潔凈室環(huán)境控制與檢測方法

1、潔凈室環(huán)境控制與檢測方法一、 目的對塵粒及微生物污染進行控制并監(jiān)測，使被控制的房間或區(qū)域達到生產(chǎn)所需的潔凈度要求。 二、 相關(guān)術(shù)語1. 潔凈室（區(qū)）指對塵粒及微生物污染規(guī)定需進行環(huán)境控制的房間或區(qū)域。其建筑結(jié)構(gòu)、裝備及其使用均具有減少對該區(qū)域內(nèi)污染源的介入、產(chǎn)生和滯留的功能。其他相關(guān)參數(shù)如：溫度、濕度、壓力也有必要控制。2. 潔凈室狀態(tài)（1）空態(tài)（as-built）潔凈室（區(qū)）在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)已安裝完畢且功能完備的情況下，但是沒有生產(chǎn)設(shè)備、原材料或人員的狀態(tài)。（2）靜態(tài) (at-rest）靜態(tài)a潔凈室（區(qū)）在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)已安裝完畢且功能完備的情況下，生產(chǎn)工藝設(shè)備已安裝、潔凈室（區(qū)）內(nèi)沒有

2、生產(chǎn)人員的狀態(tài)。靜態(tài)b潔凈室（區(qū)）在生產(chǎn)操作全部結(jié)束，生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過20 min自凈后。（3）動態(tài)（operational）潔凈室（區(qū)）已處于正常生產(chǎn)狀態(tài)，設(shè)備在指定的方式下進行，并且有指定的人員按照規(guī)范操作。3. 氣流形式 （1）單向流（unidirectional airflow）沿單一方向呈平行流線并且與氣流方向垂直的斷面上風速均勻的氣流。與水平面垂直的叫垂直單向流（vertical unidirectional airflow ) ，與水平面平行的叫水平單向流（horizontal unidirectional airflow ）。（2）非單向流（non-unidirect

3、ional airflow）具有多個通路循環(huán)特性或氣流方向不平行的氣流。4. 潔凈工作臺 （clean bench）一種工作臺或者與之類似的一個封閉圍擋工作區(qū)。其特點是自身能夠供給經(jīng)過過濾的空氣或氣體，按氣流形式分為垂直單向流工作臺、水平單向流工作臺等。5. 潔凈度 （cleanliness）潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中含大于或等于某一粒徑懸浮粒子的統(tǒng)計數(shù)量來區(qū)分的潔凈程度。6. 懸浮粒子（airborne particle）用于空氣潔凈度分級的空氣懸浮粒子尺寸范圍在0.1-1000 mm的固體和液體粒子。對于懸浮粒子計數(shù)測量儀，一個微粒球的面積或體積產(chǎn)生一個響應(yīng)值，不同的響應(yīng)值等價于不同的微粒直

4、徑。7. 菌落（colony forming units）微生物培養(yǎng)后，由一個或幾個微生物繁殖而形成的微生物集落，簡稱CFU。8. 浮游菌(airborne microbe)按照標準（GBT 16293-2010）提及的方法收集懸浮在空氣中的活微生物粒子，通過專門的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。9. 浮游菌濃度（airborne microbe concentration）單位體積空氣中含浮游菌菌落數(shù)的多少，以計數(shù)濃度表示，單位是CFU/m3或CFU/L。10. 沉降菌（settling microbe）用標準（ GBT 16294-2010 ）提及的方法收集空氣中的活微生物粒

5、子，通過專門的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。11. 沉降菌菌落數(shù)（settling microbe plate count）規(guī)定時間內(nèi)每個平板培養(yǎng)皿收集到空氣中沉降菌的數(shù)目，以CFU/皿表示。三、 潔凈室環(huán)境監(jiān)測指標溫度、濕度、風速、靜壓差（預(yù)測試指標）懸浮粒子、沉降菌、浮游菌。四、 預(yù)測試指標1. 溫度和相對濕度的測試潔凈室（區(qū)）的溫度和濕度應(yīng)與其生產(chǎn)及工藝要求相適應(yīng)（無特殊要求時，溫度在18-26，相對濕度在45-65%為宜）。2. 靜壓差的測試潔凈室與非潔凈室之間的靜壓差應(yīng)大于10 Pa；相鄰不同潔凈級別的潔凈室之間的壓差應(yīng)大于5 Pa；潔凈區(qū)與室外壓差應(yīng)大于12 Pa。

6、 3. 風量、風速的測試 （1）非單向流潔凈室系統(tǒng)的各項實測風量及換氣次數(shù)應(yīng)大于各自的設(shè)計風量或換氣次數(shù)，但不應(yīng)超過20%；室內(nèi)各風口的風量與各風口設(shè)計風量之差均不應(yīng)超過設(shè)計風量的±15%。 （2）單向流凈室實測室內(nèi)平均風速應(yīng)大于設(shè)計風速，但不應(yīng)超過15%。 五、 懸浮粒子測試方法在空態(tài)或靜態(tài)測試時，懸浮粒子采樣點數(shù)目及其布置應(yīng)力求均勻，并不得少于最少采樣點數(shù)目；在動態(tài)測試時，懸浮粒子采樣點數(shù)目及其布置應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的生產(chǎn)及工藝關(guān)鍵操作區(qū)設(shè)置。1. 儀器光散射粒子計數(shù)器（用于粒徑大于或等于0.5um的懸浮粒子計數(shù)）、激光粒子計數(shù)器（用于粒徑大于或等于0.1um的懸浮粒子計數(shù)）。2. 最少

7、采樣點數(shù)目的確定方法（1）最少采樣點數(shù)目公式 NL=A公式中：NL：最少采樣點數(shù) A：潔凈室或潔凈區(qū)的面積（單位為m2）。注：在水平單向?qū)恿鲿r，面積A可以看作是與氣流方向呈垂直流動的空氣的截面積。 （2）最少采樣點數(shù)目表-最少采樣點數(shù)面積 m2潔凈度級別10010 000100 000300 000<102322210 <20422220 <40822240 <10016422100 <200401033200 <400802066400 <10001604013131000 <2000400100323220008002006363注：對于10

8、0級的單向流潔凈室（區(qū)），包括100級潔凈工作臺，面積指的是送風口表面積；對于10 000級以上的非單向流潔凈室（區(qū)），面積指的是房間面積。3. 采樣點位置（1）采樣點一般在離地面0.8 m高度的水平面上均勻布置。（2）采樣點多于5點時，也可以在離地面0.8-1.5 m高度的區(qū)域內(nèi)分層布置，但每層不少于5點。采樣點位置示意圖 4. 采樣次數(shù)的限定對任何小潔凈室（區(qū)）或局部空氣凈化區(qū)域，采樣點數(shù)目不得少于2個，總采樣點次數(shù)不得少于5次。每個采樣點的采樣次數(shù)可以多于1次，且不同采樣點的采樣次數(shù)可以不同。5. 采樣量表-最小采樣量最小采樣量L/次潔凈度級別10010 000100 000300 00

9、0 0.5 mm5.662.832.832.83 5 mm8.58.58.58.56. 采樣注意事項（1）對于單向流潔凈室（區(qū)），粒子計數(shù)器的采樣管口應(yīng)正對氣流方向；對于非單向流潔凈室（區(qū)），粒子計數(shù)器的采樣管口宜向上。（2）布置采樣點時，應(yīng)盡量避開回風口。（3）采樣時，測試人員應(yīng)在采樣口的下風側(cè)，并盡量少活動。（4）采樣完畢后，宜對粒子計數(shù)器進行自凈。（5）應(yīng)采取一切措施防止采樣過程的污染。7. 測試狀態(tài)（1）空態(tài)、靜態(tài)和動態(tài)三種狀態(tài)均可進行測試。（2）空態(tài)或靜態(tài)時，室內(nèi)測試人員不得多于2人。8. 測試時間（1）在空態(tài)或靜態(tài)a測試時，對單向流潔凈室（區(qū)）而言，測試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行

10、時間不少于10 min后開始。對非單向流潔凈室，測試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于30 min后開始。在靜態(tài)b測試時，對單向流潔凈室（區(qū)），測試宜在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過10 min自凈后開始；對非單向流潔凈室（區(qū)），測試宜在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過20 min自凈后開始。（2）在動態(tài)測試時，則須記錄生產(chǎn)開始的時間以及測試時間。9. 采樣按照粒子計數(shù)器的操作規(guī)程，選擇合適的粒徑、采樣量、采樣時間及每個采樣點的采樣次數(shù)進行采樣。10. 結(jié)果計算（1）計算每個采樣點的平均懸浮粒子濃度（粒/m3）。（2）計算潔凈室的平均粒子濃度（粒/m3）。（3）計算標準差SE。（4）95%置信上限（

11、UCL）：UCL = M + t*SE。表-95%置信上限的t分布系數(shù)采樣點數(shù)23456789>9t6.312.922.352.132.021.941.901.86-注：當采樣點數(shù)多于9點時，不需要計算UCL。11. 結(jié)果評定判斷懸浮粒子的潔凈度級別應(yīng)同時滿足以下兩個條件：（1）每個采樣點的平均懸浮粒子濃度必須不大于規(guī)定的級別界限。（2）全部采樣點才懸浮粒子濃度平均值均值的95%置信上限必須不大于規(guī)定的級別界限。表-我國潔凈室（間）對懸浮粒子的技術(shù)要求（五個潔凈度等級）藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（1998年修訂）無菌醫(yī)療器具生產(chǎn)管理規(guī)范 YY 0033-2000潔凈度級別靜態(tài)測試最大允許數(shù)（個

12、/m3）潔凈度級別靜態(tài)測試最大允許數(shù)（個/m3）0.5 mm5mm0.5 mm5 mm1003 50001003 50001000-1000-10 000350 0002 00010 000350 0002 000100 0003 500 00020 000100 0003 500 00020 000300 00010 500 00060 000300 00010 500 00060 000表-ISO標準中潔凈室及潔凈區(qū)對懸浮粒子的技術(shù)要求ISO等級序（N）大于或等于表中被考慮的粒徑的最大濃度限值（pc/m3 空氣）0.1 mm0.2 mm0.3 mm0.5 mm1 mm5 mmISO Cla

13、ss 1102ISO Class 210024104ISO Class 31 000237102358ISO Class 410 0002 3701 02035283ISO Class 5100 00023 70010 2003 52083229ISO Class 61 000 000237 000102 00035 2008 320293ISO Class 7352 00083 2002 930ISO Class 83 520 000832 00029 300ISO Class 935 200 0008 320 000293 00012. 示例房間面積為80 m2 （8 m*10 m）l 最

14、少采樣點數(shù)目：9l 采樣點布置：代表采樣點位置，旁邊的數(shù)字代表采樣編號l 選擇0.5 mm粒徑的粒子l 采樣量為2.83 Ll 采樣時間設(shè)為1 minl 每個采樣點采樣次數(shù)為2次l 在粒子計數(shù)器上設(shè)置參數(shù)，開始采樣六、 浮游菌測試方法1. 儀器和試劑浮游菌采樣儀、培養(yǎng)皿、大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）、沙氏培養(yǎng)基（SDA）、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器。2. 最少采樣點數(shù)目參照懸浮粒子測試方法。3. 采樣點的位置參照懸浮粒子測試方法。4. 采樣次數(shù)每個采樣點一般采樣一次。5. 采樣量不同潔凈度級別的最小采樣量見表。表-最小采樣量潔凈度級別采樣量 L/次100100010 000500100 00

15、0100300 0001006. 采樣注意事項（1）對于單向流潔凈室（區(qū)）或送風口，采樣器采樣口朝向應(yīng)正對氣流方向；對于非單向流潔凈室（區(qū)），采樣口向上。（2）布置采樣點時，應(yīng)盡量避開塵粒較集中的回風口。（3）采樣時，測試人員應(yīng)在采樣口的下風側(cè)，并盡量少活動。（4）應(yīng)采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對樣本的污染。（5）培養(yǎng)皿在用于檢測時，為避免培養(yǎng)皿運輸或搬運過程造成的影響，宜同時進行陰性對照試驗，每次或每個區(qū)域取1個對照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿一起放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無菌落生長。7. 測試狀態(tài)（參照懸浮粒子測試方法）8. 測試時間（參照懸浮粒子測試

16、方法）9. 采樣及培養(yǎng)按照浮游菌采樣器的操作規(guī)程進行采樣。全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）配置的培養(yǎng)基經(jīng)采樣后，在30-35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于2 d；采用沙氏培養(yǎng)基（SDA）配置的培養(yǎng)基經(jīng)采樣后，在20-25培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于5 d。10. 結(jié)果觀察及計算用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)，并計算出每個測點的浮游菌平均濃度（CFU/m3或CFU/L ）。表-潔凈室（區(qū)）浮游菌技術(shù)要求潔凈度級別藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（1998修訂）CFU/m31005-10 000100100 000500七、 沉降菌測試方法1. 儀器和試劑培養(yǎng)皿、大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）、沙氏培養(yǎng)基（SDA）、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器。2. 最少采樣點數(shù)目（參照懸浮粒子測試方法）3. 采樣點的位置（參照懸浮粒子測試方法）4. 采樣次數(shù)（參照懸浮粒子測試方法）5. 最少培養(yǎng)皿數(shù)在滿足最少采樣點數(shù)目的同時，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)。表-最少培養(yǎng)皿數(shù)潔凈度級別最少培養(yǎng)皿數(shù)1001410 0002100 0002300 00026. 采樣注意事項（參照懸浮粒子測試方法）7. 測試狀態(tài)（參照懸浮粒子測試方法）8. 測試時間（參照懸浮粒子測試