)，以利快干。3在連續(xù)回流提取過程中，由于使用的石油醚極易揮發(fā)損失，故水浴溫度不宜過高，能使石油醚微沸即可。此外可加快冷凝水的流速，以增加冷凝效果。4回收石油醚的蒸餾操作，不必另?yè)Q蒸餾裝置。只將索氏提取器中的濾紙筒取出，再照原樣裝好，繼續(xù)加熱回收燒瓶中的溶劑，待溶劑液面增加至高虹吸管頂部彎曲處1cm處，暫?；厥?，取下提取器，將其中石油醚移置另外容器中，如此反復(fù)操作，即可完成回收石油醚的操作。5在連續(xù)提取過程中，欲檢查有效成分是否提取完全，可取提取器中提取液數(shù)滴，滴于白瓷皿中，揮散溶劑，觀察有無殘留物，然后進(jìn)行醋酐濃硫酸反應(yīng)。若反應(yīng)呈陰性，示已提盡。6所得薯蕷皂苷元粗品可作熔點(diǎn)測(cè)定，若測(cè)定不合格時(shí)再進(jìn)行重結(jié)晶處理。思考題1甾體皂苷可用哪些反應(yīng)進(jìn)行鑒定？2試設(shè)計(jì)一種從穿山龍中提取薯蕷皂苷的工藝流程，并說