氣相色譜_質(zhì)譜_GC_MS_聯(lián)用技術(shù)對(duì)麝香的多成分含量分析

1、分析氣相色譜/質(zhì)譜(G C/MS 聯(lián)用技術(shù)對(duì)麝香的多成分含量分析張皓冰1, 何昱2, 賈國(guó)惠2, 洪筱坤2, 王智華2, 葉愈青3(1. 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心寄生蟲預(yù)防控制所, 上海200025;2. 上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院, 上海200032;3. 雷允上藥業(yè)有限公司, 上海200002關(guān)鍵詞:氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù); 麝香摘要:目的:旨在探索氣相色譜/GC/, 法。結(jié)果:采用GC/MS , 量, 。:/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)是象麝香那樣復(fù), 。中圖分類號(hào):A文章編號(hào):100121528(2002 1120868204Q uantitative analysis for multi 2Componen

2、ts of musk by gas chromatography/mass spectrometryZHAN G Hao 2bing , HE Yu , JA Guo 2hui , HON G Xiao 2kun , WAN G Zhi 2hua , YE Yu 2qing(1Instit ute f or Parasitic Diease Cont ral and Prevention , CC DC , S hanghai 200025, Chi na ; 2S hanghai U niversity of TCM , S hanghai 200032, Chi na ; 3Lei Y u

3、n S hang Pharmaceutical Co. , L t d. S hanghai 200002, Chi na K ey w ords :G as chromatography/mass spectrometry (GC/MS ; musk ; quantitative analysisAbstract :Objective :This study was designed to investigate the application of gas chromatography/mass spec 2trometry for analyzing the quality of mus

4、k. Methods :Standard curves with internal standard and G as chromato 2graphy/mass spectrometry (GC/MS were utilized. R esults :Muscone , androsterone and cholesterol in both natural and man 2made musk were analyzed quantitatively simultaneously by GC/MS , which was highly selective to the components

5、 to be determined by selecting the characteristic fragments. The study of analytical methodolo 2gy proved that the method above was practical and accurate. Conclusion :G as chromatography/mass spectrome 2try is a powerful arm to analyze the complex system such a musk , which has a promising perspect

6、ive in quality control of traditional Chinese medicinal materials.收稿日期:2002207216麝香眾多組分為低級(jí)性, 小分子量、具揮發(fā)性的物質(zhì), 含量測(cè)定多采用氣相色譜法, 用量少, 方法靈敏。氣相色譜定量一般為標(biāo)準(zhǔn)曲線法1和內(nèi)標(biāo)法。特別是內(nèi)標(biāo)法, 應(yīng)用尤其廣泛, 較多用正十四烷、正十七烷2、正十八烷3、正十九烷4、萘5等為內(nèi)標(biāo)。本研究采用GC/MS 聯(lián)用法, 以睪丸酮為內(nèi)標(biāo), 實(shí)現(xiàn)了對(duì)多個(gè)天然麝香樣品中多種成分的定性定量分析。1實(shí)驗(yàn)部分1. 1藥品與儀器1. 1. 1樣品與試劑天然麝香:1號(hào)5號(hào)樣品(原麝麝香 ; 6號(hào)、7號(hào)

7、樣品(麝香仁 ;1號(hào)7號(hào)樣品由雷允上中藥研究所提供;8號(hào)樣品:由四川藥品檢驗(yàn)所提供; 9號(hào)樣品:購(gòu)至青海;10號(hào)樣品:購(gòu)自醫(yī)藥公司;人工麝香:由四川藥品檢驗(yàn)所提供。麝香酮對(duì)照品:中國(guó)藥品生物制品檢定所; 雄甾酮對(duì)照品:E. Merck 公司; 膽甾醇:E. Merck 公司。1. 1. 2儀器8682002年11月第24卷第11期中成藥Chinese Traditional Patent Medicine Nov. , 2002Vol. 24No. 11氣相色譜2質(zhì)譜聯(lián)用儀:AgilentGC6890/AgilentMSD5973; 色譜柱:HP 21MS (19091S 2933 , 30m

8、 ×0. 25mm ×0. 25m ; G2613A 自動(dòng)進(jìn)樣器。1. 2樣品供試液制備分別精密稱取各天然麝香, 人工麝香及麝香偽品100mg , 以乙醇超聲提取3次(15min ×3 , 定容至5mL , 取上清液為供試液。1. 3實(shí)驗(yàn)條件1. 3. 1氣相色譜儀進(jìn)樣口溫度:250°C ; 載氣; 氦氣; mL min -1; ; :1升溫速度(°C/(°C 維持時(shí)間(min 2806總分析時(shí)間為44min 。1. 3. 2質(zhì)譜儀接口溫度:280 °C ; 質(zhì)譜室溫度:230°C ; 四極桿分析器溫度:150&#

9、176;C 。1. 4標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制精密稱取麝香酮對(duì)照品20. 00mg , 雄甾酮3. 20mg 9. 10mg , 置于, 以無水乙。, , 其出峰時(shí)間在雄酮及膽固醇之間, 故選擇睪丸酮為內(nèi)標(biāo)物。圖1為加入內(nèi)標(biāo)物的9號(hào)樣品總離子流圖(total ionic chromatogram , TIC 。圖1加入內(nèi)標(biāo)物睪丸酮(t R 34. 71min 的天麝香樣品T LC 圖精密稱取20. 00mg 睪丸酮, 置于5mL 量瓶中,以無水乙醇定容至刻度。2方法學(xué)研究2. 1用于定量的質(zhì)譜碎片的選擇用于定量的質(zhì)譜碎片應(yīng)該滿足:a.為特征碎片; b. 為穩(wěn)定碎片;c. 有較高含量, 即豐度較大。各組分

10、及內(nèi)標(biāo)物用于定量的質(zhì)譜碎片見表1。表1用于定量的碎片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)品睪丸酮(內(nèi)標(biāo) 麝香酮雄甾酮膽固醇保留時(shí)間34. 74010. 41731. 47041. 304分子離子峰288. 20238. 30290. 30386. 40碎片峰246. 30223. 20275. 20268. 40203. 30209. 20257. 20301. 20124. 10125. 20246. 20275. 202. 2峰純度的考察以9號(hào)樣品為例, 分別考察麝香酮、雄甾酮及膽固醇用于定量的各碎片質(zhì)量色譜圖(mass chro 2 matogram , MC 。圖2圖4為所測(cè)3個(gè)組分的各碎片質(zhì)量色譜圖。觀察各質(zhì)量

11、碎片峰是否與其他峰重疊, 以此來判斷峰純度。以上3個(gè)組分的各質(zhì)量色譜圖表明, 各峰用于定量的質(zhì)量碎片峰與其它峰均無重疊, 雖然由于雄性激素化合物結(jié)構(gòu)上的相似性, 其它雄激素也有與雄酮相同的離子碎片, 但由于保留時(shí)間不同, 相互不重疊, 不影響定量的準(zhǔn)確性。2. 3線性關(guān)系的考察精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋, 配制成如表所示濃度范圍內(nèi)的5個(gè)濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分析結(jié)果以各9682002年11月第24卷第11期中成藥Chinese Traditional Patent Medicine Nov. , 2002Vol. 24No. 11 圖3雄甾酮(t R 31. 47min 峰純度考察圖4膽固醇峰純度考察

12、標(biāo)品量/睪丸酮量的X 軸, 各標(biāo)品峰面積/睪丸酮面積為Y 軸作標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見表2。表2樣品線性關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)品線性范圍線性方程確定系數(shù)(r2麝香酮12. 51500. 00(g/ml Y =0. 643X +0. 02080. 999雄甾酮20. 00240. 00(g/ml Y =1. 77X -0. 05980. 996膽固醇56. 9682. 5(g/ml Y =1. 16X +0. 01811. 0002. 4回收率試驗(yàn)精密稱取9號(hào)麝香樣品50. 00mg4份, 其中一分加入0. 5mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液(A , 與另一份(B 同時(shí) 按1. 2提取, 定容至5mL , 分別加入500L 內(nèi)標(biāo)溶液,

13、 進(jìn)樣1L , 測(cè)定結(jié)果見表3。2. 5精密度試驗(yàn)取level3標(biāo)準(zhǔn)溶液, 連續(xù)進(jìn)樣5次, 進(jìn)樣量1L 。選擇R TE 積分方式, 以組分峰面積計(jì)算天內(nèi)精密度。每天3次進(jìn)樣, 連續(xù)進(jìn)樣3天, 以同樣方法計(jì)算天間精密度。3各樣品測(cè)定結(jié)果以上述方法測(cè)定1號(hào)10號(hào)天然麝香及人工麝香樣品中3種組分的含量。結(jié)果見表5。4討論4. 1本研究在原麝麝香中未檢出麝香酮。4. 2本實(shí)驗(yàn)一次進(jìn)樣, 可同時(shí)測(cè)定天然麝香樣品中3種組分的含量, 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該法方便, 快速。在782002年11月第24卷第11期中成藥Chinese Traditional Patent Medicine Nov. , 2002Vol.

14、 24No. 11表3回收率試驗(yàn)(n =5組分基礎(chǔ)值(g/ml 標(biāo)準(zhǔn)添加值實(shí)驗(yàn)值平均值RSD %回收率(% 麝香酮350. 64400. 00754. 10757. 24768. 52733. 72766. 25755. 971. 83100. 71雄甾酮34. 9464. 0098. 72102. 3399. 8895. 94103. 79100. 133. 07101. 20膽固醇157. 22182. 0328. 15327. 94333. 17335. 50333. 67331. 691. 0497. 78表4天然麝香精密度試驗(yàn)(n =5組分麝香酮雄甾酮膽固醇天內(nèi)RSD %0. 01%

15、2. 32%2. 60%天間RSD %1. 34%2. 55%2. 73%, 好, 說明該法的準(zhǔn)確度較高。4. 3, 、色譜分, 能表5110(%樣品345678910人工麝香麝香酮N. D. N. D. N. D. Below cal. 2. 892. 143. 552. 473. 20雄甾酮0. 1220. 1520. 1460. 21033(0. 080 0. 1090. 2030. 3500. 1920. 794膽固醇0. 5630. 7430. 5890. 6050. 6070. 6700. 2951. 271. 541. 040. 0943N. D. 未檢出, 33該峰質(zhì)譜數(shù)據(jù)表明

16、為52雄甾2172羥基232酮。4. 4對(duì)6號(hào)樣品, 保留時(shí)間在31. 529min 的峰, 由于其保留時(shí)間與雄甾酮的保留時(shí)間相近, 故進(jìn)行含量測(cè)定時(shí), 儀器不加識(shí)別, 將其歸為雄甾酮。但從質(zhì)譜分析中可知,6號(hào)樣品不含雄酮, 該組分為52雄甾2172羥基232酮。4. 5本研究對(duì)人工麝香中麝香酮、雄甾酮及膽固醇的含量也進(jìn)行了測(cè)定, 人工麝香中, 僅含兩種雄性激素。雄甾酮含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于天然麝香, 而膽固醇含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于天然麝香。研究表明, 雄甾酮并非天然麝香中主要的性激素。4. 6本研究中, 首次將睪丸酮作為內(nèi)標(biāo)物, 無論對(duì)麝香酮或甾體成分的定量, 方法學(xué)研究均表明, 結(jié)果有很好的可靠性。參考文獻(xiàn):

17、1李兆琳, 陳耀祖, 金文, 等. 直接蒸發(fā)氣相色譜法微量分析中成藥揮發(fā)性組分2中成藥中冰片和麝香酮含量測(cè)定J.藥物分析雜志,1988,8(1 :629.2馬熙中, 于小兵, 陳建軍, 等. 應(yīng)用分析型超臨界流體萃取測(cè)定蘇合香丸中主要成分J.藥學(xué)學(xué)報(bào),1993,28(7 :5372542.3孫政, 湯新蘭, 黃學(xué)中, 等. 片仔癀制劑研究組方中麝香酮含量測(cè)定J.中成藥,1990,12(11 :425.4張正環(huán), 樂佩芳. 天然麝香中麝香酮的氣相色譜法測(cè)定J.藥學(xué)學(xué)報(bào),1982,17(12 :9222927.5陳萬寧, 黃桂如, 孫國(guó)安, 等. 小兒回春丸中冰片和麝香酮的含量測(cè)定J.中成藥研究,

18、1988, (6 :12.本刊刊登產(chǎn)品廣告辦法本刊廣告以刊登全國(guó)各地生產(chǎn)的藥品、保健食品、藥酒類、化妝品以及中西藥機(jī)械產(chǎn)品的廣告為主。1. 刊登廣告的要求:在中成藥雜志上刊登產(chǎn)品廣告, 應(yīng)以中華人民共和國(guó)廣告法及廣告管理?xiàng)l例為準(zhǔn)則, 刊戶必須出具:營(yíng)業(yè)執(zhí)照以及其他生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)資格的證明文件; 產(chǎn)品批準(zhǔn)文號(hào);有關(guān)行政主管部門(廣告審查機(jī)關(guān) 對(duì)廣告內(nèi)容進(jìn)行審查的合格證明, 也即藥品宣傳準(zhǔn)字號(hào)。2. 版面費(fèi)用:見表。版次規(guī)格(收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)黑白彩色封面18×154000元/次封二29×214000元/次封三29×213500元/次封底29×214500元/次內(nèi)頁(yè)24×17900元/次3000元/次3. 廣告服務(wù)收費(fèi)辦法說明:封二、封三、封底用200克銅版紙, 內(nèi)頁(yè)黑白為80克書寫紙, 內(nèi)頁(yè)彩色為200克銅版紙;內(nèi)頁(yè)中不滿一頁(yè)的黑白廣告, 按所占版面整頁(yè)900元/次比例折算