淀粉含量與糊化度測(cè)定

1、本文格式為word版，下載可任意編輯淀粉含量與糊化度測(cè)定 淀粉糊化度的測(cè)定 一、儀器： 分析天平，恒溫水浴鍋，分光光度計(jì)。 二、試劑： 1、緩沖液：用移液管吸取 3.1ml 的冰醋酸，并稱取 4.1g 的無水乙酸鈉。將二者用水溶解 稀釋，定容至 1000ml。必要時(shí)可加入乙酸或乙酸鈉調(diào)整 ph 值至 4.50.05。 2、酶試劑：cas：9032-08-0，最終保證溶液中含粗制酶約 180unit/ml。 3、蛋白沉淀劑： a；10%的 znso 4 溶液（w/v）：稱取 10g znso 4 7h 2 o 溶解于少量蒸餾水中。并定容至,100ml。 b：0.5mol/l 的 naoh 溶液：

2、稱取 2g 的 naoh（ar），并溶解于少量蒸餾水中，最終定 容至 100ml。 c：銅試劑：稱取 40g 無水 na 2 co 3 ，溶解于 400ml 水中，加入 7.5g 酒石酸。待溶解后加入 4.5g 的 cuso 4 .5h 2 o，溶解后混合勻稱，最終定容至 1000ml。然后用棕色瓶保存。 4、磷鉬酸試劑：首先配制 400ml10%的 naoh，再將 400mlnaoh 溶液與 100ml 蒸餾水混 合，并向其中加入 70g 鉬酸（ar，cas：7782-91-4）和 10g 鎢酸鈉（ar，cas：13472-45-2）； 溶解后加熱煮沸 2040min。這是為了趕走其中的 n

3、h3，之后冷卻至室溫。加蒸餾水大 約 700ml，再向其中加入 250ml 濃的正磷酸（85%的磷酸），最終定容至 1000ml。然后 用棕色瓶保存。 三、試驗(yàn)步驟： 1、樣品的預(yù)處理： 先將風(fēng)干樣品細(xì)磨碎并全部過 20 目篩網(wǎng)，依據(jù)樣品含淀粉程度不同定量取樣品（純 淀粉 100mg、含量 60%以上 150mg、含量 30-60%200mg、含量 15-30%300mg、含量 15% 以下 400mg）共稱取樣品兩份，分別置于 25ml 刻度試管中。 向其中一支試管中加入 15ml 緩沖液（確保樣品全部溶解且樣品不粘在液面試管壁上， 建議先吸 5ml，振搖溶解后，再將 10ml 沿管壁注入，

4、沖洗粘在管壁上的樣品），留意此時(shí)的液面位置（用筆在試管外做記錄）?；靹蚝笾糜诜兴≈屑訜?1h（為防止樣品粘糊在液 面上的管壁，建議開頭半個(gè)小時(shí)，管外沸水浴液面高度為試管液面的一半），其間搖動(dòng) 2-3 次（搖動(dòng)過程用一手固定試管的上段，一手在試管下半段用高頻敲振的方式，使沉淀在底 部的樣品旋震上浮，防止樣品粘到液面上管壁），經(jīng)過此步處理就得到了全糊化淀粉。用 自來水冷卻試管，滴加適量的蒸餾水使液面恢復(fù)到加熱前的位置，此時(shí)再向另一支試管中 加入 15ml 緩沖液。之后兩支試管就可以同時(shí)進(jìn)行以下步驟。 分別向兩支試管中加入 1ml 酶溶液。再另取一支空白試管加入 15ml 緩沖液和 1ml 酶 溶

5、液，作為空白管。將幾支試管在 40水浴中保溫 1h，起初搖動(dòng) 1 次，以后每 15min 搖 動(dòng) 1 次。或是在水浴搖床上保溫。 保溫結(jié)束后，加入 2ml10%znso 4 7h 2 o，混勻后再加入 1ml 0.5mol/lnaoh。加水稀 釋到 25ml，混勻之后過濾，用微量加樣器精確吸取 0.3ml 濾液置于 25ml 刻度試管中，并 加入 2ml 銅試劑，混勻。將試管置于沸水浴中加熱 6min ，保持沸騰，加入 2ml 磷鉬酸 試劑，之后連續(xù)加熱 2min（從加入沸水浴開頭嚴(yán)格根據(jù)時(shí)間加入試劑和移出冷卻，用秒 表計(jì)時(shí)）。用自來水將試管冷卻，加蒸餾水至 25ml，蓋上瓶蓋混勻。用分光光度

6、計(jì)在 420nm 下讀取汲取值，并記錄。 四、計(jì)算公式 淀粉含量的測(cè)定 一、儀器： 分析天平，恒溫水浴鍋，分光光度計(jì)。 二、試劑： 1、緩沖液：用移液管吸取 3.1ml 的冰醋酸，并稱取 4.1g 的無水乙酸鈉。將二者用水溶解 稀釋，定容至 1000ml。必要時(shí)可加入乙酸或乙酸鈉調(diào)整 ph 值至 4.50.05。 2、酶試劑：cas：9032-08-0，最終保證溶液中含粗制酶約 180unit/ml。 3、蛋白沉淀劑： a：10%的 znso 4 溶液（w/v）：稱取 10g znso 4 7h 2 o 溶解于少量蒸餾水中。并定容至 100ml。 b：naoh 溶液：稱取 2g 的 naoh（

7、ar），并溶解于少量蒸餾水中，最終定容至 100ml。 c：銅試劑：稱取 40g 無水 na 2 co 3 ，溶解于 400ml 水中，加入 7.5g 酒石酸。待溶解后加入 4.5g 的 cuso 4 .5h 2 o，溶解后混合勻稱，最終定容至 1000ml。 4、磷鉬酸試劑：首先配制 400ml10%的 naoh，再將 400mlnaoh 溶液與 100ml 蒸餾水混 合，并向其中加入 70g 鉬酸（ar，cas：7782-91-4）和 10g 鎢酸鈉（ar，cas：13472-45-2）； 溶解后加熱煮沸 2040min。這是為了趕走其中的 nh 3 ，之后冷卻至室溫。加蒸餾水大 約 70

8、0ml，再向其中加入 250ml 濃的正磷酸（85%的磷酸），最終定容至 1000ml。然后 用棕色瓶保存。 三、建立葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線 試驗(yàn)當(dāng)天溶解 100mg 純葡萄糖于 70ml 蒸餾水中（葡萄糖最低選用 ar 級(jí)，濕基配制， 同時(shí)測(cè)定水分計(jì)算干基），稀釋至 100ml，即是葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（約 1mg/ml，扣除葡萄糖水 分可得到精確濃度）。吸取 0.0ml、0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖 溶液（1mg/ml）分別置于各有 2ml 銅試劑的試管中，混勻。 將試管中置于沸水浴中加熱 6min，保持沸騰。加入 2ml 磷鉬酸試劑，之后連續(xù)加熱 2

9、min，用自來水將試管冷卻（從加入沸水浴開頭嚴(yán)格根據(jù)時(shí)間加入試劑和移出冷卻，用秒 表計(jì)時(shí)），加蒸餾水定容至 25ml，蓋上瓶蓋混勻。用分光光度計(jì)在 420mn 測(cè)量其汲取值， 并記錄。 四、試驗(yàn)步驟： 先將風(fēng)干樣品細(xì)磨碎并全部過 20 目篩網(wǎng)，依據(jù)樣品含淀粉程度不同定量取樣品（確 保最終吸光值在 0.5 左右，例如淀粉含量 50%的樣品，建議稱量 80-100mg），置于 25ml 刻度試管中。 向試管中加入 15ml 緩沖液（確保樣品全部溶解且樣品不粘在液面試管壁上，建議先 吸 5ml，振搖溶解后，再將 10ml 沿管壁注入，沖洗粘在管壁上的樣品），留意此時(shí)的液面 位置（用筆在試管外做記錄）

10、?；靹蚝笾糜诜兴≈屑訜?1h（為防止樣品粘糊在液面上的 管壁，建議開頭半個(gè)小時(shí)，管外沸水浴液面高度為試管液面的一半），其間搖動(dòng) 2-3 次（搖 動(dòng)過程用一手固定試管的上段，一手在試管下半段用高頻敲振的方式，使沉淀在底部的 樣品旋震上浮，防止樣品粘到液面上管壁），經(jīng)過此步處理就得到了全糊化淀粉。用自來 水冷卻試管，滴加適量的蒸餾水使液面恢復(fù)到加熱前的位置。 向試管中加入 1ml 酶溶液。再另取一支空白試管加入 15ml 緩沖液和 1ml 酶溶液，作 為空白管。將試管在 40水浴中保溫 1h，起初搖動(dòng) 1 次，以后每 15min 搖動(dòng) 1 次?；蚴?在水浴搖床上保溫。 保溫結(jié)束后，加入 2ml10%znso 4 7h 2 o，混勻后再加入 1ml 0.5mol/lnaoh。加水稀 釋到 25ml，混勻之后過濾，用微量加樣器精確吸取 0.3ml 濾液置于 25ml 刻度試管中，