微生物學復習【生科類專業(yè)】匯總

1、微生物學復習重點（上）【生科類專業(yè)】灰默整理 微生物的五大共性： 體積小、面積大:它是微生物五大共性的基礎. 吸收多，轉化快: 生長旺，繁殖快: 分布廣、種類多: 適應強、易變異:細胞壁功能：1、固定細胞外形2、協(xié)助鞭毛運動3、保護細胞免受外力的損傷4、為正常細胞分裂所必需5、阻攔有害物質(zhì)進入細胞：如革蘭氏陰性細菌細胞壁可阻攔分子量超過800的抗生素通過。6、與細菌的抗原性、致病性和對噬菌體的敏感性密切相關。細胞壁中的幾種特殊成分：v肽聚糖：是真細菌細胞壁中特有的成分。每一肽聚糖單體由三個部分組成：雙糖單位：由N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸通過-1，4糖苷鍵連接而成。四肽尾：是4個氨基酸分子

2、按L型與D型交替方式連接而成。在革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌中氨基酸組成有所差異。肽橋：起著連接前后兩個四肽尾分子的橋梁作用。連接甲肽尾的第四個氨基酸的羧基和乙肽尾第三個氨基酸的氨基。肽橋的變化甚多，由此形成了肽聚糖的多樣性。v磷壁酸：是革蘭氏陽性細菌細胞壁所特有的成分。是結合在G+細菌細胞壁上的一種酸性多糖,主要成分為甘油磷酸或核糖醇磷酸。磷壁酸的主要生理功能：一 通過分子上的大量負電荷濃縮細胞周圍的Mg2+，以提高細胞膜上一些合成酶的活性。 二 貯藏元素。 三 調(diào)節(jié)細胞內(nèi)自溶素（autolysin）的活力，借以防止細胞因自溶而死亡。 四 作為噬菌體的特異性吸附受體。 五 賦予G+細菌特異的表

3、面抗原，因而可用于菌種鑒定。 六 增強某些致病菌對宿主細胞的粘連，避免被白細胞吞噬，并有抗補體作用。v脂多糖LPS：是革蘭氏陰性菌細胞壁所特有的成分。位于革蘭氏陰性細菌細胞壁最外層的一較厚（8-10nm）的類脂多糖類物質(zhì)，由類脂A、核心多糖和O-特異側鏈3部分組成。LPS的主要功能：（1）是革蘭式陰性細菌致病物質(zhì)的基礎，類脂A為革蘭氏陰性細菌內(nèi)毒素的毒性中心；（2）具有吸附鎂離子和鈣離子等陽離子以提高它們在細胞表面的濃度的作用；（3）脂多糖特別是其中的O-特異性多糖的組成和結構的變化決定了革蘭氏陰性細菌細胞表面抗原決定簇的多樣性，比如國際上根據(jù)脂多糖的結構特性而鑒定過沙門氏菌屬（Salmone

4、lla）的抗原類型多達2107個（1984年）；（4）是許多噬菌體在細菌表面的吸附受體。G細菌和G+細菌肽聚糖的單體結構比較基本相似，區(qū)別：四肽尾的第3個氨基酸不是L-Lys，而是被一種原核微生物細胞壁上特有的內(nèi)消旋二氨基庚二酸；沒有特殊的肽橋。革蘭氏陰性菌,大多數(shù)腸道菌多屬于革蘭氏陰性菌，它們產(chǎn)生內(nèi)毒素，靠內(nèi)毒素使人致病.常見的革蘭氏陰性菌有痢疾桿菌、傷寒桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、綠膿桿菌、百日咳桿菌、霍亂弧菌及腦膜炎雙球菌等。革蘭氏陰性菌則對青霉素不敏感,可以選擇氟喹諾酮類藥物如諾氟沙星，左氧氟沙星等，也可以選擇大環(huán)內(nèi)酯類比如克拉霉素、羅紅霉素等。革蘭氏陽性菌，大多數(shù)化膿性球菌都屬于革蘭氏

5、陽性菌，它們能產(chǎn)生外毒素使人致病，常見的革蘭氏陽性菌有：葡萄球菌、鏈球菌、肺炎雙球菌、炭疽桿菌、白喉桿菌、破傷風桿菌等?？梢赃x擇青霉素族，頭孢曲松鈉等。溶菌酶（lysozyme）是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶。因此，該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。主要通過破壞細胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之間的-1,4糖苷鍵，使細胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導致細胞壁破裂內(nèi)容物逸出而使細菌溶解。青霉素是B-內(nèi)酰胺抗生素，在細胞繁殖期起殺菌作用。青霉素作用機制是干擾細菌細胞壁的合成。 其對革蘭陽性菌有效，由于革蘭陰性菌缺乏五肽交連橋而青霉素對其作用不大。青霉素對溶血性鏈球菌等鏈球菌屬，肺

6、炎鏈球菌和不產(chǎn)青霉素酶的葡萄球菌具有良好抗菌作用。本品對梭狀芽孢桿菌屬、消化鏈球菌、厭氧菌以及產(chǎn)黑色素擬桿菌等具良好抗菌作用，對脆弱擬桿菌的抗菌作用差。內(nèi)毒素（endotoxin）作用于白細胞，血小板，補體系統(tǒng)，凝血系統(tǒng)。外毒素是指某些病原菌生長繁殖過程中分泌到菌體外的一種代謝產(chǎn)物，為次級代謝產(chǎn)物。其主要成分為可溶性蛋白質(zhì)。區(qū)別要點外毒素內(nèi)毒素產(chǎn)生菌多數(shù)革蘭氏陽性菌，少數(shù)革蘭氏陰性菌多數(shù)革蘭氏陰性菌，少數(shù)為革蘭氏陽性（如蘇云金芽孢桿菌）存在部位多數(shù)活菌分泌出，少數(shù)菌裂解后釋出。細胞壁組分，菌裂解后釋出化學成份蛋白質(zhì)脂多糖毒性作用強，對組織細胞有選擇性毒害效應，引起特殊臨床表現(xiàn)較弱，各種類的毒性

7、效應相似，引起發(fā)熱、白細胞增多、微循環(huán)障礙、休克等免疫抗原性強，刺激宿主產(chǎn)生抗毒素。較弱，甲醛液處理后不形成類毒素。穩(wěn)定性60半小時被破壞。1602-4小時被破壞處理方式特定抗生素治療為主。消炎藥物、抗氧化劑治療為主。簡述革蘭氏染色法的機制并說明此法的重要性。 革蘭氏染色機制結晶紫液初染和碘液媒染：在細菌的細胞膜內(nèi)可形成不溶于水的結晶紫與碘的復合物。乙醇脫色： G細胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次多和交聯(lián)致密且不含類脂 ，把結晶紫與碘的復合物牢牢留在壁內(nèi)，使其保持紫色； G-細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄和文聯(lián)度差，結晶紫與碘復合物的溶出，細胞退成無色。 復染: G-細菌呈現(xiàn)紅色，而G+細菌則仍

8、保留最初的紫色。糖被 包裹在單個細胞上松散，沒有固定層：粘液層有薄的固定層：微莢膜有厚的固定層：厚莢膜有厚的固定層：厚莢膜糖被的生理功能：1、莢膜富含水分，可保護細胞免于干燥；2、能抵御吞噬細胞的吞噬；3、為主要表面抗原（K抗原），是有些病原菌的毒力因子；4、能保護菌體免受噬菌體和其他物質(zhì)（溶菌酶和補體）的侵害；5、是某些病原菌必須的粘附因子；6、貯藏養(yǎng)料，是細胞外碳源和能源的儲備物質(zhì)。細菌鞭毛可區(qū)分為基體、鞭毛鉤和鞭毛絲三個部分。G+細菌的基體有S、M環(huán)和中心桿組成；G-細菌的基體由L、P、S、M四個環(huán)和中心桿組成。立克次氏體（Rickettsia）為革蘭氏陰性菌，是一類專性寄生于真核細胞內(nèi)

9、的G-原核生物。是介于細菌與病毒之間，而接近于細菌的一類原核生物。一般呈球狀或桿狀,是專性細胞內(nèi)寄生物，主要寄生于節(jié)肢動物，有的會通過蚤、虱、蜱、螨傳入人體、如斑疹傷寒、戰(zhàn)壕熱。假單胞菌科（Pseudomonadaceae）氧化酶陽性，糖代謝方式為呼吸型。營養(yǎng)要求簡單，大部分菌種在不含維生素、氨基酸的合成培養(yǎng)基中仍能良好生長。假單胞菌屬的細菌多具有分解蛋白質(zhì)和脂肪的能力，其中有些分解能力很強。部分菌株可產(chǎn)生水溶性熒光色素。固氮菌：菌體桿狀、卵圓形或球形，無內(nèi)生芽孢，革蘭氏染色陰性。嚴格好氧性，有機營養(yǎng)型，能固定空氣中的氮素。包括固氮菌屬、氮單孢菌屬、拜耶林克氏菌屬和德克斯氏菌屬。固氮菌肥料多由

10、固氮菌屬的成員制成細菌、放線菌、酵母菌、霉菌四大類微生物的菌落有何不同？為什么？菌落 細菌 酵母菌 放線菌 霉菌 含水形態(tài) 很濕或較濕 較濕 干燥或較干燥 干燥 外觀形態(tài) 小而突起或大而平坦 大而突起 小而緊密 大而疏松或大而致密 菌落透明度 透明或稍透明 稍透明 不透明 不透明 菌落與培養(yǎng)基結合程度 不結合 不結合 牢固結合 較牢固結合 菌落顏色 多樣 單調(diào)，一般呈乳脂或礦燭色，少數(shù)紅色或黑色 菌落正反面顏色的差別 相同 相同 一般不同 一般不同 菌落邊緣 一般看不到細胞 可見球狀，卵圓狀或假絲狀細胞 有時可見細絲狀細胞 可見粗絲狀細胞 氣味 一般有臭味 多帶酒香味 帶有泥腥味 往往有霉味

11、原因：因為細菌、放線菌、酵母菌和霉菌的形態(tài)和生理類型不盡相同，所以在其菌落形態(tài)，構造等特征上也有各自的特點。支原體與L型細菌的最主要區(qū)別是？L型是指細菌發(fā)生細胞壁缺陷的變型。當細菌細胞壁中的肽聚糖結構受到理化或生物因素的直接破壞或合成被抑制這種細胞壁受損的細菌一般在普通環(huán)境中不能耐受菌體內(nèi)部的高滲透壓而將脹裂死亡；但在高滲環(huán)境下，它們?nèi)钥纱婊疃蔀榧毦毎谌毕菪汀?支原體與L型細菌均沒有細胞壁，但兩者是兩種截然不同的物種。支原體不受青霉素的影響而發(fā)生形態(tài)上的變化，而L型細菌本質(zhì)上仍然是細菌，只不過它是細菌在特定條件下為適應環(huán)境而產(chǎn)生的變化，導致細菌發(fā)生這種變化的理化因素就包括抗生素（eg青霉

12、素）因此，在有或無青霉素的情況下L型細菌的形態(tài)會有所變化。放線菌根據(jù)菌絲的著生部位、形態(tài)和功能的不同，放線菌菌絲可分為基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和孢子絲三種。孢子的產(chǎn)生，僅有橫隔分裂。藍細菌中的羧酶體是固定CO的場所，異形胞可以合成固氮酶，段殖體可以發(fā)育成新的絲狀體，靜息孢子是一種特異性的、靜止的、用以抵抗干燥的休眠細胞，也可以萌發(fā)形成新的絲狀體?！竞喪鼋湍妇姆敝撤绞?，圖示釀酒酵母的生活史 并說明各階段的特點】 繁殖方式：無性繁殖：芽殖 裂殖 產(chǎn)生擲孢子等無性孢子 有性繁殖產(chǎn)生子囊及子囊孢子 各階段的特點：子囊孢子發(fā)芽產(chǎn)生單倍體營養(yǎng)細胞單倍體營養(yǎng)細胞出芽繁殖異性營養(yǎng)細胞接合，質(zhì)配核配，形成二倍體細胞

13、二倍體營養(yǎng)細胞不進行核分裂，出芽繁殖二倍體細胞變成子囊，減數(shù)分裂，形成4子囊孢子子囊破壁后釋放出單倍體子囊孢子菌絲的變態(tài)：吸器、假根和匍匐菌絲、菌環(huán)和菌網(wǎng)?！揪恕空婢L到一定階段，菌絲體不斷地分化，相互糾結在一起形成一個顏色較深而堅硬的菌絲體組織顆粒。【子座(Stroma)】某些高等真菌菌絲體形成的一種組織體，是菌絲分化形成地墊狀結構，或是菌絲體與寄主組織或基物結合而成地墊狀結構物。【孢子】真菌無性孢子和有性孢子各有哪些類型？真菌無性繁殖產(chǎn)生的各種孢子統(tǒng)稱無性孢子，可分為游動孢子、孢囊孢子、分生孢子、厚垣孢子、節(jié)孢子和芽孢子。真菌有性生殖產(chǎn)生的孢子稱有性孢子，有卵孢子、接合孢子、子囊孢子和

14、擔子孢子等?！厩嗝购颓沟牟煌壳沟逆咦庸Ｊ禽椛錉钆帕?呈頭狀.分生孢子梗頂端膨大成為頂囊，一般呈球形。項囊表面長滿一層或兩層輻射狀小梗(初生小梗與次生小梗)。最上層小梗瓶狀，頂端著生成串的球形分生孢子.曲霉廣泛分布在谷物、空氣和土壤中，曲霉直立菌絲的頂端膨大成球狀，球狀結構的表面放射狀地生有成串的孢子，孢子隨曲霉種類的不同而呈黃色、橙色或黑色。青霉分生孢子成帚狀。從菌絲體伸向空中，各頂端的小梗產(chǎn)生鏈狀的青綠褐色的分生孢子。分生孢子頂端無膨大。青霉常分布在霉腐變質(zhì)的水果、蔬菜、糧食和皮革等物體上，菌體直立菌絲的頂端長有掃帚狀的結構，結構的每一個分枝上，生有成串的孢子，成熟的孢子呈青綠色，進行

15、孢子生殖?！静《局饕攸c是】形體極其微小，一般都能通過細菌濾器，因此病毒原叫“濾過性病毒”，必須在電子顯微鏡下才能觀察。沒有細胞構造，其主要成分僅為核酸和蛋白質(zhì)兩種，故又稱“分子生物”；每一種病毒只含一種核酸，不是DNA就是RNA。既無產(chǎn)能酶系，也無蛋白質(zhì)和核酸合成酶系，只能利用宿主活細胞內(nèi)現(xiàn)成代謝系統(tǒng)合成自身的核酸和蛋白質(zhì)成分。以核酸和蛋白質(zhì)等“元件”的裝配實現(xiàn)其大量繁殖。在離體條件下，能以無生命的生物大分子狀態(tài)存在，并長期保持其侵染活力。對一般抗生素不敏感，但對干擾素敏感。有些病毒的核酸還能整合到宿主的基因組中，并誘發(fā)潛伏性感染?！静《玖Ｓ心膸追N對稱體制？每種對稱又有幾類特殊外形？】螺旋對

16、稱型TMV 呈直桿狀，中空TMV,菸草鑲嵌病毒（Tobacco mosaic virus；TMV），又譯為煙草花葉病毒二十面體對稱腺病毒 外形呈典型的二十面體復合對稱T偶數(shù)噬菌體 呈蝌蚪狀【什么叫烈性噬菌體？簡述其裂解性生活史】 烈性噬菌體：凡在短時間內(nèi)能連續(xù)完成吸附、侵入、增殖、成熟、 裂解這五個階段而實現(xiàn)其繁殖的噬菌體，稱為烈性噬菌體。 吸附 噬菌體尾絲散開，固著于特異性受點上。 侵入 尾鞘收縮，尾管推出并插入到細胞壁和膜中，頭部的核酸注入到宿主細胞中，而蛋白質(zhì)衣殼留在細胞壁外。 增殖 增殖過程包括核酸的復制和蛋白質(zhì)的生物合成。注入細胞的核酸操縱宿主細胞代謝機構，以寄主個體及細胞降解物和培

17、養(yǎng)基介質(zhì)為原料，大量復制噬菌體核酸，并合成蛋白質(zhì)外殼。 成熟（裝配）寄主細胞合成噬菌體殼體(T4噬菌體包括頭部、尾部),并組裝成完整的噬菌體粒子。 裂解（釋放）子代噬菌體成熟后，脂肪酶和溶菌酶促進宿主細胞裂解，從而釋放出大量子代噬菌體?！臼裁词且徊缴L曲線？它可分幾期？各期有何特點？】 一步生長曲線 ： 定量描述烈性噬菌體增殖規(guī)律的實驗曲線稱作一步生長曲線或一級生長曲線。潛伏期 從噬菌體吸附細菌細胞至細菌細胞釋放出新的噬菌體的最短時間。又可分為隱晦期和胞內(nèi)累積期。裂解期 從被感染的第一個細胞裂解至最后一個細胞裂解完畢所經(jīng)歷的時間。平穩(wěn)期 指被感染的宿主已全部裂解，溶液中噬菌體數(shù)達到最高點后的時

18、期。 裂解量 每個被感染的細菌釋放新的噬菌體的平均數(shù)【烈性噬菌體】凡在短時間內(nèi)能連續(xù)完成吸附、侵入、增殖、成熟、 裂解這五個階段而實現(xiàn)其繁殖的噬菌體，稱為烈性噬菌體?！緶睾托允删w】噬菌體侵染宿主后，并不增殖，裂解，而與宿主DNA結合，隨宿主DNA復制而復制，此時細胞中找不到形態(tài)上可見的噬菌體，這種噬菌體稱為溫和性噬菌體或溶源噬菌體?！倦貌《尽渴且活惸芮秩緞游锊⒃谒拗骷毎麅?nèi)復制的小分子無免疫性疏水蛋白質(zhì)?！拘l(wèi)星病毒（satellite virus）】是一類基因組缺損、需要依賴輔助病毒，基因才能復制和表達，才能完成增殖的亞病毒，不單獨存在，常伴隨著其他病毒一起出現(xiàn)?！緛啿《荆╯ubviruses

19、）】是一類比病毒更為簡單，僅具有某種核酸不具有蛋白質(zhì)，或僅具有蛋白質(zhì)而不具有核酸，能夠侵染動植物的微小病原體。不具有完整的病毒結構的一類病毒稱之為亞病毒，包括類病毒、擬病毒、朊病毒。微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)有：碳源、氮源、生長因子、礦質(zhì)營養(yǎng)元素、水和能源（光能和化能）6大類?！疚⑸锏臓I養(yǎng)類型】【指出四大類微生物的最適生長pH范圍及常用的培養(yǎng)基名稱】細菌（PH 7476）牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 真菌（自然PH）馬鈴薯培養(yǎng)基霉菌（PH 7072）察氏培養(yǎng)基 放線菌（PH 7476）高氏一號培養(yǎng)基【生長適宜】細菌6.5-7.5；放線菌7.5-8.5；酵母菌3.8-6.0；霉菌4.0-5.8；藻類6.0-7

20、.0；原生動物6.0.-8.0【培養(yǎng)基的種類】1.按照培養(yǎng)基的成分來分 培養(yǎng)基按其所含成分，可分為合成培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基三類。2.按照培養(yǎng)基的物理狀態(tài)分 培養(yǎng)基按其物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基三類。3.按照微生物的種類分 培養(yǎng)基按微生物的種類可分為細菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基、酵母菌培養(yǎng)基和霉菌培養(yǎng)基等四類4.按照培養(yǎng)基用途分 培養(yǎng)基按其特殊用途可分為加富培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基?！驹囋O計一個實驗方案，從自然界中篩選得到一株高產(chǎn)蛋白酶的芽孢桿菌菌株，并對分離到的目的菌進行分類鑒定?！?. 采樣：從地表下1015cm的土壤中用無菌小鏟，紙袋取土樣。2. 增

21、殖培養(yǎng)（富集培養(yǎng)）：稱取1g土樣，置于裝有20ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，六層紗布封口，于80水浴加熱處理10min，以殺死樣品中的微生物營養(yǎng)體細胞。然后30， 150 r/min，振蕩培養(yǎng)24h。取樣鏡檢形成芽孢的情況。3. 涂布分離：u將增殖培養(yǎng)液置于80水浴中加熱10min，再次殺死不形成芽孢的營養(yǎng)體細胞，以濃縮芽孢桿菌。u然后取1 mL處理液以10倍稀釋法分別稀釋到10-4，10-5， 10-6等。u分別取0.1mL菌液于無菌的酪素培養(yǎng)基平板上（或者牛奶平板）， 用滅過菌的涂布棒將菌液均勻涂布在平板上，倒置于30培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2448h。u觀察酪素平板（或者牛奶平板）上菌

22、落周圍的透明圈，選擇蛋白水解圈大的菌接入斜面培養(yǎng)基， 30培養(yǎng)24h，備用。4. 純化：用平板劃線分離法在牛肉膏蛋白胨平板上分離純化挑選出的菌株。5. 純種鑒定：菌種經(jīng)革蘭氏染色，油鏡觀察，從細胞形態(tài)及菌落特征進行鑒別。6.分子鑒定：用細菌通用引物PCR擴增出該菌的16srDNA,測序后，根據(jù)序列在網(wǎng)上進行Blast比對，選取和該菌同源性較高的一些序列構建系統(tǒng)發(fā)育樹.7.根據(jù)伯杰氏鑒定細菌學手冊和構建的進化樹綜合結果判定該菌屬于何屬何種?！驹囋O計一個實驗方案，從自然界中篩選得到一株高產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌菌株，并對分離到的目的菌進行分類鑒定。】1. 采樣：從地表下1015cm的土壤中用無菌小鏟，紙

23、袋取土樣。2. 增殖培養(yǎng)（富集培養(yǎng)）：稱取1g土樣，置于裝有20ml淀粉培養(yǎng)基（可溶性淀粉、蛋白胨 、 NaCl 、牛肉膏 ） 的250ml三角瓶中，六層紗布封口，于80水浴加熱處理10min，以殺死樣品中的微生物營養(yǎng)體細胞。然后30， 150 r/min，振蕩培養(yǎng)24h。取樣鏡檢形成芽孢的情況。3. 涂布分離：u將增殖培養(yǎng)液置于80水浴中加熱10min，再次殺死不形成芽孢的營養(yǎng)體細胞，以濃縮芽孢桿菌。u然后取1 mL處理液以10倍稀釋法分別稀釋到10-4，10-5， 10-6等。u分別取0.1mL稀釋菌液于無菌的淀粉培養(yǎng)基平板上。將檢測試劑（路戈氏碘液）加入到平板中，涂布均勻，菌落周圍形成水

24、解圈的菌株即是產(chǎn)淀粉酶的菌株。4. 純化： 挑取有透明圈的單菌落，在淀粉平板上平板劃線分離法進行純培養(yǎng)。5. 純種鑒定：菌種經(jīng)革蘭氏染色，油鏡觀察，從細胞形態(tài)及菌落特征進行鑒別。6.分子鑒定：用細菌通用引物PCR擴增出該菌的16srDNA,測序后，根據(jù)序列在網(wǎng)上進行Blast比對，選取和該菌同源性較高的一些序列構建系統(tǒng)發(fā)育樹.7.根據(jù)伯杰氏鑒定細菌學手冊和構建的進化樹綜合結果判定該菌屬于何屬何種?！驹囋O計一個從土壤中分離高效抑制致病菌金黃色葡萄球菌的拮抗放線菌純培養(yǎng)物的實驗方案（提示：如何采樣、用何種培養(yǎng)基、如何分離并純化），并對分離到的目的菌進行分類鑒定】1 ） 取土樣，制備含玻璃珠無菌水，

25、將土樣制成菌懸液u稱1g土樣放入10ml無菌水試管中振蕩10min，即10-1的土壤懸液，靜置30s。u用無菌吸管無菌操作取10-1濃度的土壤懸液1ml并加入編號10-2的無菌試管中，并吹吸吸管23次，吸時伸入管底，吹時離開水面，使其混合均勻。即為10-2濃度的土壤稀釋液。u依此類推，（每個稀釋度換1 支無菌吸管）。2)制備高氏一號培養(yǎng)基進行分離培養(yǎng)?？刹扇∫韵路绞街弧２扇〉蛊桨宸蛛x培養(yǎng)或稀釋涂布平板法進行純培養(yǎng)。涂布平板法： 用1ml無菌吸管分別精確地吸取稀釋菌液1ml，對號放入編好號的無菌培養(yǎng)皿中，每一濃度對應兩個平板。用無菌涂布棒（從濃度小液開始）將加入平板培養(yǎng)基上的土壤稀釋液在整個平

26、板表面涂勻，涂完一個平板用酒精燈滅菌。傾注平板法： 取上述不同稀釋度菌液，倒入溶化后冷卻至45左右的高氏培養(yǎng)基約1015ml，置水平位置，迅速旋動混勻，待凝固。（若融化的培養(yǎng)基溫度太高，會產(chǎn)生太多的冷凝水，影響觀察。）待菌落長出后，選取具有典型放線菌菌落特征（菌落較小，質(zhì)地致密、干燥、表面呈較緊密的絨狀，菌落周圍具輻射狀菌絲）的菌備用。（ 3） 菌種純化將培養(yǎng)后長出的單個菌落分別挑取少許細胞接種新鮮培養(yǎng)基斜面上，若發(fā)現(xiàn)有雜菌， 可以利用劃線平板法再一次進行分離、純化，直到獲得純培養(yǎng)。4)制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，與金黃色葡萄球菌菌懸液混勻后倒平板。5)在上述純培養(yǎng)的平板上切取生長較好的放線菌落依

27、次放入標注區(qū)域中（在火焰旁切?。?，置于28恒溫箱培養(yǎng)1 天后可觀察到有抑菌圈生成。并比較抑菌圈大小，取抑菌圈較大的菌株進一步作拮抗試驗，進行復篩。6)對獲得的單菌落進行形態(tài)特征觀察和各種生理生化實驗。7）分子鑒定：用細菌通用引物PCR擴增出該菌的16srDNA,測序后，根據(jù)序列在網(wǎng)上進行Blast比對，選取和該菌同源性較高的一些序列構建系統(tǒng)發(fā)育樹。8）根據(jù)伯杰氏鑒定細菌學手冊和構建的進化樹綜合結果判定該放線菌屬于何屬何種。重點復習u試設計一個實驗方案，從自然界中篩選得到一株高產(chǎn)蛋白酶的芽孢桿菌菌株，并對分離到的目的菌進行分類鑒定。u試設計一個實驗方案，從自然界中篩選得到一株高產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌

28、菌株，并對分離到的目的菌進行分類鑒定。u試設計一個從土壤中分離高效抑制致病菌金黃色葡萄球菌的拮抗放線菌純培養(yǎng)物的實驗方案， 并對分離到的目的菌進行分類鑒定?！疚⑸锏拇x】根據(jù)微生物初級能源的不同，可將利用有機物、還原態(tài)無機物和日光的微生物分別稱為化能異養(yǎng)微生物、化能自養(yǎng)微生物與光能營養(yǎng)微生物。【比較紅螺菌與藍細菌光合作用的異同?！考t螺菌進行光合作用，是走環(huán)式光合磷酸化的途徑產(chǎn)生ATP，沒有氧氣的放出。藍細菌進行光合作用是走非環(huán)式光合磷酸化的途徑，在非環(huán)式光合磷酸化途徑中，能光解水，有氧氣放出，并有還原力產(chǎn)生?！景l(fā)酵】無氧條件下，底物脫氫后產(chǎn)生的還原力不經(jīng)呼吸鏈而直接傳遞給某一中間代謝物的低效

29、產(chǎn)能反應?！就緩酵緩?在化能異養(yǎng)微生物的生物氧化中，其基質(zhì)脫氫和產(chǎn)能的途徑主要有哪幾條？試比較各途徑的主要特點】 脫氫和產(chǎn)能的途徑：EMP、HMP、ED、TCA 特點：EMP 當葡萄糖轉化成1.6-二磷酸果糖后，在果糖二磷酸醛縮酶作用下，裂解為兩 個3化合物，再由此轉化為2分子丙酮酸。 HMP 當葡萄糖經(jīng)一次磷酸化脫氫生成6-磷酸葡萄糖酸后，在6-磷酸葡萄糖酸脫酶作用下，再次脫氫降解為1分子CO2和1分子磷酸戊糖。ED 是少數(shù)EMP途徑不完整的細菌所特有的利用葡萄糖的替代途徑。一分子葡萄糖經(jīng)ED途徑可生成兩個丙酮酸并凈生成一個ATP、一個NADH+H+和一個NADPH+H+。【試述EMP途徑在

30、微生物生命活動中的重要性】 供應ATP形式的能量和NADH2形式的還原力；是連接其它幾個重要代謝途徑的橋梁，包括TCA、HMP和ED途徑等；為生物合成提供多種中間代謝物；通過逆向反應可進行多糖合成?！驹囀鯤MP途徑在微生物生命活動中的重要性】 供應合成原料；產(chǎn)還原力；作為固定CO2的中介；擴大碳源的利用范圍；連接EMP途徑。【（未解決）釀酒酵母和酒精運動單胞菌的異同】細菌的酒精發(fā)酵途徑如何？它與酵母菌的酒精發(fā)酵有何不同？細菌的酒精發(fā)酵有何優(yōu)缺點？酒精發(fā)酵途徑ED, 酵母菌的酒精發(fā)酵EMP 優(yōu)缺點: a.優(yōu)點：代謝速率高；產(chǎn)物轉化率高；菌體生成少；代謝副產(chǎn)物少；發(fā)酵溫度高；不必定期供氧；細菌為原

31、核生物，易于用基因工程改造菌種；厭氧發(fā)酵，設備簡單。b.缺點：生長pH為5，較易染菌；細菌耐乙醇力較酵母菌為低（細菌7%乙醇，酵母菌耐8-10%乙醇）；底物范圍窄（葡萄糖、果糖）?！居醒鹾粑渴且环N最重要最普遍的生物氧化過程，其特點是底物按常規(guī)方式（EMP,HMP,TCA）脫下來的氫經(jīng)完整呼吸鏈傳遞，最終由氧氣接受形成水并釋放能量（ATP）?！緹o氧呼吸】無氧呼吸又稱厭氧呼吸，是一類呼吸鏈末端的氫受體為外源無機氧化物（少數(shù)為有機氧化物）的生物氧化。【硝化作用和反硝化作用的比較】硝化作用是指異養(yǎng)微生物進行氨化作用產(chǎn)生的氨，被硝化細菌、亞硝化細菌氧化成亞硝酸，再氧化成硝酸的過程。反硝化作用即硝酸還原

32、作用。土壤中存在許多化能異養(yǎng)型反硝化細菌，在通氣不良，缺少氧氣的條件下，可利用硝酸中的氧，使葡萄糖氧化成二氧化碳和水并釋放能量?！倦木厶堑暮铣商攸c】合成機制復雜，步驟多，且合成部位幾經(jīng)位移；需要能夠轉運與控制肽聚糖結構元件的載體參與。根據(jù)發(fā)生部位可將合成過程分成3個階段：細胞質(zhì)階段，合成派克（park）核苷酸；細胞膜階段，合成肽聚糖單體；細胞膜外階段，交聯(lián)作用形成肽聚糖。【青霉素抑制轉肽作用的機制】青霉素通過抑制細菌細胞壁四肽則鏈和五肽交連橋的結合而阻礙細胞壁合成而發(fā)揮殺菌作用。對革蘭陽性菌有效，由于革蘭陰性菌缺乏五肽交連橋而青霉素對其作用不大。青霉素為何只能抑制代謝旺盛的細菌？其制菌機制如何

33、？原因：青霉素抑制肽聚糖的合成過程，形成破裂的細胞壁，代謝旺盛的細菌才存在肽聚糖的合成，因此此時有青霉素作用時細胞易死亡。作用機制：青霉素破壞肽聚糖合成過程中肽尾與肽橋間的轉肽作用?！旧锕痰抗痰⑸锢霉痰傅拇呋饔脤⒎肿討B(tài)氮轉化為氨的過程?！竟痰饔玫囊饬x】生物固氮將大氣中游離態(tài)的氮元素轉變成生物體能直接吸收利用的氮元素，而氮元素是生物體蛋白質(zhì)組成的必需元素，也是生物生長必須的大量元素之一，同時還參與多種生命活動。大氣中的氮氣以氮氮三鍵結合，結合非常緊密，很不容易被生物直接吸收。人工固氮的效率不高，而且高溫高壓的條件也比較苛刻，而雷電固氮火山噴發(fā)固氮所固定的氮素很難被收集。同時生物固

34、氮所固定的氮素站世界上固氮量的90%，占絕對的數(shù)量，同時促進了生態(tài)圈物質(zhì)的循環(huán)，因此生物固氮作用在整個生物界具有極為重要的意義【什么是典型生長曲線？它可分幾期？劃分的依據(jù)是什么？各期特點如何？】 典型生長曲線 ：將少量純種單細胞微生物接種到恒容積的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)。在適宜條件下，其群體就會有規(guī)律地生長，定時取樣測定細胞含量，以細胞數(shù)目的對數(shù)值作縱坐標，以培養(yǎng)時間作橫坐標，就可以畫出一條有規(guī)律的曲線，這就是微生物的典型生長曲線。 劃分的依據(jù)：單細胞微生物。 (1)延滯期(停滯期、調(diào)整期) 特點：a.生長速率常數(shù)為零；b.細胞形態(tài)變大或增大；c.細胞內(nèi)RNA尤其是rRNA含量增高，原生質(zhì)呈嗜堿性。

35、d.合成代謝活躍；e.對外界不良條件的反應敏感。 (2) 對數(shù)期 特點：此時菌體細胞生長的速率常數(shù)R最大，分裂快，代時短，細胞進行平衡生長，菌體內(nèi)酶系活躍，代謝旺盛，菌體數(shù)目以幾何級數(shù)增加，群體的形態(tài)與生理特征最一致，抗不良環(huán)境的能力強。穩(wěn)定期 特點：a.生長速率常數(shù)為零；b.菌體產(chǎn)量達到最高；c.活菌數(shù)相對穩(wěn)定；d.細胞開始貯存貯藏物；e.芽孢在這個時期形成；f.有些微生物在此時形成次生代謝產(chǎn)物。 衰亡期 特點：a.細胞形態(tài)多樣；b.出現(xiàn)細胞自溶現(xiàn)象；c.有次生代謝產(chǎn)物的形成；d.芽孢在此時釋放?！就脚囵B(yǎng)】指使細胞的分裂周期為同步的培養(yǎng)方法。兩類方法：機械篩選法和環(huán)境條件控制法。微生物生長

36、的影響因素：營養(yǎng)條件、溫度pH、氧氣、滲透壓、光和輻射以及化學物質(zhì)。【試述高溫滅菌的方法?！?1、干熱滅菌法（1）原理：干熱可使破壞細胞膜破壞、蛋白質(zhì)變性和原生質(zhì)干燥，并可使各種細胞成分發(fā)生氧化變質(zhì)。（2）應用范圍：1）烘箱內(nèi)熱空氣滅菌法（150170，12hr）：金屬器械、洗凈的玻璃器皿。2）火焰灼燒法：接種環(huán)、接種針等。2、濕熱滅菌： 即以100以上的加壓蒸氣進行滅菌。（1）相同溫度及相同作用時間下，濕熱滅菌法比干熱滅菌法更有效：濕熱空氣穿透力強，能破壞維持蛋白質(zhì)空間結構和穩(wěn)定性的氫鍵，能加速其變性。（2）種類：1)常壓法a.巴氏消毒法： 用較低的溫度處理牛乳或其他液態(tài)食品，殺死其中可能存在的無芽孢病原菌而又不損害營養(yǎng)與風味的消毒方法。a)低溫維持法(LTH)：要求62.8保持30min；b)高溫瞬時法(HTST)：要求71.7維持至少15s；b.煮沸消毒法：