AB液質(zhì)操作規(guī)程完整

1、第一部分開關機AA、開機1打開UPS電源，打開氮氣發(fā)生器（氣瓶），確認Curtaingas的輸入壓力為0.4MPa, gas1/2為 0.7MPa，exhuast為 0.4MPa。2. 打開機械泵電源開關（5500系列直接打開質(zhì)譜主機電源，儀器自動啟動機械泵）3. 等機械泵工作至少30min5. 打開質(zhì)譜主機電源開關6. 過夜抽真空BB、關機1停止輸液：關停針泵或液相泵，或斷開輸液管線（一般質(zhì)譜主機Sta ndby后液相系統(tǒng)也自動待機，輸液泵自動關停，但建議操作人員再次確認，必須保證沒有任何 液體再泵入質(zhì)譜）2使儀器待機，并滅活配置2關閉質(zhì)譜儀主機電源開關（5500系列只需按下電源開關旁的VE

2、NT按鍵排放 真空）3機械泵繼續(xù)工作至少30min4關閉機械泵上的電源開關（5500系列會自動關停機械泵，待機械泵停止后即可 關閉5500系列主機上的電源開關）5關閉氣體發(fā)生器或氣瓶第二部分調(diào)諧1、PPG就是正離子校正液，PPG3000負離子調(diào)諧液，本臺儀器只用兩瓶校正液，正離子一瓶，負離子一瓶。洗液一瓶50%的甲醇水。調(diào)諧前先用洗液洗針兩次。吸校正液的時候慢慢吸，避免吸入氣泡，吸好以后將針泵卡住。再將高度調(diào)到5,將管路重新連接。不再連接六通閥，由質(zhì)譜直接進樣，且將針泵的速度調(diào)到10 L/ml。2、 調(diào)諧液弄好后在儀器面板工具欄上：TOOIt項目t創(chuàng)建項目。此項目為一個文件夾，文件夾里面包括所

3、有此次采集的信息，方法、序列等，且所有采集的項目都固定在一個文件夾下面：D:/AnalystData/Project。新建項目的時候，彈出窗口中有個AddAII，可以創(chuàng)建孫文件夾。3、 聯(lián)機：軟件打開后在左上方硬件配置（單機選中，雙擊打開）t只需選中儀器MA activeprofile。圖標變?yōu)榫G色，表示聯(lián)機成功。調(diào)諧只需要選中質(zhì)譜。儀器的實時狀態(tài) 可以點擊右下方的圖標，質(zhì)譜和液相都是單獨觀察，質(zhì)譜要注意真空度，為0.5.4、 調(diào)諧t手動調(diào)諧t項目（文件夾）選中下拉菜單中的 Installation （為系統(tǒng)默認的調(diào) 諧文件夾），先Q1tstartsyringpump （打開針泵）tstart

4、 （質(zhì)譜），開始采集以后觀察基線是 否平衡，若等兩分鐘還未平衡好，則手動將針泵往上抬。5、 平衡好后（基線平穩(wěn)則為平衡好），重新進樣，重新點擊startsyringpump。Resolution （分辨率）tadvaneed （高級選項）（看到結果后調(diào)節(jié)質(zhì)量軸和分辨率做準備，只能先打開這個，再打開譜圖）t實時質(zhì)譜圖右鍵 topenfile T隨便點一個框t軟件上方的從譜圖校正t PPGPOS（正離子）t start出現(xiàn)三行：（1質(zhì)量軸。2、分辨率。3、兩次調(diào)諧的差異） t 若質(zhì)量軸有差異 t右上角tyesT若分辨率飛離出虛線 toffset （偏大調(diào)大，偏小調(diào)?。┹斎?校正的數(shù)值，再重新進樣，

5、如此反復，直到點落在虛線以內(nèi)，實線代表最合適。6、 校正好后儀器會自動保存，直接關掉窗口即可。負離子調(diào)諧和正離子調(diào)諧步驟一樣，只是在選擇方法的時候要注意選擇負離子模式。還有看結果時要選擇PPG3000.此為負離子調(diào)諧液。調(diào)諧因針泵流速很小，10卩L/ml，所以不需要設定離子源溫度及輔助氣，直接設定噴霧器流速為50，就可以將樣品霧化，氣簾氣也不需要設置，因為沒有多余的溶劑需要吹走。第三部分：方法優(yōu)化1. 在 An alyst 軟件 Tools 菜單中選擇 Project t CreateProje在 Project name 項下輸 入新建的Project名稱。注意，不要點選窗口中的其他按鈕！點

6、擊 0K，確認新建 Project。2. 在Analyst軟件界面下，雙擊導航欄內(nèi)HardwareConfiguration。在彈出窗口中 選擇Mass On ly,點擊ActivateProfile，激活Mass On ly （只聯(lián)接質(zhì)譜主機）。3. 在導航欄內(nèi)單擊TuneandCalibrate進入調(diào)諧模式。點擊上方工具條中的 T鈕。 此時，應注意到主機有 “撲”聲音，表明進入調(diào)諧狀態(tài)。此時右下角質(zhì)譜狀態(tài)顯示 綠色。雙擊ManualTuning,進入質(zhì)譜參數(shù)設置及運行窗口。4. 使用 1mL 玻璃進樣針吸取適當標準溶液，置于進樣針座上。點擊MSMethod下拉菜單，選擇 SyringePu

7、mpMethod,設定針泵流速 FlowRate為10卩L/min5. 點擊StartSyringePump按鈕開針泵進樣。6. 返回MSMethod，選擇掃描模式 Scan Type為Q1MS，設定掃描速度 Sca nRate 為10Da/s,設定掃描范圍StartStop設定為50化合物分子量。DP預輸入 60。7. 點擊start開始采集數(shù)據(jù)。運行穩(wěn)定后，注意觀察是否有預期的母離子出現(xiàn)，并控制其響應值在約E4以下。點擊stop，選擇第一個峰(后面是同位素峰)的平 穩(wěn)段，雙擊，選中母離子。點擊右鍵，選擇DeletePane。8. 設定Scan type為產(chǎn)物離子掃描 ProductIon

8、(Ms2)，掃描速度200Da/s，選擇掃描正/負離子，輸入母離子(productof)，設定掃描范圍startstop為50MW+20，覆蓋可能的子離子質(zhì)量范圍，點擊 compoud標簽，設定(DP) 60，( CE) 5。9. 點擊start,開始采集數(shù)據(jù)，注意觀察是否有預期的母離子出現(xiàn)。手動調(diào)節(jié)CE， 以 5eV 為步長，逐漸增加。每次增加后稍作等待，直至目標化合物的子離子清 晰看見。選擇平穩(wěn)的一段，雙擊，選擇子離子。10. 選擇ScanType為MRM。設定參數(shù)表格中的 Q1對應的母離子，Q3對應的子 離子，time (ms)為50，ID值設為名稱1 (定量)，名稱2 (定性)。11點

9、擊 EditRamp，在 Parameter下選擇 CollisionEnergy，點擊 OK。點擊 start開 始采集數(shù)據(jù)，記錄每個 MRM通道的最佳CE電壓。在MRM參數(shù)設定表中，右 鍵點擊。選擇CollisionEnergyCE，調(diào)出表格中的CE列，輸入每個MRM通道的 最佳CE電壓值，精確到個位數(shù)。重復以上步驟，在 Parameter項下選擇 DeclusteringPotential,優(yōu)化并保存DP。完成后選擇菜單File/Save保存采樣方法， 文件名 .dam。第四部分：方法建立一、LCMS方法的建立：1、連接儀器：打開HPLC質(zhì)譜電源，將HPLC系統(tǒng)接上柱子，將6號出口 管線

10、與離子源連好。調(diào)離子源噴霧針位置到2mm處，雙擊HardwareConfigure ， 在硬件配置菜單下單擊LCMS （液相與質(zhì)譜聯(lián)用），單擊Activateprofile激活儀器， 會聽到笛的一聲，說明儀器已經(jīng)連接上。2、 確認液質(zhì)同步：選擇項目（之前優(yōu)化方法的時候已經(jīng)建立的項目）；雙擊 Buildacquisitio nm ethod新建方法，彈出新建方法模板。在模板左側點擊 acquisitio nm ethod，模板右邊顯示對應的參數(shù)，確認 synchroni zati onm ode選擇 LCSync,表示液質(zhì)同步。3、 設置MRM參數(shù)：點擊方法模板左側的 MRM，在模板右側Scan

11、Type下 選擇MRM ； 在 polarity下選擇化合物極性：Positive（正離子）、Negative （負離 子）；Duration為15min （與液相分離相同的時間）；表格中Q1:母離子分子量， Q3（Da）:子離子分子量，Time（ msec）: 50，ID欄：化合物名稱（離子對名稱 后空格加1為定量，空格加2為定性），在表格中右鍵分別單擊 DP、CE，點擊 工具欄的OPEN打開之前優(yōu)化的方法參數(shù)，調(diào)出DP,CE值，選中整行，Ctrl+c （復 制）參數(shù)，關閉窗口，再Ctrl+v （粘貼）參數(shù)）；最后點擊Editparameter設置離子 源參數(shù)：Source/Gas項用以下推

12、薦值：CUR35 , IS:5500（正離子）或-4500 （負離 子），TEM600，GS160，GS270，點擊 OK。4、設置液相參數(shù)：點擊模板左邊的shimadzuLCsystem，在右邊的pumps 欄下，設置stoptime （運行時間）為15min，flow流速為1mL/min，A為水相設 為95%, B為有機相設為5% （設置時改B，A自動），泵最大壓力為50；點擊 timeprogram設置液相梯度：例咪唑類梯度設置：Time(mi n)AB95%5%55%95%105%95%10.195%5%1595%5%接著在右邊的Autosampler欄下，設置清洗時間，在 Rinse

13、mode下選擇 Beforeandafter （前后都洗），并設置清洗時間為5s,清洗液用50%甲醇水。最后 點擊保存按鈕，在保存窗口輸入該方法的名稱。二、建立批處理：1、雙擊Buildacquisitionbatch，在右邊窗口 set欄為批處理保存的文件夾命 名以便識別，再點擊addset，最后點擊addsample，再選擇之前建立的LC-MS 方法，在彈出的窗口內(nèi)的number（進樣樣品數(shù)）處填入需要進樣的 樣品個數(shù)， 點擊OK。2、 在加入的樣品列表內(nèi)依次填寫 sample name （樣品名稱）、viapositi on （樣 品瓶的位置）、inj.volunme （進樣體積：一般5

14、微升或10微升）。3、在submit項下點擊submit按鈕以提交樣品序列。4、點擊工具條上左上角的viewqueue按鈕，可查看已提交的樣品。此時將儀器從校正狀態(tài)退出，進入分析模式。確認泵已打開，首次進樣液相 先排氣，再平衡儀器：先點擊工具條上的equilibrate平衡按鈕，在彈出的平衡 窗口中輸入平衡時間10min，點擊ok。右下角圖標會變黃，待平衡結束后此處 圖標會變成綠色，此時即可點擊 startsample按鈕采集樣品信息，儀器會自動對 已提交的全部樣品進行采集。第五部分數(shù)據(jù)處理1. 雙擊打開Multiquilt，選擇項目，點擊File下的熒光棒型圖標，點擊 sample, 選擇需

15、要的標準品和樣品數(shù)據(jù)，點擊 next，createnewmethod為方法命名， 點擊next，選擇一個有代表性的樣品（一般選擇濃度較大的標品數(shù)據(jù)），設置 分組（同一物質(zhì)定量離子和定性離子設置為一組），并指定內(nèi)標，n ext，對每 個物質(zhì)進行積分。2. 設置積分參數(shù)：a、CausianSmoth （平滑）：一般是0，如有毛刺可改成1或2；b、ExpecetedTime （保留時間）：一般不動c、 Expectedtime范圍：一般30s,表示在保留時間 ±5s范圍d、最小峰寬e、最小峰高f、背景噪音扣除： 可調(diào)整目標峰基線以下被積分的面積， 比例越高積分越往 下，必要時調(diào)整。g、分峰

16、因子：峰有分叉時設置，如有兩個分叉，設置為2，峰分叉不能大于2h、 單位：設置單位，勾選 Applyunitstoall 可將此單位用于所有化合物 點擊next，點擊finish。在新跳出窗口內(nèi)將標準品選定，輸入濃度。查看各化合 物積分是否正常，點擊第三個圖標查看標準曲線。報告打印：點擊 File, createreport, Reporttemplate（選擇報告模板，一般用 samplel和標線，內(nèi)標報告只能用sample1,2,3，命名，選擇存儲報告位置，點 ok。信噪比：選擇項目，雙擊opendatefile,點擊sample,選擇低濃度樣品，點擊ok,點擊XIC， 選擇定量離子，點擊

17、ok，選中峰，按住shift，選峰附近的一段時間，點 Script， 點擊S-To NScript，即可得到結果。第六部分： LC-MS 離子阱原理及其應用原理：在進行多級質(zhì)譜分析（MS-MS）時，首先限定目標質(zhì)量的離子。通過調(diào)整交 變電壓，將大于以及小于目標質(zhì)量的離子射出， 從而使得僅有一個質(zhì)量的離子存 在于離子阱中并將其富集。目標質(zhì)量的范圍被稱為Isolatio nWidth。之后通過向離子阱內(nèi)注入氣體（通常為氦氣或氮氣） ，與離子發(fā)生碰撞使其被打成碎片。 操作方法：首先在 Analyst 中打開一個成熟的 MRM 采樣方法，然后右鍵單擊AcquisitionMethod 中的 MRM ，

18、在彈出菜單中選擇 AddIDACriteriaLevel 。在新增的 IDA-FirstLevelCriteria 頁面中設置相關邏輯選項 （其中四項尤為 重要）1）Select “ X” to “ Y” most in te nse表住0在多個組分色譜共流出時， 指定觸 發(fā)最強的若干個母離子，“ 1to2表示最強和次強的兩個母離子，“ 1to3 ”表示最強和次強和第三位三個母離子，以此類推。請注意，如果選擇 了 “ 1to2或“ 1to3,”則后續(xù)的EPI個數(shù)應調(diào)整為對應的兩個或三個。（一 般選擇兩個以下）2) AfterDynamicBackgroundSubtractionofSurveyScan 表示執(zhí)行動態(tài)背景扣除，使得感興趣的母離子都盡可能的獲得觸發(fā)EPI的機會。該選項尤為重要，為必選項。3) Excludeformertargetio ns在某些情況下，一