牛尿中玉米赤霉醇、己烯雌酚、己烷雌酚、雙烯雌酚殘留量分析條件的選擇

1、牛尿中玉米赤霉醇、己烯雌酚、己烷雌酚、雙烯雌酚殘留量分析條件的選擇 (1) 試樣制備 牛尿為液體樣品，可挺直取10ml牛尿于50ml離心管中，3000r/min離心15min后，將尿液中少量懸浮物沉淀，取3ml上清液，加入含有玉米赤霉醇-4氘代和己烯雌酚-8氘代內(nèi)標物的試管中，渦旋30s溶解混勻，即可。 (2)免疫親和柱凈化 本辦法對照試驗了euroclone公司和randox公司兩種免疫親和柱。euroclone公司的免疫親和柱對玉米赤霉醇和二苯乙烯類激素同時吸附，操作較為容易，但因為該柱的柱容量較小(10ng，10ng，5ng，雙烯雌酚5ng)，用于多組分分析回收率的重臨性較差。rando

2、x公司的免疫親和柱分為玉米赤霉醇凈化柱和類激素凈化柱兩種，該柱操作較前者略復雜，但柱容量較大(玉米赤霉醇100ng，己烯雌酚50ng，己烷雌酚50ng，雙烯雌酚50ng)，檢測敏捷度高，回收率重臨性較好。因此，終于本試驗挑選了randox公司的免疫親和柱。柱平衡、淋洗和被測物的洗脫，所用溶液以及流速控制，均根據(jù)randox公司試劑盒中提供的用法操作解釋書執(zhí)行。 (3)質(zhì)譜條件的優(yōu)化 采納注射泵挺直進樣方式，以5l/min將玉米赤霉醇、己烯雌酚、己烷雌酚和雙烯雌酚的標準溶液分離注入串聯(lián)質(zhì)譜的離子源中。一級質(zhì)譜分析(q1，母離子掃描)比較了電噴霧電離(esi)的正方式和負方式，4種被測物均在負方式

3、條件下得到了較高的響應值，確定了準分子離子峰(m-1)，優(yōu)化了去簇電壓(dp)。對被測物的準分子離子碰撞后，舉行二級質(zhì)譜分析(ms2，子離子掃描)，得到子離子質(zhì)譜圖，見圖9-3。對每種被測物選定的子離子舉行碰撞氣能量(ce)的優(yōu)化。在銜接了液相色譜儀后，嘗試采納大氣壓化學電離(apci)負方式舉行測定，發(fā)覺apci(-)電離方式檢測敏捷度更高些。通過對apci(-)條件下離子源溫度、霧化氣壓力、氣簾氣壓力、輔助氣1壓力、噴霧器電流等參數(shù)優(yōu)化，以優(yōu)化后本辦法提供的參數(shù)對被測物舉行檢測，玉米赤霉醇和己烷雌酚的辦法最低檢出限可達0.25g/kg，和的辦法檢出限為0.5g/kg，可滿足日常檢測和殘留監(jiān)

4、控的玉米赤霉醇為0.5g/kg，二苯乙烯類激素殘留為1g/kg要求。 (4)hplc條件的優(yōu)化 玉米赤霉醇和二苯乙烯類激素多采納c18柱舉行分別，也實用c8柱的報道，但采納lc-ms-ms分析時，更多關注的是柱效和檢出限，而對分別度不作為重點。先后試用了waters公司、agilent公司、merck公司等多個品牌的c18和c8柱，經(jīng)比較agilent公司的zorbaxsb c8 (150mm×4.6mm，3.5um)對玉米赤霉醇和二苯乙烯類激素的分析效果更好一些。 采納apci電離時，乙腈為首選流淌相，流速1ml/min。在此前提下實驗了不同流淌相比例和梯度程序。因為流速較高，乙腈

5、比例不宜低，終于選定乙腈-水=70+30。對照了不同梯度洗脫程序的分別結(jié)果，沒有顯然充實，因而選定了固定比例流淌相。 9.2.2.8 線性范圍和檢測低限 配制玉米赤霉醇、己烷雌酚的濃度分離為1.25ng/ml、2.5ng/ml、12.5ng/ml、25ng/ml，己烯雌酚、雙烯雌酚的濃度分離為2.5ng/ml、5.0ng/ml、25ng/ml、50ng/ml的混合標準溶液，以本辦法的測試條件，進樣50l舉行測定，用經(jīng)過內(nèi)標校正的峰面積對標準溶液中各被測組分的濃度作圖，其各目標物在檢測范圍內(nèi)均呈線性關系，線性方程和相關系數(shù)見表9-9。因為被測物均為禁用獸藥，因此，試驗以最低檢測限(mrl)的1/

6、2為最低檢測，10倍的mrl為上限舉行檢測。從表9-9數(shù)據(jù)可知，在此范圍被測物含量與質(zhì)量色譜峰面積呈線性關系。 9.2.2.9 辦法回收率和精密度 用不含玉米赤霉醇和己烯雌酚、雙烯雌酚、己烷雌酚的牛尿樣品做添加回收和精密度實驗，樣品添加不同濃度標準后，按本辦法舉行樣品制備、凈化和測定，分析結(jié)果見表9-13。由表9-13結(jié)果看到，在相當辦法檢出限0.25/0.50g/kg，回收率為62.9%117.6%，相對標準偏差為13.67%21.63%；在辦法限量0.5/1.0g/kg，回收率為65.5%119%，相對標準偏差為13.42%24.19%。 表9-13 4種激素添加回收率試驗數(shù)據(jù)(n=10) 9.2.2.10 重復性和再現(xiàn)性 在重復性實驗條件下，獲得的兩次自立測試結(jié)果的肯定差值不超過重復性限(r)，假如差值超過重復性限(r)，應舍棄實驗結(jié)果并重新完成兩次單個實