六味地黃丸協(xié)同雷尼替丁對(duì)大鼠乙酸胃潰瘍的治療作用研究

1、六味地黃丸協(xié)同雷尼替丁對(duì)大鼠乙酸胃潰瘍的治療作用研究 【摘要】 目的探討六味地黃丸對(duì)乙酸胃潰瘍的輔助 治療 作用及機(jī)制。方法制備乙酸誘發(fā)大鼠胃潰瘍模型，大鼠隨機(jī)分為5組(正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、六味地黃丸組、雷尼替丁組、六味地黃丸加雷尼替丁組)，運(yùn)用單向免疫擴(kuò)散法檢測(cè)血清IgA、IgG、IgM含量，ELISA法檢測(cè)血清白細(xì)胞介素-2(IL-2)的變化，并通過(guò)形態(tài)學(xué)方法 計(jì)算 潰瘍指數(shù)和抑制率。 結(jié)果在細(xì)胞免疫方面：模型對(duì)照組IL-2含量顯著低于正常對(duì)照組，藥物治療的3組IL-2含量顯著升高，IL-2的水平，六味地黃丸加雷尼替丁組高于六味地黃丸組高于雷尼替丁組。在體液免疫方面：模型對(duì)照組、正常對(duì)

2、照組和雷尼替丁組，血清免疫球蛋白IgA，IgG，IgM含量無(wú)顯著差異，六味地黃丸明顯提高IgA，IgM含量，且IgG升高更為顯著;在治療效果方面：藥物治療的3組，潰瘍指數(shù)明顯下降，且六味地黃丸加雷尼替丁組優(yōu)于雷尼替丁組優(yōu)于六味地黃丸組。結(jié)論制酸劑在對(duì)胃潰瘍的治療作用優(yōu)于六味地黃丸，但是六味地黃丸通過(guò)提高細(xì)胞免疫和體液免疫水平，對(duì)大鼠乙酸胃潰瘍具有治療作用，在聯(lián)合抗酸藥物治療胃潰瘍中，對(duì)于提高療效有一定的輔助作用。 【關(guān)鍵詞】 六味地黃丸; 胃潰瘍; 免疫球蛋白; 白細(xì)胞介素-2; 中西醫(yī)結(jié)合療法Abstract：ObjectiveTo explore the therapeutic effec

3、t and mechanism of Liuwdihuang pills.MethodsThe rats were randomly divided into 5 groups:A(normal control group), B(gastric ulcer group induced by acetic acid), C(ranitidine group), D(Liuwdihuang pills group)and E(ranitidine cooperating with Liuweidihuang pills group). Determine the expression of im

4、munoglobulin by SDS-PAGE technique, change of IL-2 by ELISA, and examine the index of ulcer. ResultsIn cellular immunity aspect：the level of IL-2 in serum of B group was significantly less than A group, IL-2 was increased by pharmacological treatment, group E was more remarkable than C and D groups.

5、 In human immunity aspect：compared with A group, groups B and C had no statistic difference in the expression of immunoglobulin (IgA，IgG，IgM).By treatment of Liuweidihuang pills, IgA and IgM were significantly higher than above three groups, and IgG elevated more remarkably. In therapeutic result as

6、pect: index of ulcer was decreased significantly in Pharmacological treatment groups (C，D，E ), and therapeutic effect of E group was superior to C and D groups, and C group was superior to D group. ConclusionRanitidine is superior to Liuweidihuang pills in therapeutic effect of gastric ulcer, but Li

7、uweidihuang pills can cure gastric ulcer in rats by increased immunologic function, by cooperating with ranitidine, Liuweidihuang pills has certain auxiliary function to therapeutic effect of gastric ulcer.Key words：Liuweidihuang pills; Gastric ulcer; Immunoglobulin; IL-2; Chinese traditional medici

8、ne抑制胃酸分泌是最常用的促進(jìn)潰瘍愈合手段，盡管H2 受體拮抗劑及質(zhì)子泵抑制劑使治愈率明顯提高，但病情容易反復(fù)，難以痊愈。消化性潰瘍中醫(yī)辨證多有不同程度的脾氣虧損，導(dǎo)致患者機(jī)體免疫功能發(fā)生障礙，處于相對(duì)抑制狀態(tài)。大量研究表明，六味地黃丸具有補(bǔ)益脾胃的功效，對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)具有明顯的調(diào)節(jié)作用。因此，本實(shí)驗(yàn)據(jù)此采用在西藥抗酸藥治療方案的基礎(chǔ)上，辨證加服中藥六味地黃丸，觀察六味地黃丸對(duì)大鼠乙酸胃潰瘍模型的治療作用，探索其輔助抗酸藥物治療胃潰瘍的機(jī)理。 1 材料 SD大鼠30只，雌雄各半，體重(18020)g，由浙江大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供;六味地黃，河南省宛西制藥股份有限公司產(chǎn)品;雷尼替丁膠囊，杭州民生制

9、藥有限公司產(chǎn)品;免疫球蛋白試劑盒，四川邁克科技有限責(zé)任公司產(chǎn)品;IL-2 ELISA試劑盒為RD公司產(chǎn)品。 2 方法 2.1 動(dòng)物模型建立及分組取大鼠24只，參照Okabe乙酸誘導(dǎo)法，大鼠禁食16 h，3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，劍突下作腹正中切口，分離出胃，以內(nèi)徑4 mm的玻璃管按在胃前壁胃小彎角切跡下方約5 mm處的漿膜面上，向玻璃管內(nèi)注入100%乙酸0.1 ml，持續(xù)1 min，用生理鹽水棉簽擦拭2次，輕拉大網(wǎng)膜覆蓋在乙酸涂抹面，將胃還納入腹腔，縫合腹壁。造模3d后，隨機(jī)分為4組，每組6只：模型對(duì)照組(以生理鹽水等量灌服)、六味地黃丸組(20gkg-1灌服)、雷尼替丁組(30 mgkg

10、-1灌服)和六味地黃丸加雷尼替丁組(六味地黃丸20 gkg-1加雷尼替丁30 mgkg-1灌服)。另取6只未造模大鼠作為正常對(duì)照組，予等量生理鹽水，各組動(dòng)物均每d給藥，7 d后提取標(biāo)本。2.2 觀察指標(biāo)2.2.1 潰瘍指數(shù)和抑制率分別結(jié)扎賁門(mén)、幽門(mén)端后取胃，向胃內(nèi)注射中性甲醛溶液固定胃壁15 min，然后沿胃大彎剪開(kāi)，測(cè)定潰瘍指數(shù)和抑制率。以潰瘍面積作為潰瘍指數(shù)，潰瘍面積(S)=1/4潰瘍長(zhǎng)徑(DL)短徑(DS);抑制率(%)=(對(duì)照組損傷指數(shù)-給藥組損傷指數(shù))/對(duì)照組損傷指數(shù)100%。2.2.2 血清免疫球蛋白及IL-2含量的檢測(cè)大鼠眼眶采血2 ml，靜置30 min，3 000 r/min

11、離心30 min，取血清放入20冰箱保存待測(cè)。采用單向免疫擴(kuò)散法檢測(cè)血清IgA，IgG，IgM含量，ELISA法檢測(cè)血清IL-2的變化。2.3 學(xué)處理 SPSS統(tǒng)計(jì)分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)均以s表示，做差異的顯著性分析，P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 3 結(jié)果 3.1 六味地黃丸對(duì)各組大鼠潰瘍指數(shù)及潰瘍抑制率的影響 肉眼觀察，正常對(duì)照組大鼠胃粘膜光滑，未見(jiàn)充血、水腫及潰瘍?cè)?模型對(duì)照組，潰瘍?cè)钆c潰瘍邊緣有明顯分界，侵犯粘膜并穿越粘膜下層或深達(dá)肌層，潰瘍?cè)畋砻娓采w白苔，邊緣充血水腫，呈典型的胃潰瘍病理改變(1a)。六味地黃丸組(圖1b)、雷尼替丁組(圖1c)和六味地黃丸加雷尼替丁組(圖1d)比

12、模型對(duì)照組潰瘍指數(shù)均明顯降低(P0.01);六味地黃丸加雷尼替丁組的療效優(yōu)于六味地黃丸組或雷尼替丁組(P0.01);雷尼替丁組療效優(yōu)于六味地黃丸組(P0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。表1 各組大鼠潰瘍指數(shù)和潰瘍抑制率 3.2 六味地黃丸對(duì)各組大鼠血清免疫球蛋白及IL-2的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和雷尼替丁組間血清免疫球蛋白IgA，IgG，IgM差異無(wú)顯著意義(P0.05);六味地黃丸組、六味地黃丸加雷尼替丁組與上述3組相比較，IgA、IgM含量明顯升高(P0.05)，IgG升高更為顯著(P0.01);六味地黃丸組與六味地黃丸加雷尼替丁組比較無(wú)顯著差異(P0.05)。模型對(duì)照組IL-2含

13、量顯著低于正常對(duì)照組(P0.01);藥物 治療 的3組IL-2含量雖然低于正常對(duì)照組(P0.01或P0.05)，但是明顯高于模型對(duì)照組，其中以六味地黃丸組和六味地黃丸加雷尼替丁組升高更為顯著(P0.01);六味地黃丸組與六味地黃丸加雷尼替丁組比較有顯著差異(P0.05)。結(jié)果見(jiàn)表2。表2 各組大鼠血清免疫球蛋白及IL-2含量(s)與正常對(duì)照組比較，aP 0.01，bP 0.05;與模型對(duì)照組比較，cP 0.01，dP 0.05;與雷尼替丁組比較，eP 0.01，fP 0.05; 與六味地黃丸組比較，gP 0.01，hP 0.05;n=6 4 討論 制酸劑在上是治療胃潰瘍的常用藥物，但是在潰瘍病

14、的發(fā)生過(guò)程中，患者機(jī)體細(xì)胞免疫功能發(fā)生障礙，表現(xiàn)為免疫功能抑制、局部防御功能減弱，易引起胃酸、胃蛋白酶和幽門(mén)螺旋桿菌等的侵襲，發(fā)生潰瘍。消化性潰瘍中醫(yī)辨證多屬脾虛肝郁、氣滯血瘀，潰瘍患者均有不同程度的脾氣虧損，機(jī)體免疫功能紊亂，脾虛胃潰瘍的大鼠動(dòng)物模型發(fā)現(xiàn)胃粘膜局部免疫反應(yīng)功能低下。六味地黃丸具有“補(bǔ)腎為主，兼補(bǔ)肝脾，三補(bǔ)三泄，補(bǔ)泄結(jié)合”的功效，中醫(yī)的“腎”功能與下丘腦-垂體-腎上腺功能密切相關(guān)，與 的神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié) 理論極其相似。同時(shí)大量的研究表明，六味地黃丸對(duì)細(xì)胞免疫和體液免疫均具有促進(jìn)和調(diào)節(jié)作用5，6。因此以六味地黃丸輔助治療胃潰瘍符合中醫(yī)辨證用藥的思路。人體的免疫包括細(xì)胞免疫和

15、體液免疫，細(xì)胞免疫是以T細(xì)胞為介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，IL-2是調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能最主要的細(xì)胞因子之一，IL-2參與調(diào)節(jié)T細(xì)胞的兩個(gè)不同亞群TH1/TH2細(xì)胞間的平衡，促進(jìn)T細(xì)胞的活化和增殖，從而增強(qiáng)免疫功能。臨床研究表明胃潰瘍患者血清IL-2水平顯著低于正常人，提示患者T細(xì)胞增殖分化受到抑制，細(xì)胞免疫功能低下。本研究結(jié)果顯示，大鼠模型對(duì)照組IL-2含量顯著低于正常，與以上研究結(jié)果相一致。六味地黃丸及六味地黃丸輔助抗酸藥藥物治療后，IL-2含量明顯升高，雖其數(shù)值未能回復(fù)至正常水平，但仍然可以表明六味地黃丸具有改善機(jī)體免疫功能的作用。體液免疫抗體主要存在于血清中的丙種球蛋白，包括IgA，IgG，IgM等，

16、免疫球蛋白可以與免疫復(fù)合物或感染抗原作用形成不溶物質(zhì)，引起單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的消除作用;充當(dāng)活化補(bǔ)體成分的受體，防止補(bǔ)體介導(dǎo)性免疫損傷;增強(qiáng)機(jī)體抵抗力，提高耐藥菌的殺菌比例。臨床研究表明，胃潰瘍患者血清免疫球蛋白含量與正常人相比無(wú)明顯變化10，但是免疫球蛋白靜脈注射，對(duì)胃炎及胃十二指腸炎潰瘍患者具有療效。在本實(shí)驗(yàn)中，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和雷尼替丁組間血清免疫球蛋白IgA，IgG，IgM含量無(wú)顯著差異，六味地黃丸能夠明顯升高IgA，IgG，IgM含量，其中IgG的升高最為顯著，而雷尼替丁對(duì)血清免疫球蛋白IgA，IgG，IgM含量無(wú)明顯影響。因此，六味地黃丸通過(guò)提高IL-2、免疫球蛋白IgA，Ig

17、G，IgM含量，提高細(xì)胞免疫和體液免疫水平、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫平衡，這可能是其治療胃潰瘍機(jī)制的一個(gè)重要方面。綜上所述，制酸劑在大鼠乙酸胃潰瘍的治療中仍占主導(dǎo)地位，六味地黃丸通過(guò)提高細(xì)胞免疫和體液免疫水平，對(duì)大鼠乙酸胃潰瘍具有治療作用，在聯(lián)合抗酸藥藥物治療胃潰瘍中，對(duì)于提高療效有一定的輔助作用。本研究應(yīng)用中醫(yī)辨證施治傳統(tǒng)理論，通過(guò)中西醫(yī)結(jié)合的方法，探明六味地黃丸輔助抗酸藥藥物治療胃潰瘍的作用和機(jī)理，在促進(jìn)潰瘍愈合的治療中彌補(bǔ)了西藥的不足。但是六味地黃丸通過(guò)何種途徑提高血清中IL-2、免疫球蛋白IgA，IgG，IgM的水平，其在劑量、療程、優(yōu)化完善方劑及治療方案等方面還有待進(jìn)一步深入的研究。【 參考 文

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