脫氫抗壞血酸(Dehydroascorbate,DHA)含量測定試劑盒使用說明_第1頁
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文檔簡介

1、SolarbioLIFE SCIENCES脫氫抗壞血酸（Dehydroascorbate, DHA含量測定試劑盒使用說明規(guī)格：50T/48S產品簡介:DHA是 AsA的可逆AsA作為植物細胞一個重要生理指標，其AsA的含量、氧化還原狀態(tài)（AsA/DHA 比率） 及其合成與代謝相關酶類活性的變化涉及植物對一系列環(huán)境脅迫的響應。的氧化型，在生物體內，與抗壞血酸共同組成氧化還原系統(tǒng)，具有電子受體的作用。DTT能將DHA還原成AsA通過測定體系中 AsA的生成速率，即可計算出DHA含量。試驗中所需的儀器和試劑：低溫離心機、紫外分光光度計、1ml石英比色皿、可調式移液器、研缽、冰、雙蒸水產品內容:試劑一

2、：液體50ml XI瓶，室溫保存；試劑二：液體40ml XI瓶，室溫保存；試劑三：粉劑XI瓶，4C保存。臨用前加入10ml蒸餾水充分溶解。標準品： 粉劑XI瓶，4C保存。臨用前加入 5.743ml蒸餾水充分溶解；吸取 0.1ml上述溶液，加入 0.9ml蒸餾水，混勻，即 100卩mol/L DHA操作步驟：一、樣品中DHA提取：按照組織質量（g）:提取液體積（ml）為 1:5-10的比例（建議稱取約 0.1g組織，加 入1ml試劑一），進行冰浴勻漿；16000g, 4C離心 20min,取上清置冰上待測。二、DHA測定操作：分光光度計預熱30min,調節(jié)波長到265nm蒸餾水調零。試劑二在25

3、C水浴鍋中預熱 30min以上。SolarbioLIFE SCIENCES標準管：在1ml石英比色皿中依次加入1001標準液、800 1預熱的試劑二和 100卩l(xiāng)試劑三，迅速混勻后于265nm比色，記錄10s和130s的吸光值 A1和A2,計算AA空白管=A2-A1。測定管：在1ml石英比色皿中依次加入1001上清液、8001預熱的試劑二和 100卩l(xiāng)試劑三，迅速混勻后于265nm比色，記錄10s和130s的吸光值A3和A4,計算AA測定管=A4-A3。DHA含量計算：（1）按樣本蛋白濃度計算：DHA mol /mg prot） = （C標準液xA 測定管-A 標準管XV標準）+（CprXV樣）=0.1 xA測定管-A 標準管十Cpr（2）按樣本質量計算：DHA mol /g） = （C標準液XA測定管-A標準管XV標準）-（WXV樣-V樣總）=0.1 XA測定管-A標準管-WC標準液：100 mol/L ; V 標準）：標準液體積，0.1ml ; V樣總：上

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