β型溶血性鏈球菌的測定

1、作業(yè)指導(dǎo)書文件編號：XZJY072-00-2017版本號/修訂狀態(tài):一 /第0次修改B型溶血性鏈球菌的測定頁碼/總頁數(shù)：1/4實施日期：2017.06.23一、編制目的為規(guī)范本單位B型溶血性鏈球菌的檢測編制本作業(yè)指導(dǎo)書。二、適用范圍本指導(dǎo)書適用于食品中B型溶血性鏈球菌的測定。三、編制依據(jù)GB/T 4789.11-2014食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗（3型溶血 性鏈球菌檢驗 四、設(shè)備和材料除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：a）恒溫培養(yǎng)箱：36 C± 1C；b）冰箱：2C5C；c）厭氧培養(yǎng)裝置；d）天平：感量0.1g;e）均質(zhì)器與配套均質(zhì)袋；f）顯微鏡：10X

2、100X ；g）無菌吸管：1ml （具0.01ml刻度）、10ml （具0.1ml刻度）或微量 移液器及吸頭h）三角燒瓶；i）無菌培養(yǎng)皿：直徑90mmj）pH計或pH比色管或精密pH試紙； 作業(yè)指導(dǎo)書件 編號： XZJY072-00-2017版本號/修訂狀態(tài):一/第0次修改B型溶血性鏈球菌的測定頁碼/總頁數(shù)：2/4實施日期：2017.06.23k）水浴裝置：36c ±1C； l）微生物生化鑒定系統(tǒng)。五、培養(yǎng)基和試劑5.1 .改良胰蛋白月東大豆肉湯5.2 哥倫比亞CNAfc瓊脂5.3 哥倫比亞血瓊脂5.4 革蘭氏染色液5.5 胰蛋白月東大豆肉湯5.6 草酸鉀血漿5.7 0.25%氯化鈣

3、（CaCb）溶液5.8 3%過氧化氫（H2C2）溶液5.9 生化鑒定試劑盒或生化鑒定卡 六、檢驗程序溶血性鏈球菌檢驗程序見圖1作業(yè)指導(dǎo)書文件編號：XZJY072-00-2017版本號/修訂狀態(tài):一/第0次修改B型溶血性鏈球菌的測定頁碼/總頁數(shù)：3/4實施日期：2017.06.23鏈微酹試驗選做項目)生化鑒定圖1溶血性鏈球菌檢驗程序七、操作步驟7.1 樣品處理及增菌以無菌操作取樣25g (ml),加入裝有滅菌225mlmTSB勺均質(zhì)杯，用旋 轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以 8000r/min10000 r/min均質(zhì)；或加入裝有 225ml mTSB作業(yè)指導(dǎo)書文件編號：XZJY072-00-2017版本號/修

4、訂狀態(tài):一/第0次修改B型溶血性鏈球菌的測定頁碼/總頁數(shù)：4/4實施日期：2017.06.23的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器連續(xù)均質(zhì)1min2min,液體樣品振蕩混勻即可。于36c ±1C,厭氧培養(yǎng)18h24h。7.2 分離將增菌液劃線接種于哥倫比亞 CN燦瓊脂，36 C ± 1 C ,厭氧培養(yǎng)18h 24h,觀察菌落形態(tài)。溶血性鏈球在哥倫比亞CNA&瓊脂平板上的典型菌落 形態(tài)為直徑約2mm3mm灰白色、半透明、光滑、表面凸起、圓形、邊緣整 齊，并產(chǎn)生B型溶血。7.3 鑒定7.3.1 分純培養(yǎng)挑取5個（如小于5個則全選）可疑菌落分別接種哥倫比亞血瓊脂 平板和TSB增菌液，36c ±1C,培養(yǎng)18h24h。7.3.2 革蘭氏染色鏡檢挑取可疑菌落染色鏡檢。（3型溶血性鏈球菌為格蘭氏染色陽性，球形 或卵圓形，常排列成短鏈狀。7.3.3 觸酶試驗挑取可疑菌落于潔凈的載玻片上， 滴加適量3%R化氫溶液，立即產(chǎn)生氣 泡者為陽性。B型溶血性鏈球菌為陰性7.3.4 其