徒手切片制作方法

1、一、目的要求 徒手切片法是觀察植物內(nèi)部結(jié)構(gòu)的簡(jiǎn)易制片法。所需的儀器用具簡(jiǎn) 單，藥品經(jīng)濟(jì)，操作方便，費(fèi)時(shí)較短，且易于保持材料的天然色澤和 活體結(jié)構(gòu)，必要時(shí)，也可經(jīng)過(guò)脫水、染色制成永久制片而保存。但是 徒手制片對(duì)于體積過(guò)小，質(zhì)地太軟或太硬的材料，則難于處理，同時(shí), 也不能制成連續(xù)切片，這些均為不足之處。二、材料、用品 1、用品 顯微鏡、剃頭刀（或刀片）、毛筆、鑷子、培養(yǎng)皿、染色皿（或小酒 杯）、吸管、載玻片、蓋玻片、吸水紙。1%番紅水溶液（或50%酒精 溶液），0.5%固綠95%酒精溶液，70%、85% 95%酒精，純酒精、二 甲苯和中性樹(shù)膠或加拿大樹(shù)膠等。三、方法與步驟1、選材 所用材料不宜太軟

2、或太硬。一般植物幼嫩的根莖或一些植物的葉片、 葉柄等均可使用此法。質(zhì)地較薄的材料，如葉片，可沿主脈兩側(cè)切成 寬約56毫米，長(zhǎng)11.5厘米的小塊，夾在夾持物（如胡蘿卜根或馬 鈴薯塊莖等）中進(jìn)行切片。使用夾持物時(shí)，先將夾持物的中央切成兩 半，然后將切好的材料夾入，合攏夾持物進(jìn)行切片，也可將葉片卷成 筒狀再切。2、切片(1) 盛清潔的水于培養(yǎng)皿中。然后用左手的拇指及食指、中指夾住 材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外23毫米, 材料的切面必須保持水平方向。(2) 右手執(zhí)刀佛y頭刀或刀片)，平放在左手食指之上，刀口向內(nèi), 自左前方向右后方滑行切割，要用臂力，不要用腕力，不可向內(nèi)平切。(3

3、) 拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停頓或似拉鋸式，以免損傷 材料或切得不平。(4) 切片過(guò)程中，如發(fā)現(xiàn)由于用力不均而使材料表面傾斜時(shí)，必須立 即削平。(5) 刀片或剃刀必須鋒利，材料及切片均需經(jīng)常沾水，以保持材料濕 潤(rùn)、潤(rùn)滑。(6) 切下的薄片可隨時(shí)涮入培養(yǎng)皿的水中，以備觀察；等切到相當(dāng)數(shù)量 后;再選擇其中最薄的透明度最大的做成臨時(shí)玻片觀察。如想短期保 存，可用水或甘油封藏。如希望長(zhǎng)期保存所切的材料，則還要經(jīng)過(guò)以 下幾個(gè)步驟做成永久玻片標(biāo)本。3、固定 挑選出符合要求的切片，用毛筆移入盛有70%酉精的染色皿中進(jìn)行固 定。固定時(shí)間為16分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間。4、染色、脫水、透明(1)用吸水管吸去70

4、%酒精，染以1%番紅(50%酒精溶液)約30 分鐘。(2)再用吸管吸去番紅，換用70% 85% 95%酒精進(jìn)行沖洗、脫水,每級(jí)酒精35分鐘。(3)復(fù)染色。吸去酒精，用0.5%固綠(95%酒精溶液)進(jìn)行復(fù)染色，時(shí)間為0.5分鐘。(4) 沖洗、脫水。用95%酒精沖洗1次，時(shí)間10秒。后移入純酒精 中脫水23次，每次35分鐘。(5) 透明。吸去純酒精，放入1/2二甲苯一1/2純酒精溶液中脫水和 透明1次，時(shí)間5分鐘。(6) 吸去脫水透明液，換以純二甲苯透明 2次，時(shí)間5分鐘。5、封片、貼標(biāo)簽 將已透明材料用鑷子或解剖針輕挑于清潔的載玻片上，滴上中性樹(shù) 膠，蓋上蓋玻片進(jìn)行干燥。在已封好的切片左邊貼上標(biāo)

5、簽，注明材料名稱、制作日期和制作者姓 名等項(xiàng)，以便查考。較好的切片，其木質(zhì)化的細(xì)胞壁和細(xì)胞核可染成紅色， 細(xì)胞質(zhì)和纖維 素的壁則常被染成綠色, 紅綠相襯，有利于觀察、分辨植物體的內(nèi)部結(jié)構(gòu)?，F(xiàn)將徒手切片制片的簡(jiǎn)要步驟歸納如下選材7切片7固定（70%酉精尸1%番紅（50%酉精溶液）染色7 70%酉精 沖洗7脫水（85%酒精、95%酒精）7 0.5%固綠（95%酒精溶液）復(fù)染色7沖洗（95%酒精1次）7進(jìn)一步脫水（純酒精23次）7透明（1/2純酒精十1/2二甲苯及純二甲苯各二次）7封片（中性樹(shù)膠）7貼標(biāo)簽。附：藥品的簡(jiǎn)單配方（1） 1%番紅：于蒸餾水或50%酒精100毫升中溶入番紅粉末I克, 過(guò)濾后

6、使用。（2） 0.5%固綠：95%酒精100毫升中加入固綠粉末0.5克。徒手切片方法的改進(jìn)徒手切片技術(shù)運(yùn)用在植物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的歷史較為悠久，在石蠟切 片之前，基本上使用徒手切片。它的優(yōu)點(diǎn)在于可以觀察新鮮材料組織 和細(xì)胞的天然色彩，看到活體細(xì)胞結(jié)構(gòu)狀態(tài)，所以徒手切片運(yùn)用在植物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中比較普遍。為了克服傳統(tǒng)徒手切片技術(shù)中的不足，我,軟硬質(zhì)們進(jìn)行了改進(jìn)，改為皮套加刀片。這種切片方法切片速度快 材料都可以切，不需要任何夾物，既經(jīng)濟(jì)適用，又簡(jiǎn)單易行。1材料用品 雙面刀片1個(gè)直徑11.5 cm的乳膠管，毛筆、培養(yǎng)皿、載玻片、 蓋玻片、吸水紙，質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%的中性紅染液或紅墨水，新鮮的植物根、 莖、葉、花

7、藥和子房等。2切法 將直徑1 1.5 cm的乳膠管剪成3.5 cm長(zhǎng)的一段,用剪子從中間剖 開(kāi)扣在右手的大拇指上，注意皮套一定要高于拇指，把要切的植物材 料，緊貼在皮套的外側(cè)。如果是葉可以把它卷緊，所切的材料不可過(guò) 長(zhǎng),大約22.5 cm即可。此時(shí)用食指與中指和拇指一起把材料捏住 幼嫩的材料捏時(shí)不可用力過(guò)猛，以免損壞組織細(xì)胞。右手的拇指和食 指捏住雙面刀片的一側(cè)，手腕端平，把刀片的前端與要切的材料保持 垂直相接狀態(tài)，先切平材料，然后用腕力向內(nèi)連續(xù)切片，刀片只要搭 住材料就可以垂直切片。另外還可以用同樣的方法將雙面刀片的先端與材料搭住、垂直、從右 向左推切，如此連續(xù)切下去，然后用毛筆將切得薄而透明的材料刷入 培養(yǎng)皿的水中，避免干燥。3染色、封片 把載玻片和蓋玻片用紗布擦拭干凈，放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，加上1滴中性紅 染液或紅墨水，用毛筆在培養(yǎng)皿中選擇薄而透明切片沾到染色液上 用解剖針輕輕撥入染色液中，大約30 s后，吸去染色液，加1滴清水 封片。為了防止氣泡的產(chǎn)生，用左手拇指與食指拿住蓋玻片的兩側(cè) 使蓋玻片的基部與滴液先接觸，右手握解剖針挑著蓋玻片從左向右 徐徐放下蓋玻片，使氣體從一側(cè)排出，如果有多余的水溢出，可用吸 水紙吸干,再進(jìn)行下一步的鏡下觀察。4鏡檢 鏡