用于治療杜氏利什曼蟲(chóng)感染病雷西莫特脂質(zhì)體

1、文獻(xiàn)翻譯用于治療杜氏利什曼蟲(chóng)感染病雷西莫特脂質(zhì)體 具體目標(biāo)： 先前應(yīng)用于治療皮膚利什曼蟲(chóng)病的咪唑喹啉類(lèi)藥是toll樣受體7/8激動(dòng)劑。由于咪唑喹啉類(lèi)藥具有疏水性，一般不能系統(tǒng)地用于治療內(nèi)臟利什曼蟲(chóng)病。我們將論證雷西莫特脂質(zhì)體，一種咪唑喹啉類(lèi)藥，可以系統(tǒng)地治療內(nèi)臟利什曼蟲(chóng)病。 方法： 利用水合作用把雷西莫特裹上一層薄膜，做成脂質(zhì)體。然后把這種脂質(zhì)體靜脈注射給感染了杜氏利什曼蟲(chóng)病的 BALB/c小鼠 結(jié)果： FDA認(rèn)可的雷西莫特，做成脂質(zhì)體后在治療內(nèi)臟利什曼蟲(chóng)感染病上是很有前途的 關(guān)鍵詞：給藥 咪唑喹啉 內(nèi)臟 療法 前言： 有超過(guò)30種利什曼蟲(chóng)可以引起利什曼蟲(chóng)病。世界上大約有1200萬(wàn)人感染利什曼

2、蟲(chóng)病，每年能導(dǎo)致大約有5萬(wàn)人死亡這種寄生蟲(chóng)感染病死亡人數(shù)超過(guò)了瘧疾 依靠利什曼蟲(chóng)的哪一亞種可以感染病人并且發(fā)展成皮膚（碩大利什曼原蟲(chóng)、熱帶利什曼蟲(chóng)和墨西哥利什曼蟲(chóng)）、粘膜（巴西利什曼原蟲(chóng)）或者內(nèi)臟利什曼蟲(chóng)病（內(nèi)臟利什曼原蟲(chóng)、杜氏利什曼原蟲(chóng)和嬰兒利什曼原蟲(chóng)）。最致命的是內(nèi)臟利什曼蟲(chóng)病。內(nèi)臟利什曼原蟲(chóng)（黑熱?。┖投攀侠猜x(chóng)是靠白蛉亞科昆蟲(chóng)傳播的。根據(jù)前言所介紹的哺乳動(dòng)物的宿主，杜氏利什曼原蟲(chóng)在皮膚里會(huì)被巨噬細(xì)胞吞噬而進(jìn)入體內(nèi)。因此，他們失去了鞭毛，成為無(wú)鞭毛體。杜氏利什曼原蟲(chóng)有能力在巨噬細(xì)胞的吞噬溶酶體里存活。于是他們急速增長(zhǎng)，隨后遍布于血管和淋巴系統(tǒng)。高比例的寄生蟲(chóng)最后將寄生于肝臟，脾臟，骨

3、髓中。如果任由其發(fā)展，最后會(huì)導(dǎo)致死亡。 在過(guò)去的70年里，對(duì)于內(nèi)臟利什曼原蟲(chóng)最常規(guī)的治療方式是系統(tǒng)的注射銻制劑，比如葡糖酸鈉或者葡甲胺銻制劑。銻制劑是劇毒的，有很多不利的副作用包括胰腺炎和心率失常。除此之外，一些杜氏利什曼原蟲(chóng)已經(jīng)對(duì)銻制劑療法產(chǎn)生抗藥性，需要發(fā)展其他的治療內(nèi)臟利什曼原蟲(chóng)的化學(xué)療法。這些療法包括靜脈滴注兩性霉素B脂質(zhì)體注射劑或者口服管制藥物米替福新。兩性霉素B是劇毒的，需要制成脂質(zhì)體避免受過(guò)效應(yīng)。而且，隨著兩性霉素B使用的增加，利什曼原蟲(chóng)已經(jīng)出現(xiàn)了抗藥性。米替福新在臨床試驗(yàn)中有82%的治愈率。然而，這個(gè)藥有致畸作用，他不能用于孕婦或者準(zhǔn)備懷孕的婦女。除此之外，兩性霉素B也是這樣的

4、，而且現(xiàn)在也出現(xiàn)了米替福新抗藥性的菌株。由于藥物抗藥性的增長(zhǎng)和目前的這些療法的用途限制，現(xiàn)在有發(fā)展替代的治療內(nèi)臟利什曼原蟲(chóng)病方法的需求一個(gè)替代傳統(tǒng)療法，它主要瞄準(zhǔn)病原體也就是瞄準(zhǔn)寄主病原體的關(guān)系。通過(guò)增強(qiáng)宿主的免疫應(yīng)答，病原體可以被有效的清除掉，同時(shí)減少潛在的發(fā)展的耐藥性。這種策略不僅用于治療傷寒、結(jié)核和真菌感染而且也可以用于治療利什曼原蟲(chóng)病。以前的文獻(xiàn)中也提到過(guò)聚糖類(lèi)，非甲基化DNA，和其他的免疫佐劑能成功的治療利什曼原蟲(chóng)感染。特別,FDA批準(zhǔn)的toll樣受體(TLR)7/8激動(dòng)劑咪唑喹啉在臨床試驗(yàn)中已經(jīng)成功治愈皮膚利什曼病。此外,雷西莫特(圖1),一個(gè)咪喹莫特衍生品和一個(gè)FDA批準(zhǔn)分子局部

5、用藥,也有望用于治療皮膚利什曼原蟲(chóng)感染。兩個(gè)咪唑喹啉誘導(dǎo)干擾素-a(IFN-a),白細(xì)胞介素-1(IL-1)、白細(xì)胞介素 - 6和腫瘤壞死因子(TNF-)在巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞中產(chǎn)生。Buates 和 Matlashewski 表明雷西莫特通過(guò)誘導(dǎo)一氧化氮的產(chǎn)生來(lái)降低細(xì)胞內(nèi)利什曼蟲(chóng)的數(shù)量對(duì)這種寄生蟲(chóng)還沒(méi)有直接的影響。因?yàn)槔孜髂鼐哂惺杷圆荒苤苯芋w內(nèi)注射，所以最近我們的團(tuán)隊(duì)遵從證明的原則,將雷西莫特封裝在聚合物做成的藥物輸送載體中。相關(guān)數(shù)據(jù)在這篇手稿將會(huì)一一呈現(xiàn)。我們把雷西莫特封裝于脂質(zhì)體載體中去治療內(nèi)臟杜氏利什曼蟲(chóng)感染。它毒性會(huì)會(huì)通過(guò)測(cè)定一個(gè)細(xì)胞的生物活性來(lái)評(píng)定。此外,雷西莫特脂質(zhì)體的功效測(cè)試

6、在定量的杜氏利什曼蟲(chóng)感染了器官的小鼠模型中進(jìn)行，測(cè)定它的細(xì)胞因子反應(yīng)和肝酶水平。材料與方法材料：所有試劑都是購(gòu)買(mǎi)和使用未經(jīng)變化的來(lái)自Sigma-aldrich公司(美國(guó)密蘇里州圣路易斯)除非另有注明。脂質(zhì)體配方中的脂質(zhì)膜都是購(gòu)自Avanti Polar Lipids公司 (美國(guó)阿拉巴馬州阿拉巴斯特)。水H 2 O是使用密理博(馬薩諸塞州，比勒利卡，美國(guó))超純水整體水凈化系統(tǒng)凈化的。熒光和吸收性質(zhì)的獲得是與美國(guó)俄亥俄州立大學(xué)化學(xué)和生物化學(xué)系友好合作，通過(guò)FlexStation 3微孔板監(jiān)測(cè)系統(tǒng)設(shè)備(美國(guó)利福尼亞州森尼維耳市)測(cè)得的。所有通過(guò)ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞因子

7、的試劑都是從BioLegend Inc公司(美國(guó)加利福尼亞州圣地亞哥)購(gòu)買(mǎi)的。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡在6 - 8周的BALB / c小鼠是購(gòu)自杰克遜實(shí)驗(yàn)室(美國(guó)我巴爾港)。年齡在6 - 8周敘利亞金黃倉(cāng)鼠從哈倫實(shí)驗(yàn)室(美國(guó)印第安納波利斯)買(mǎi)來(lái)的。動(dòng)物研究都是和美國(guó)俄亥俄州立大學(xué)動(dòng)物保健和使用委員會(huì)機(jī)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)一致并且得到其的允許。制備空的或裝載雷西莫特的脂質(zhì)體 脂質(zhì)囊按照如下配置：三氯甲烷和甲醇9：:1比例作為溶液，然后在里面添加氫化大豆磷脂酰胺，1,2-二硬脂酰-錫-丙三醇-3-（磷脂-1-（丙三醇），甘油磷脂（綿羊羊毛），D-維生素E（美國(guó)紐約法明德恩佐生命科學(xué)機(jī)構(gòu)）。脂質(zhì)溶液用BuchiR-200旋

8、轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（美國(guó)特拉華州NewCastle公司）處理。BuchiB-490旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的水浴溫度設(shè)為60。脂質(zhì)在60攝氏度水浴30分鐘旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)即可成膜。然后再把脂質(zhì)體凍融三次，然后擠出通過(guò)一個(gè)80納米聚碳酸酯膜的阿凡提迷你型擠出機(jī)/加熱塊和過(guò)濾11遍然后通過(guò)一次性 PD-10 脫鹽機(jī)。最后把蔗糖加到脂質(zhì)體（150重量）中然后凍干，確定尺寸和把雷西莫特封裝在脂質(zhì)體中脂質(zhì)體的尺寸通過(guò)動(dòng)態(tài)光散射（DLS）來(lái)測(cè)定。脂質(zhì)體懸浮于水上和執(zhí)行施膠的是使用Nicomp Submicron粒度測(cè)試儀型號(hào)370（圣巴巴拉，CA，USA），這就要感謝美國(guó)俄亥俄州立大學(xué)藥學(xué)院的羅伯特·李教授。封裝雷西莫特在乙醇

9、（1毫克/毫升）溶解3套空白脂質(zhì)體和瑞喹莫德裝載脂質(zhì)體，并將所得溶液放入耐溶劑96孔板中，一次做三份.標(biāo)準(zhǔn)曲線包括加入到平板后雷西莫特在乙醇中的溶解。平板在激發(fā)波長(zhǎng)260 nm，發(fā)射波長(zhǎng)360納米解讀。該熒光讀數(shù)空脂質(zhì)體從那些被減去的瑞喹莫德加載脂質(zhì)體和封裝用測(cè)定比較與校正曲線的熒光讀數(shù)。感染和治療協(xié)議杜氏利什曼原蟲(chóng)（LV82菌株）的生長(zhǎng)和培養(yǎng)是在只敘利亞種金地鼠體內(nèi).BALB/ c小鼠通過(guò)尾靜脈注射感染1×10 7無(wú)鞭毛體。處理過(guò)的小鼠連續(xù)2周通過(guò)尾靜脈注射100微升空脂質(zhì)體，載有雷西莫特脂質(zhì)體（7.6毫克每只小鼠雷西莫特）或SSG（500毫克/公斤）（阿爾伯特·大衛(wèi)有限

10、公司，加爾各答，印度）反復(fù)進(jìn)行感染。2周后處死和分析注射感染過(guò)的小鼠。組織學(xué)和用于處理的小鼠杜氏利什曼原蟲(chóng)單元 (LDUs)。在脾臟和肝臟中的寄生蟲(chóng)負(fù)荷量進(jìn)行按先前描述進(jìn)行定量。簡(jiǎn)要地說(shuō)，肝臟和脾臟的涂片用姬姆薩染色（賽默飛世爾科技，沃爾瑟姆，馬薩諸塞，美國(guó)），寄生蟲(chóng)負(fù)荷量用顯微鏡量化。LDU等同于每500個(gè)無(wú)鞭毛體在肝臟或脾臟繁殖的數(shù)量乘以肝臟或脾臟的重量（mg）.寄生蟲(chóng)負(fù)載量計(jì)數(shù)如先前描述進(jìn)行。簡(jiǎn)言之，骨髓從BALB / c小鼠的股骨被除去。骨髓涂片用姬姆薩染色和骨髓的LDU的量化等同于脾臟和肝臟。肝臟和脾的切片固定在10福爾馬林24小時(shí)，并提交美國(guó)俄亥俄州立大學(xué)組織學(xué)中心用蘇木和伊紅（H

11、E）染色和進(jìn)一步進(jìn)行組織病理學(xué)分析。小鼠感染了杜氏利什曼原蟲(chóng)的器官組織切片，采用HE染色，并由病理學(xué)家進(jìn)行組織病理分析。肝肉芽腫的評(píng)價(jià)列舉如下：（i）沒(méi)有反應(yīng); （二）發(fā)展繁殖中; （三）成熟;和（四）空白.樣品通過(guò)Olympus BX41光學(xué)顯微鏡成像（奧林巴斯，中心谷，巴拿馬，美國(guó)）。 T細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子的ELISA 如先前所述進(jìn)行T細(xì)胞增殖。簡(jiǎn)言之，將5×10 5脾臟細(xì)胞分成四份添加到無(wú)菌96孔中，平底組織培養(yǎng)板中，并用反復(fù)凍融過(guò)的杜氏利什曼原蟲(chóng)抗原（20毫克/毫升）刺激脾臟細(xì)胞。增殖反應(yīng)測(cè)定的采用如先前所述的阿拉馬藍(lán)測(cè)定法在37攝氏度條件下孵育72小時(shí)后收集上清液和然后分析

12、上清液中IFN-和IL-10的產(chǎn)量。測(cè)量肝轉(zhuǎn)氨酶酶 血液收集在非肝素化離心管中，并使其在4攝氏度條件下凝塊過(guò)夜。血清獲得后提交俄亥俄州立大學(xué)的獸醫(yī)醫(yī)院血液學(xué)化驗(yàn)科，使用COBAS C501血清分析儀（美國(guó)印第安納波利斯市羅氏公司）分析血清中的氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）的含量。 細(xì)胞活力 巨噬細(xì)胞（RAW264.7; ，美國(guó)維吉尼亞州馬納薩斯市，美國(guó)型培養(yǎng)菌種集）依據(jù)制造商的指導(dǎo)方針進(jìn)行培養(yǎng)。 杜伯克改良的伊格爾培養(yǎng)基（500毫升;賓夕法尼亞州匹茲堡費(fèi)歇爾公司）中的補(bǔ)充有胎牛血清（50毫升;美國(guó)巴拿馬州匹茲堡 Hyclone 公司）和鏈霉素（10毫升;美國(guó)賓夕法尼亞州匹茲

13、堡費(fèi)歇爾公司）。巨噬細(xì)胞接種于96孔板，使其達(dá)到5×10 4個(gè)細(xì)胞/孔的濃度并可以融合。在細(xì)胞已相互附著后，除去培養(yǎng)基并用含有游離雷西莫特，裝載有雷西莫特的脂質(zhì)體（0.312重量/重量）或空脂質(zhì)體的培養(yǎng)基，或空白培養(yǎng)基替換。24小時(shí)后用MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率。簡(jiǎn)要地說(shuō)，每孔的介質(zhì)都替換為新鮮的培養(yǎng)基（150毫升）和MTT溶液（20微升的5毫克/毫升溶液）。將該板培養(yǎng)直至紫色甲臜晶體已成型.然后解在異丙醇中。在560nm處測(cè)定吸光度和背景讀數(shù)在670nm測(cè)量。把用雷西莫特，脂質(zhì)體雷西莫特或空脂質(zhì)體治療細(xì)胞的活力與未經(jīng)處理的細(xì)胞進(jìn)行比較。 結(jié)果 脂質(zhì)體制劑 我們擠壓脂質(zhì)薄膜形成雷西莫特脂

14、質(zhì)體。通過(guò)DLS測(cè)量，雷西莫特脂質(zhì)體的直徑y(tǒng)應(yīng)在75.0±30.7nm。擠出后，脂質(zhì)體放置在PD-10尺寸的排阻柱，以去除其他未包封的雷西莫特。然后把上述脂質(zhì)體用冷凍保護(hù)劑（蔗糖）凍干。脂質(zhì)體產(chǎn)量60.4，而雷西莫特的包封率為7.0，這樣可以得到的脂質(zhì)體每單位重量的載藥量為1.1。杜氏利什曼原蟲(chóng)感染的治療被感染杜氏利什曼原蟲(chóng)和進(jìn)行2周空脂質(zhì)體感染，載有雷西莫特的脂質(zhì)體或SSG的BALB / c小鼠作為陽(yáng)性對(duì)照。處死小鼠并分析感染2周后小鼠體內(nèi)的杜氏利什曼原蟲(chóng)含量。圖2（a）表明，用雷西莫特脂質(zhì)體處理過(guò)的小鼠的脾臟的LDU值均較用空脂質(zhì)體處理的小鼠低（P0.01）。用SSG處理過(guò)的小鼠

15、（現(xiàn)行治療標(biāo)準(zhǔn)）LDU數(shù)均比用空脂質(zhì)體（P0.0005）和雷西莫特脂質(zhì)體處理過(guò)的低（P0.003）。在圖2（b），可以注意到，用雷西莫特脂質(zhì)體處理過(guò)的小鼠的肝臟LDU值均用空脂質(zhì)體處理的小鼠低（P0.05）。用SSG處理過(guò)的小鼠有較低的LDU值比用空脂質(zhì)體處理的小鼠（P0.005）或用雷西莫特脂質(zhì)體處理的小鼠（P0.03）。在圖2（c）中，在用雷西莫特脂質(zhì)體處理過(guò)的小鼠的骨髓中每200巨噬細(xì)胞無(wú)鞭毛體的數(shù)量均比對(duì)用空白脂質(zhì)體處理過(guò)的低（P0.05），用SSG處理過(guò)的小鼠無(wú)鞭毛體的數(shù)量顯著低于用空脂質(zhì)體（P0.005）或雷西莫特脂質(zhì)體處理過(guò)的（P0.03）。T細(xì)胞的增殖和細(xì)胞因子處死杜氏利什曼原

16、蟲(chóng)感染過(guò)的BALB / c小鼠，并從中分離出脾細(xì)胞。將脾細(xì)胞用杜氏利什曼原蟲(chóng)抗原沖激，72小時(shí)（圖3）后測(cè)定其增殖情況。雷西莫特脂質(zhì)體處理過(guò)的小鼠增殖與那些用空脂質(zhì)體（P0.01）處理相比表現(xiàn)出了較高的水平，而那些與用SSG處理的陽(yáng)性對(duì)照物比用空白脂質(zhì)體處理過(guò)有較高的增殖率（P0.0005），并顯示與用雷西莫特脂質(zhì)體（P0.06）處理的小鼠相比有相似的顯著增殖率。用雷西莫特脂質(zhì)體處理的小鼠的IFN-水平顯著高于用空脂質(zhì)體P0.00005）或SSG（P0.00005）處理的小鼠。用雷西莫特脂質(zhì)體處理的小鼠的IL-10水平在統(tǒng)計(jì)學(xué)上也顯著高于用空脂質(zhì)體(P0.0005)或SSG (P0.005)處

17、理的小鼠（圖4）。在體外生存能力，組織學(xué)和肝臟酶的活性RAW巨噬細(xì)胞用不同劑量的雷西莫特培養(yǎng)，其范圍是0.04至5微克/毫升（圖5）。用雷西莫特或雷西莫特脂質(zhì)體培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞生存能力并沒(méi)有顯著不同。5微克/毫升的雷西莫特的增殖率比空脂質(zhì)體高（P0.05）.在兩個(gè)最低濃度：0.07和0.03微克/毫升，用雷西莫特脂質(zhì)體培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞的生存能力比用空脂質(zhì)體的高（P0.05）。肝臟ALT（圖6a）和AST（圖6b）酶分析顯示出，ALT在雷西莫特脂質(zhì)體（P0.05）和SSG（P0.05）組都有呈現(xiàn)出顯著低水平;然而，上述兩組的AST水平無(wú)顯著差異。此外，在組織學(xué)層面上，用空脂質(zhì)體和雷西莫特脂質(zhì)體處理的

18、小鼠的肝臟和脾臟的炎癥反應(yīng)或毒性沒(méi)有明顯差異（數(shù)據(jù)未示出）。討論免疫治療在治療內(nèi)臟利什曼蟲(chóng)病上是一種很有前景的方法。此前有研究表明，TLR受體激動(dòng)劑如CpG用來(lái)治療內(nèi)臟利什曼蟲(chóng)感染是具有可行性的。 15我們建議使用TLR7 / 8激動(dòng)劑雷西莫特治療內(nèi)臟利什曼蟲(chóng)感染。以前的研究已經(jīng)表明，一種類(lèi)似的化合物，咪喹莫特，成功地治療皮膚利什曼病27, 28。不幸的是，通過(guò)全身給藥，無(wú)論是咪喹莫特和雷西莫特在水性環(huán)境中都是高度不溶的。我們假設(shè)，將雷西莫特做成脂質(zhì)體后，可用于TLR 7/8激動(dòng)劑的靜脈注射來(lái)治療內(nèi)臟利什曼蟲(chóng)感染。疏水性藥物兩性霉素B在制劑時(shí)已成功的封裝于脂質(zhì)體中（兩性霉素b脂質(zhì)體注射劑）。兩

19、性霉素b脂質(zhì)體可以降低藥物毒性和促進(jìn)藥物的全身遞送。我們使用了兩性霉素b脂質(zhì)體注射劑類(lèi)似的制劑，把雷西莫特用脂質(zhì)薄膜封裝在脂質(zhì)體中。脂質(zhì)是通過(guò)擠出形成直徑大約80納米的顆粒，這是與兩性霉素b脂質(zhì)體注射劑大致相同的尺寸。 30這個(gè)小尺寸的脂質(zhì)體可以有較長(zhǎng)的循環(huán)時(shí)間和能大量滲透到如肝，脾這些利什曼原蟲(chóng)寄宿的組織。此外，雷西莫特脂質(zhì)體是有可能被批準(zhǔn)用于臨床使用，由于我們使用了類(lèi)似于FDA批準(zhǔn)的兩性霉素b脂質(zhì)體注射劑的脂質(zhì)體制劑和使用了FDA批準(zhǔn)的雷西莫特的緣故。我們以前制定雷西莫特體內(nèi)應(yīng)用的工作中使用電噴射微粒制粒，其直徑大約是1微米。 22不幸的是，使用電噴射微粒制粒技術(shù)或乳液化學(xué)作出于兩性霉素b

20、脂質(zhì)體注射劑粒子大致相同的粒徑是困難的。以前的研究已經(jīng)表明，脂質(zhì)體制劑的粒徑大于400納米的是可以有選擇性的被相當(dāng)于寄生蟲(chóng)容器的骨髓吸收31，這里的骨髓相當(dāng)于寄生蟲(chóng)容器32，里面的寄生蟲(chóng)可能有助于內(nèi)臟利什曼蟲(chóng)感染治療后的復(fù)發(fā)。今后的工作將研究雷西莫特最佳濃度脂質(zhì)體制劑應(yīng)用于肝，脾，骨髓的效果. 本研究中，我們把雷西莫特脂質(zhì)體靜脈注射到感染杜氏利士曼原蟲(chóng)2周后的小鼠體內(nèi)。我們的結(jié)果表明雷西莫特脂質(zhì)體治療后，肝，脾和骨髓中的杜氏利什曼原蟲(chóng)的數(shù)量與空脂質(zhì)體處理的小鼠相比顯著下跌。作為陽(yáng)性對(duì)照，我們使用了非常高劑量（500毫克/公斤）的SSG（傳統(tǒng)劑量，300毫克/千克）。我們可以圍繞耐藥菌株的形成去

21、開(kāi)發(fā)一種瞄準(zhǔn)宿主與寄生蟲(chóng)的關(guān)系的免疫療法。這是有意義的，考慮到在如比哈爾邦，印度等地，已經(jīng)報(bào)道，超過(guò)60內(nèi)臟利什曼原蟲(chóng)感染的患者使用銻治療無(wú)效。Sane et al 15，表明， CpG 和米替福新在治療內(nèi)臟利什曼原蟲(chóng)感染表現(xiàn)出的協(xié)同效應(yīng)可以降低利什曼原蟲(chóng)的載量。未來(lái)實(shí)驗(yàn)中會(huì)聯(lián)用兩性霉素B和雷西莫特，將它們做成脂質(zhì)體的形式，在治療利什曼原蟲(chóng)病耐藥性上能更顯著減少寄生蟲(chóng)載量。進(jìn)一步闡述雷西莫特脂質(zhì)體治療的特征，取出用利什曼原蟲(chóng)抗原培養(yǎng)的小鼠脾臟，測(cè)定其細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子的產(chǎn)量。當(dāng)與用雷西莫特或空脂質(zhì)體處理的小鼠相比較，可以發(fā)現(xiàn)用利什曼原蟲(chóng)抗原培養(yǎng)的小鼠脾臟細(xì)胞的增殖量稍高，但這種差異并沒(méi)有在用S

22、SG處理的小鼠的脾細(xì)胞中觀察到。 與用空脂質(zhì)體或SSG處理的小鼠相比，用雷西莫特脂質(zhì)體處理的小鼠脾細(xì)胞中IFN-的產(chǎn)量顯著增加。 先前已有研究表明，用雷西莫特進(jìn)行全身治療可提高IFN-的產(chǎn)量，IFN-可以預(yù)防和治療T淋巴細(xì)胞2（TH2）過(guò)敏反應(yīng)。33由于用雷西莫特脂質(zhì)體治療可以誘導(dǎo)產(chǎn)生高水平的IFN-，我們推測(cè)這就是雷西莫特如何局部的減少利什曼原蟲(chóng)載量的原因。 IFN-對(duì)于清除內(nèi)臟利什曼蟲(chóng)感染是十分重要的，因?yàn)樗褕?bào)道出， IFN-基因敲除小鼠是很容易受到感染的。 34此外，Scott et al. 35表明小鼠耐內(nèi)臟利什曼蟲(chóng)感染品種與小鼠易感品種相比有大量的IFN-。另一方面，用雷西莫特脂質(zhì)

23、體處理小鼠離體脾細(xì)胞可以誘導(dǎo)產(chǎn)生高水平的IL-10。先前的研究表明雷西莫特可同時(shí)誘導(dǎo)產(chǎn)生IFN-和IL-10，36-38而 Boghdadi et al。 顯示當(dāng)用雷西莫特刺激感染了曼氏血吸蟲(chóng)的患者的外周單核血細(xì)胞能產(chǎn)生高水平的IFN-和IL-10。 由于C57BL / 6和BALB / c品系IL-10基因敲除小鼠具有很強(qiáng)的抗感染能力，所以IL-10已與增加內(nèi)臟利什曼原蟲(chóng)感染的發(fā)病機(jī)制相聯(lián)系。 40然而，先前的研究也表明，CpG可像雷西莫特那樣提高單核細(xì)胞中的IL-10的產(chǎn)量。 41,42總體而言，似乎即使用雷西莫特脂質(zhì)體處理小鼠來(lái)誘導(dǎo)IL-10的產(chǎn)生，寄生蟲(chóng)數(shù)量任然下降了，這可能與大大提高

24、了IFN-的產(chǎn)量有關(guān)。我們以前的研究已經(jīng)表明，體外注射雷西莫特的飽和溶液0.1微克/毫升，這在刺激免疫細(xì)胞上是一種非常有效的佐劑。 28當(dāng)用高達(dá)5微克/毫升的雷西莫特脂質(zhì)體培養(yǎng)RAW巨噬細(xì)胞時(shí)，它細(xì)胞存活率沒(méi)有表現(xiàn)出差別。因此我們得出這樣的結(jié)論，用必要的濃度刺激宿主細(xì)胞，雷西莫特的劑量不影響巨噬細(xì)胞的生存能力。 Scott et al 43表明咪喹莫特，但不是雷西莫特，通過(guò)激活胱天蛋白酶和Bcl-2蛋白依賴性的細(xì)胞色素C誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡.口服的雷西莫特已被用在丙型肝炎IIa期臨床試驗(yàn)中;在試驗(yàn)中表現(xiàn)出無(wú)毒，只有兩個(gè)病人因出現(xiàn)流感樣癥狀離開(kāi)了試驗(yàn)。我們的組織學(xué)研究表明，用空脂質(zhì)體處理的動(dòng)物與用雷西莫特脂質(zhì)體處理的動(dòng)物相比較，其炎癥和毒性反應(yīng)沒(méi)有差異。肝酶如ALT 和 AST的升高，表明肝臟有疾病或代表可能對(duì)肝臟有損傷。 45 雖然這些酶的水平增加可表示藥物在肝