直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者腫瘤組織CD44、CD166陽性表達的臨床意義

1、直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者腫瘤組織 CD44 、CD166陽性表達的臨床意義【摘要】 目的：探討直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者腫瘤組織中CD44與 CD166 陽性表達的臨床意義。方法：選取筆者所在醫(yī)院2013 年 1 月 -2016 年 12 月筆者所在醫(yī)院收治146 例直腸癌患者的腫瘤組織標本，其中32 例為肝轉(zhuǎn)移患者，另外114 例為未轉(zhuǎn)移患者，分別對各組樣本進行SP免疫組化染色法進行檢測， 觀察兩組標本組織中CD44 、CD166陽性表達情況，并初步探討其陽性表達與患者腫瘤浸潤深度、腫瘤分化程度的相關(guān)性。結(jié)果：對照組和轉(zhuǎn)移組CD44 陽性表達率分別為42.98% 和71.87%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；對照組和轉(zhuǎn)移

2、組CD166 陽性表達率分別為36.84% 和 81.25%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；肝轉(zhuǎn)移患者中 CD44 和 CD166 陽性表達與浸潤深度有密切關(guān)系，腫瘤浸潤深度越深其陽性表達率越高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義； 而與分化程度無密切關(guān)聯(lián)。 結(jié)論：CD44 和 CD166 高陽性表達可作為直腸癌肝轉(zhuǎn)移的標志性指標，對直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者的早期診斷具有積極的作用，并且 CD44 和 CD166 高陽性表達與患者浸潤深度有密切的關(guān)系。【關(guān)鍵詞】 直腸癌； 肝轉(zhuǎn)移； CD44 ； CD166 ； 陽性表達doi：10.14033/ki.cfmr.2017.17.014文獻標識碼B 文章編號1674-680517-0

3、031-03直腸癌是發(fā)生在齒狀線至直腸乙狀結(jié)腸交界處之間的癌，屬于消化道最常見的惡性腫瘤之一 1 。近年來隨著人們生活水平及飲食習(xí)慣的改變，直腸癌發(fā)病呈現(xiàn)出上升及年輕化趨勢，并且由于直腸癌發(fā)病位置較低且深入盆腔，雖較易診斷，但其解剖關(guān)系較為復(fù)雜，手術(shù)不易徹底清除，術(shù)后復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率較高，肝臟是直腸癌發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的主要靶器官之一，發(fā)生肝轉(zhuǎn)移后的直腸癌患者不僅病情更加復(fù)雜而且嚴重影響患者的治療及預(yù)后2 。臨床研究顯示，單純直腸癌5 年生存率約66%，而直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者3 年生存率約12%3 。早期的診斷與標志物監(jiān)測對直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者的臨床治療與生命安全具有重要的意義與作用。CD44 、 CD166

4、與直腸癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，為進一步探討二者在直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者腫瘤組織陽性表達的臨床意義，筆者針對 146 例直腸癌患者的腫瘤組織標本進行研究探討，以為后期直腸癌患者肝轉(zhuǎn)移的臨床診斷提供基礎(chǔ)參考，現(xiàn)匯報如下。1 資料與方法1.1 一般資料選取筆者所在醫(yī)院2013 年 1 月 -2016 年 12 月筆者所在醫(yī)院收治的146 例直腸癌患者的腫瘤組織標本，其中32 例為肝轉(zhuǎn)移患者，另外 114 例為未轉(zhuǎn)移患者，納入所有標本對應(yīng)患者留取標本前均未進行相關(guān)對應(yīng)治療，其中轉(zhuǎn)移組對應(yīng)患者男女比例，年齡35 69 歲，平均歲，病程5 40 個月，平均個月； 原發(fā)腫瘤大小： 小于 2 cm 為 6 例

5、，2 5 cm 為 11例，大于 5 cm 為 15 例；浸潤深度： T2 9 例，T3 12 例，T4 11 例；分化程度：低分化腺癌 17 例，中分化腺癌 10 例，高分化腺癌 5 例；肝轉(zhuǎn)移部位：左側(cè)單葉 4 例，右側(cè)單葉 11 例，雙葉 17 例；轉(zhuǎn)移灶數(shù)量：單個 6 例，多個 26 例。對照組對應(yīng)患者男女比例，年齡 36 70 歲，平均歲，病程 7 40 個月，平均個月；原發(fā)腫瘤大?。盒∮?2 cm 為 15 例， 2 5 cm為 32 例，大于 5 cm 為 67 例；浸潤深度： T2 66 例， T3 34例， T4 14 例；分化程度：低分化腺癌 63 例，中分化腺癌 39 例

6、，高分化腺癌 12 例。兩組患者性別、年齡、病程及浸潤深度等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。1.2 納入及排除標準納入標準：診斷明確且臨床病歷資料完整者；經(jīng)CT、MRI 或術(shù)中探查切除標本病理檢查確診者；患者年齡 30 70歲者；患者及其家屬對本研究知情并同意且簽署知情同意書者。排除標準：合并其他類型腫瘤者；合并其他嚴重疾病或嚴重并發(fā)癥者；惡性腫瘤既往病史者；其他相關(guān)禁忌者。1.3 方法1.3.1 主要試劑D44 與 CD166單抗；聚合物輔助劑； 二抗 CD44/CD166 試劑盒；免疫組化SP 染色試劑盒；標記抗山羊辣根酶IgG 多聚體；小牛血清； PBS 緩沖液； DAB 試劑

7、盒。1.3.2實驗方法對所有標本進行厚 4 m連續(xù)兩張切片，并進行載玻片平鋪，65 條件下過夜處理。根據(jù)免疫組化SP 染色試劑盒操作說明采用SP 免疫組化染色法分別對D44與 CD166 進行檢測， 采用二甲苯進行脫蠟處理后， 采用酒精進行梯度脫水，蒸餾水沖洗完成后采用PBS 浸泡 5 min 。于高壓下采用枸櫞酸緩沖液進行抗原修復(fù)，高壓鍋噴氣3 min ，完成后室溫下進行冷卻。室溫下采用百分之三H2O2 孵育 10min ，PBS 液振蕩清洗 3 min ，將 CD44/CD166 羊抗人抗體采用 1 150 的比例進行滴定， 37 條件下孵育 2 h，完成后PBS 沖洗 2 min ，完成后滴加聚合物輔助劑，于 37 條件下孵育20 min 后 PBS 沖洗 2 min ，完成后進行標記抗山羊辣根酶 IgG 多聚體滴加， 37 條件下孵育20 min ，再進行PBS沖洗 2 min 沖洗，完成后進行DAB 顯色，顯微鏡下控制染色程度，完成后流水沖洗10 min ，蘇木素復(fù)染2 min 后予以鹽酸酒精進行分化， 流水沖洗 10 min 返藍。最后酒精梯