分子生物學實驗操作方法與技巧

1、本課程的特色本課程的特色 1、本門課專注于分子生物學基本操作方法 的操作技巧研究，力求提供最簡單、最快 速、最可靠的分子生物學操作方法； 2、完全公開，沒有校內校外、專業(yè)的限 制，自2005年開課以來，始終保持著很高的 報名人數(shù)； 3、根據(jù)個人多年從事分子生物學實驗的經(jīng)驗, 講述很 多分子生物學常規(guī)實驗的具體操作要點,試劑和儀 器的品牌與選擇。實用性高，即學即用；注重細 節(jié)，避免不必要的花費、實驗彎路和失??；方法注 重簡單、快速，重復性高；研究生從事分子生物學研究工作的原則與方法；研究生從事分子生物學研究工作的原則與方法；1質粒的提取技術；質粒的提取技術；3DNADNA和和RNARNA提取方法

2、；提取方法；4酶切與連接；酶切與連接；5新生在實驗室最容易犯的錯誤；新生在實驗室最容易犯的錯誤；2電泳技術；電泳技術；6PCRPCR技術；技術；8SouthernSouthern、NorthernNorthern和和WesternWesternblotblot雜交；雜交；9酶聯(lián)免疫技術（酶聯(lián)免疫技術（ElisaElisa）；）；10分子生物學常用轉化技術；分子生物學常用轉化技術；7文庫的建立與篩選；文庫的建立與篩選；11宏基因組技術；宏基因組技術；13酶的定向進化技術；酶的定向進化技術；14克隆基因的策略；克隆基因的策略；12考試方式考試方式 學分為3分，總學時60。 開卷考試，在學期末將布置

3、一次作業(yè)，根據(jù)作業(yè)的成績（70%）和出席情況（30%）決定總成績。 作業(yè)期限：本學期末或下學期開學后一個星期內交作業(yè)，過期無效。幻燈片發(fā)送方式 選舉一個愿意為大家服務的同學任課程班長，每次上完課后，當次課的幻燈片可以拷貝給課程班長，然后由他（她）負責通過郵件發(fā)送給其他同學。研究生對科研的正確態(tài)度態(tài)度決定一切！我想，我試，我樂！ -北大生科院院長饒毅 饒毅對神經(jīng)發(fā)育研究了二十多年，成就頗高。對于科研，饒毅樂在其中，果蠅和小鼠是他的寶貝。最近幾年，他用果蠅和小鼠研究社會行為的分子生物學基礎，比如研究果蠅的打架斗毆、求偶失戀。研究生論文設計的三要素研究生論文設計的三要素 1 1、實驗對象實驗對象。實

4、驗所用的材料即為實驗對象。如用小鼠做實驗，小鼠就是本次實驗的實驗對象，或稱為受試對象。實驗對象選擇的合適與否直接關系到實驗實施的難度，以及別人對實驗新穎性和創(chuàng)新性的評價。實驗對象選擇的合適與否直接關系到實驗實施的難度，以及別人對實驗新穎性和創(chuàng)新性的評價。一個完整的實驗設計中所需實驗材料的總數(shù)稱為樣本含量。最好根據(jù)特定的設計類型估計出較合適的樣本含量。樣本過大或過小都有弊端。研究生論文設計的三要素研究生論文設計的三要素 2 2、 實驗因素。實驗因素。所有影響實驗結果的條件都稱為影響因素，實驗研究的目的不同，對實驗的要求也不同。影響因素有客觀與主觀，主要與次要因素之分。研究者希望通過研究設計進行有

5、計劃的安排，從而能夠科學地考察其作用大小的因素稱為實驗因素（如藥物的種類、劑量、濃度、作用時間等）；對評價實驗因素作用大小有一定干擾性且研究者并不想考察的因素稱為區(qū)組因素或稱重要的非實驗因素（如動物的窩別、體重等）；其他未加控制的許多因素的綜合作用統(tǒng)稱為實驗誤差。最好通最好通過一些統(tǒng)計學方法和預實驗，初步篩選實驗因素并確定取哪些過一些統(tǒng)計學方法和預實驗，初步篩選實驗因素并確定取哪些水平較合適，以免實驗設計過于復雜，實驗難以完成。水平較合適，以免實驗設計過于復雜，實驗難以完成。 研究生論文設計的三要素研究生論文設計的三要素 3 3、 實驗效應實驗效應。實驗因素取不同水平時在實驗單位上所產生的反應

6、稱為實驗效應。實驗效應是反映實驗因素作用強弱的標志，它必須通過具體的指標來體現(xiàn)。要結合專業(yè)知識，盡可能多地選用客觀性強的指標，在儀器和試劑允許的條件下，應盡可能多選用特異性強、靈敏度高、準確可靠應盡可能多選用特異性強、靈敏度高、準確可靠的客觀指標。的客觀指標。對一些半客觀（比如讀pH試紙上的數(shù)值）或主觀指標（對一些定性指標的判斷上），一定要事先規(guī)定讀取數(shù)值的嚴格標準，只有這樣才能準確地分析自己的實驗結果，從而也大大提高了自己實驗結果的可信度。另外，研究中盡量研究中盡量使用一些最成熟的技術，而不要一味追求高新技使用一些最成熟的技術，而不要一味追求高新技術術，也是增加實驗效應（實驗成功率），降低風

7、險的一個方法。實驗設計的六原則實驗設計的六原則1、隨機原則隨機原則：即運用“隨機數(shù)字表”實現(xiàn)隨機化；運用“隨機排列表”實現(xiàn)隨機化；運用計算機產生“偽隨機數(shù)”實現(xiàn)隨機化。 盡量運用統(tǒng)計學盡量運用統(tǒng)計學知識來設計自己的實驗（如正交設計，均勻設計法等知識來設計自己的實驗（如正交設計，均勻設計法等），減少外在因素和人為因素的干擾。 2、對照原則對照原則：空白對照組的設立只有通過對照的設立我們才能清楚地只有通過對照的設立我們才能清楚地看出實驗因素在當中所起的作用看出實驗因素在當中所起的作用。當某些處理本身夾雜著重要的非處理因素時，還需設立僅含該非處理因素的實驗組為實驗對照組；（對照就象電泳實驗的分子量m

8、arker一樣重要?。?、重復原則重復原則：所謂重復原則，就是在相同實驗條件下必須做多次獨立重復實驗。一般認為重復一般認為重復5 5次以上的實驗才具有較高的可信度。次以上的實驗才具有較高的可信度。實驗設計的六原則實驗設計的六原則4、平衡原則平衡原則：一個實驗設計方案的均衡性好壞，關系到實驗研 究的成敗。應充分發(fā)揮具有各種知識結構和背景的人的應充分發(fā)揮具有各種知識結構和背景的人的作作 用用， 群策群力，方可有效地提高實驗設計方案的均衡性。 在實驗設計的過程中要注意時間上的分配要注意時間上的分配，只有在時間上分 配好了，才不會出現(xiàn)一段時間特別忙而一段時間特別閑的情 況。5、彈性原則：彈性原則：所謂

9、空格，指的是在時間分配圖上留有空缺時間分配圖上留有空缺。適當?shù)目杖笔欠浅１匾模挥羞@樣才能富有彈性的實施實驗計劃，并不斷地調整好自己的實驗進度調整好自己的實驗進度。6、最經(jīng)濟原則最經(jīng)濟原則：不論什么實驗，都有它的最優(yōu)選擇方案最優(yōu)選擇方案，這包括在資金的使用上，也包括人力時間的損耗上，必要時可以預測一下自己實驗的產出和投入的比值，這個比值越大越好，當然是以你所擁有的實驗條件你所擁有的實驗條件作基礎的。 （量力而為，看米下鍋！）實驗計劃、實驗結果與小結實驗計劃、實驗結果與小結- -引自鄒承魯?shù)囊脏u承魯?shù)奈业目茖W之路我的科學之路 一計劃 二實驗工作 三實驗記錄 四實驗結果 五實驗小結一計劃一計劃

10、 在開始工作前，制定一個現(xiàn)實可行的研究計劃是必要的。除課題計劃外，日常工作也要有計劃，日有日計劃日常工作也要有計劃，日有日計劃，周有周計劃周有周計劃，并根據(jù)計劃準備必要的實驗條件，安排進行工作。一個值得推薦的做法是把日計劃和周計劃記載一個值得推薦的做法是把日計劃和周計劃記載在實驗記錄本上，每日最后檢查日計劃完成情況，制定次日計劃，每周最在實驗記錄本上，每日最后檢查日計劃完成情況，制定次日計劃，每周最后檢查周計劃完成情況后檢查周計劃完成情況，制定次周計劃，由于基礎研究實驗結果有一定的不可預見性。因此，隨時根據(jù)實驗結果修訂計劃也是必要的。除自己的實驗結果有一定的不可預見性之外，現(xiàn)代科學的發(fā)展很快，

11、瞬息萬變，同樣有一定程度上的不可預見性。必需隨時根據(jù)文獻上的最新動態(tài)，修改自己必需隨時根據(jù)文獻上的最新動態(tài)，修改自己的課題計劃。的課題計劃。從小的方面來說，文獻上有更好的實驗方法發(fā)表，可以代替原來采用的方法。從較大的方面來說，有時本來準備作的工作，文獻上已文獻上已經(jīng)有人發(fā)表報道，或者新的發(fā)展使得原來認為重要的問題喪失了其重要性，經(jīng)有人發(fā)表報道，或者新的發(fā)展使得原來認為重要的問題喪失了其重要性，不得不完全放棄原來計劃或從根本上予以修改。不得不完全放棄原來計劃或從根本上予以修改。二實驗工作二實驗工作實驗是一切實驗科學的根本，所有結論都必需建立在堅實的實驗結果之上，因此取得可靠的實驗結果是怎樣強調也

12、不會過分的。實驗結果實驗結果最主要的是可重復性，不僅事后自己能夠重復，別人在同樣最主要的是可重復性，不僅事后自己能夠重復，別人在同樣實驗條件下也能夠重復。實驗條件下也能夠重復。這樣不僅自己有把握，別人也會相信。實驗結果的可重復性體現(xiàn)在每次都能得到同樣的結果，在一場足球比賽中3:2 就是決定性的勝利，但在實驗結果上在實驗結果上3:23:2的結果只能認為是的結果只能認為是失敗。比較滿意的勝利至少應該是失敗。比較滿意的勝利至少應該是3:03:0，在一定條件下2:0 是可以接受的，但1:0就不能認為是可以接受的結果。實驗結果的可重復性首先建立在實驗材料，其次是實驗條件的嚴格性和可重復性上。再者實驗環(huán)境

13、的清潔，工作程序的嚴格有序也是實驗結果可重復性的重要因素。在工作開始之前，對這些問題給以充分的注意，花費一些時間，不僅是絕對必要的，總體來說，在時間上也是經(jīng)濟的，正確的結論只能建立在可重復的實驗結果上，實驗結果出于意外并不可怕，從負面結實驗結果出于意外并不可怕，從負面結果有時同樣可以得出有價值的結論?？膳碌氖菍嶒灲Y果不能果有時同樣可以得出有價值的結論?？膳碌氖菍嶒灲Y果不能重復重復，如果多次實驗，而每次都得到不同結果，每次都得到不同結果，只能表示整個工作完全得不到有價值的結果，那才是最大的時間浪費。三實驗記錄三實驗記錄實驗記錄是研究工作的一項極其重要的內容，是工作的基礎。實驗記錄是研究工作的一項

14、極其重要的內容，是工作的基礎。而多數(shù)青年人對此常常不夠重視。我曾經(jīng)有一個學生，有吸煙的習慣，一次在去儀器室做實驗時，發(fā)現(xiàn)忘記帶記錄本，就把身上的煙盒拆了，把實驗結果記錄記在煙合的背面，隨后就把這張紙弄丟了，恰恰這一實驗用了一個寶貴實驗材料，因此重復這一實驗十分費力。當然，現(xiàn)在的儀器都與計算機連接，結果都存儲在計算機內，但隨手抓一個紙片記錄實驗結果是絕對隨手抓一個紙片記錄實驗結果是絕對不能允許的壞習慣不能允許的壞習慣。四實驗結果四實驗結果現(xiàn)代科學在很大程度上依賴儀器，特別是現(xiàn)代儀器自動化程度很高，進樣之后，啟動程序自動取得數(shù)據(jù)并自動存儲于計算機之中。但是千萬不能忘記，任何儀器都不是萬能的，所有儀

15、器都有一定的條件限制，必需充分認識到，超出儀器所能允許的條件之外，儀器完全可能給出一個甚至一組完全不可靠的數(shù)據(jù)。因此在使用儀器之前務須全面了解充分了解儀器的性能及適用范圍，才能得到可信的結果。在我多年的經(jīng)驗中，有一項值得特別在此提出，就是使用儀器必需事先仔細閱讀使用儀器必需事先仔細閱讀儀器說明書。進行實驗必需仔細閱讀原始文獻中的實驗方法，向做過類似儀器說明書。進行實驗必需仔細閱讀原始文獻中的實驗方法，向做過類似實驗的師兄姐們請教是必要的，但決不能代替自己閱讀文獻或說明書。實驗的師兄姐們請教是必要的，但決不能代替自己閱讀文獻或說明書。我們在幼兒園時代都玩過傳話游戲。老師給第一個小朋友說一句話，第

16、一個小朋友把話傳給第二個，第二個再傳給第三個。這句話傳到最后，可以和老師最早給第一個小朋友說的話，完全不同。這就說明根據(jù)師兄姐們口頭傳授的經(jīng)驗進行工作有多么危險。有時實驗方法的錯誤對一項工作可以是致命的錯誤，向你傳授經(jīng)驗的人是不會代你負責的。與此有關的一條經(jīng)驗與此有關的一條經(jīng)驗是，論文中的引用文獻必需自己核對過，轉引自其他文獻同樣可能是，論文中的引用文獻必需自己核對過，轉引自其他文獻同樣可能發(fā)生錯誤。發(fā)生錯誤。和實驗結果的可重復性同樣重要而又密切相關的，是實驗結果的和實驗結果的可重復性同樣重要而又密切相關的，是實驗結果的精確度。精確度。對不同實驗結果的精確度有不同的要求，要求過高是一種浪費，給

17、人以殺雞焉用牛刀之譏，過低則不能滿足需要。給出數(shù)據(jù)，也有類似問題。每一項測定都有一定的精確度，如果一項測定的精確度為三位有效數(shù)字，則給出三位以上數(shù)字不僅是完全沒有意義的，并且只能說明作者完全缺乏有效數(shù)字的概念，這不僅適用于直接獲得的初始數(shù)據(jù)，對從初始數(shù)據(jù)得出的次級數(shù)據(jù)也同樣適用。例如，對一組精確度為三位有效數(shù)字的測定結果予以平均，給出四位以上的平均數(shù)計算結果，也只能表明作者的無知。五實驗小結五實驗小結不斷進行小結與不斷完善。不斷進行小結與不斷完善。在實驗記錄本上記載每周計劃的目的之一就是在周末進行檢查和小結，并根據(jù)結果制定下周計劃。我的導師教導我在工作順利時要注意隨時在工作順利時要注意隨時進行

18、階段性小結，特別是在工作順利時，新的實驗數(shù)據(jù)不斷涌現(xiàn)，進行階段性小結，特別是在工作順利時，新的實驗數(shù)據(jù)不斷涌現(xiàn)，常常會使人忙于收集大量實驗數(shù)據(jù)，而忽略檢查實驗數(shù)據(jù)的可靠性以及對實驗數(shù)據(jù)所說明的問題深入思考，或者說是只見樹木，不見森林。因而收集了大量無用的、錯誤的或意義不大的實驗數(shù)據(jù)，反而忽略了真正關鍵的數(shù)據(jù)，包括必不可少的對照實驗。這些必不可少的對照實驗，當時做當時做是非常方便的，而事后補做往往費時費力。是非常方便的，而事后補做往往費時費力。隨時進行階段性小結不僅可以隨時發(fā)現(xiàn)問題隨時予以解決，還可以隨時注意不僅要深入問題，重視每一個細節(jié)，還要不斷總覽全局，才不致迷失方向，這就是我國古人說做學問

19、不僅要入乎其中還要出乎其外的意思。隨時進行階段性小結的另一目的就是對所得的初步結論隨時予以隨時進行階段性小結的另一目的就是對所得的初步結論隨時予以檢查，每一項實驗結果都可能有多種不同的解釋，特別是在實驗出現(xiàn)檢查，每一項實驗結果都可能有多種不同的解釋，特別是在實驗出現(xiàn)重要結果時，最容易犯的錯誤就是輕率得出結論，要有自以為非的勇重要結果時，最容易犯的錯誤就是輕率得出結論，要有自以為非的勇氣。氣。我一生犯過多次這樣的錯誤。五十年代，王應睞教授、汪靜英同志和我在國際上首先純化了琥珀酸脫氫酶，并發(fā)現(xiàn)它有一個與蛋白部分共價連接含有核黃素的輔基。當時已知的兩種核黃素輔基，核黃素單核苷酸和核黃素腺嘌呤二核苷酸

20、，都是與蛋白部分非共價結合，與蛋白部分共價連接含的核黃素輔基，文獻上尚未見有報道。因此我想，我們很可能發(fā)現(xiàn)了一種新型的核黃素輔基，經(jīng)過把蛋白部分水解進行鑒定，我們觀察到這一輔基含有兩種堿基，一種是核黃素，而另一種在雙向紙層析上的位置表明它不是腺嘌呤而是次黃嘌呤，紫外吸收光譜也與次黃嘌呤相同。這導致我輕率得出結論認為我們獲得了一種全新的，文獻中從未報道過的與蛋白部分共價連接的輔基，核黃素次黃呤嘌呤二核苷酸。但在結構上次黃嘌呤僅比腺嘌呤少一個氨基，為此王應睞教授建議檢查在我們的酶制劑中是否會含有一種從腺嘌呤分子上水解除去氨基的酶，雖然我們的酶經(jīng)過純化，含有雜酶的可能性不大，但我們仍然進行了檢查，結

21、果酶制劑中果然含有腺嘌呤脫氨酶作為雜質，輔基雖然與蛋白部分共價連接，但仍然是核黃素腺嘌呤二核苷酸，次黃呤嘌是在酶純化過程中腺嘌呤的水解產物。這就避免了在論文發(fā)表時出現(xiàn)重大錯誤。五實驗小結五實驗小結 參加各種水平的學術會議也是不斷進行小結的一種方法。參加各種水平的學術會議也是不斷進行小結的一種方法。工作報告目的在于交流和隨時聽取不同意見，自己容易忽視的問題別人有時可以一眼發(fā)現(xiàn)。所謂當局者迷，旁觀者清在科學上也是完全正確的。參加國際學術會議是考驗自己工作的極好機會。特別是小型會議，在國外與自己工作有關的實驗室作學術報告，由于熟悉自己工作領域的同行較多，討論比較充分，更由于熟悉自己工作領域的同行較多

22、，討論比較充分，更容易發(fā)現(xiàn)自己工作中的問題。容易發(fā)現(xiàn)自己工作中的問題。一個系列性工作，在多次報告，經(jīng)過多次討論的考驗后，才會逐漸趨向成熟，得出可靠的結論。最近國際生物化學與分子生物學聯(lián)合會發(fā)表的分子水平生命科學博士標準一書中強調參加學術活動和做學術報告是博士學位訓練的一個重要組成部分，我對此深有同感。做分子生物學實驗失敗的最常見原因做分子生物學實驗失敗的最常見原因 (一)心理素質問題； (二)操作問題； (三)試劑問題 ； (四)背景知識問題； (五)安全問題 。( (一一) )心理素質問題心理素質問題 做實驗實際上也是一種人的活動，所以個人的心理素質對實驗是有影響的，一般來講，平常心態(tài)穩(wěn)定、

23、習慣良好的人，實驗的成功率要高平常心態(tài)穩(wěn)定、習慣良好的人，實驗的成功率要高，反之則低些。下面例舉的是實驗中遇到的實驗人員心理問題。1 1、不能正確對待實驗、不能正確對待實驗 分子生物學分子生物學是一門年輕的學科，從開始創(chuàng)立到如今，才短短的從開始創(chuàng)立到如今，才短短的4040余余年。年。由于它的應用十分廣泛，所以發(fā)展特別快，已開始形成了一套完整而成熟的基礎理論和實驗體系。分子生物學涉及的知識領域廣泛，許多學科的新進展都很快與它聯(lián)系起來，故它具有一定的神秘性具有一定的神秘性，所以還沒有進分子生物學這個門的人，都有一些畏懼心理。有一些畏懼心理。實際上分子生物學的基礎理論本身還是比較簡明具體，同時它的實

24、驗操作也都有專門的書籍詳細介紹 (如分子克隆)，讀上幾本基礎書，再到有經(jīng)驗的實驗室去實踐，在較短的時間內是可以入門的。另一方面，有些己具有部分分子生物學知識的人，從各個公司的產品介紹書、專業(yè)文獻中看到，很多實驗的實驗步驟經(jīng)過前人的不斷改迸進，變得十分的簡便，有些大的實驗在幾天內即可完成，便認為實驗簡單，產生輕視心認為實驗簡單，產生輕視心理，這種心理同樣也是有害的。理，這種心理同樣也是有害的。因為實驗的操作是精細而微量的，實驗的操作是精細而微量的，本身中間步驟多且用直觀方法難以檢測，實驗中的每一種試劑，本身中間步驟多且用直觀方法難以檢測，實驗中的每一種試劑，每一個步驟出錯都可能是致命的，可能導致

25、實驗完全失敗每一個步驟出錯都可能是致命的，可能導致實驗完全失敗，所以分子生物學實驗是不能完全按實驗流程來計算時間的。例如在本實驗室做基因拼接，按標準實驗程序，合成完寡聚核苷酸片段后只需10天即可完成拼接、克隆及測序鑒定，但在實際中，還沒有人能在10天內做完。由于各種各樣的原因(包括試劑、操作及個人心理素質等)，平均要2個月左右才能完成這樣一個工作。所以，輕視心理也是必須糾正的。總之，對待分子對待分子生物學實驗生物學實驗，引用偉人毛澤東的一句話在戰(zhàn)略上藐視它，在戰(zhàn)術上在戰(zhàn)略上藐視它，在戰(zhàn)術上重視它重視它才是正確的態(tài)度。 分子生物學實驗面前人人平等，沒有一本、二本和三本的區(qū)別！分子生物學實驗面前人

26、人平等，沒有一本、二本和三本的區(qū)別！2 2、使用試劑時缺乏微量概念、使用試劑時缺乏微量概念 在分子生物學實驗中，試劑的用量往往很少在分子生物學實驗中，試劑的用量往往很少，液體常常可用到1微升，而普通的一滴水就有20-100微升;固體物質可用到微克甚至納克級，這是平常肉眼看不見的，所以剛剛接觸分子生物學實驗的人，總是擔心要取的東剛剛接觸分子生物學實驗的人，總是擔心要取的東西能否取到，準不準確，操作的樣品是不是會丟失?？偸羌哟笥昧课髂芊袢〉剑瑴什粶蚀_，操作的樣品是不是會丟失?？偸羌哟笥昧浚J為多總比少好，實際上這些顧慮是多余的。在分子生物學實驗中，一般都有專門的儀器設備檢測和觀察樣品，有一整套方法

27、保證取樣的正確。許多樣品的量很少，肉眼看不見，而肉眼看不見通常意味著樣品純度好，不帶雜質，超量使用酶等試劑反而會干擾正確的結果。所以實驗人員必須在心理實驗人員必須在心理上逐漸適應用這些微量概念。上逐漸適應用這些微量概念。3 3、粗心大意、粗心大意 在基因工程實驗中，由于粗心大意造成的錯誤可說是千奇萬怪，在每一個實驗中幾乎都可以舉出實例。在一個課題的研究中，可能要用到一系列的實驗，每一個實驗中又包含幾個小實驗，小實驗中又有許多具體的步驟，每一個步驟中又用到許多試劑，在這些過程中因為粗心大意都有出錯的可能，產生的后果小則重做某一步驟，大則整個課題必須重新開頭。主要表主要表現(xiàn)為試劑配制錯誤現(xiàn)為試劑配

28、制錯誤; ;樣品取錯樣品取錯; ;實驗順序顛倒實驗順序顛倒; ;樣品混淆，樣品意外丟失樣品混淆，樣品意外丟失; ;加錯試劑加錯試劑; ;看錯實驗條件等等不一而足?？村e實驗條件等等不一而足。例如某人大量制備DNA，所有的細菌培養(yǎng)、擴增及堿法抽提、分步純化、乙醇沉淀DNA都己做完，最后離心收集DNA時，不小心將離心管碰翻到地上，樣品全部丟失，一周成果全部損失。我們建議實驗人員要克服粗心大意的不良習慣，嚴格細心地做每一步操作，以保證整體實驗的順利進行。4 4、缺乏整體實驗的概念、缺乏整體實驗的概念許多實驗人員在剛開始一項新的實驗時，對整個實驗過程缺少全面的了解，許多實驗人員在剛開始一項新的實驗時，對

29、整個實驗過程缺少全面的了解，對實驗需要多少時間?要用何種試劑?用量多少?要用到何種實驗材料?何種實驗設備等都沒有概念，往往實驗做到中途，再急匆匆來尋找缺少的東西實驗做到中途，再急匆匆來尋找缺少的東西。分子生物學實驗中，所用到的試劑、藥品通常都價錢昂貴，一般實驗室不可能儲備得種類齊全而又充足，另外許多試劑還依賴進口，購買周期長，這就會迫使實驗中途停止，致使實驗效率嚴重降低，有的實驗不能中途停頓，就可能使整個實驗全部失敗。我們建議實驗人員在做分子生物學實驗建議實驗人員在做分子生物學實驗之前，應在基礎知識、實驗方法、實驗材料及實驗試劑上有充分的準備，之前，應在基礎知識、實驗方法、實驗材料及實驗試劑上

30、有充分的準備，在實驗時間上做好充分的安排，以保證實驗的順利開展。在實驗時間上做好充分的安排，以保證實驗的順利開展。5 5、僥幸心理、僥幸心理 僥幸心理是分子生物學實驗中致使實驗人員犯錯誤最多的原因，想僥幸心理是分子生物學實驗中致使實驗人員犯錯誤最多的原因，想省時間、省步驟及因對前一步實驗盲目自信是產生這種心理的主要省時間、省步驟及因對前一步實驗盲目自信是產生這種心理的主要原因。原因。因為分子生物學實驗方法是在依據(jù)分子生物學基礎理論的基礎上，輔以前人大量的實驗經(jīng)驗而建立的，實驗條件的細小改變，不一定會使實驗失敗，但幾個步驟的細小改變，累積起來必出大錯，做分子生物學實做分子生物學實驗每個步驟的結果

31、，在能夠檢測的情況下都應檢測，否則不應進入驗每個步驟的結果，在能夠檢測的情況下都應檢測，否則不應進入下一步實驗。下一步實驗。由于各種原因，實驗人員經(jīng)常省略檢測這一步，從表面上看省了事、實際上使后面的實驗失去了保證，最后實驗失敗而且連原因都找不出，對重做實驗也無補益。結果是花費更多的時間。還浪費了寶貴的樣品和試劑。例如某人從克隆載體上分離基因，限制性內切酶酶切后沒有檢測是否切動、是否完全，即進入電泳分離基因，電泳完在紫外光下收割基因片段時，才看到載體DNA根本沒有切斷，只好重做。還有的人在前面的情況下，抱一種僥幸心理，認為可能會有少量基因切下，在基因DNA電泳應出現(xiàn)的位置割膠分離，將假想分離到的

32、基因直接進行克隆;，當然這些人的僥幸心理是有基礎的，因為基因DNA分子太少，在EB染色中是看不到的，但這樣做實驗成功的機會甚微，從我們實驗室統(tǒng)計的情況看，花的時間成倍地多?？傊?，僥幸心理是導致實驗失敗最大的原因，是實驗人員最忌諱的事，所有的人都應加以杜絕。我們建議實驗人員充分安排好實驗，嚴格按照每一實驗步驟的要求操作。當實驗中出現(xiàn)沒有把握的情況時，應停止實驗，尋找原因加以克服，或找有經(jīng)驗的同行解決問題，直到有把握再進入下一步實驗。我們之所以在這里一再強調這一點，是因為這方面犯錯誤的人太多太多，有經(jīng)驗的和沒經(jīng)驗的人都不例外。（二（二) )操作問題操作問題在分子生物學實驗中，經(jīng)常要進行微生物學方面

33、、生物化學方面及儀器方面等等的操作，不了解這些操作的要求，也會影響實驗人員的實驗工作，甚至可能使實驗室造成重大損失，所以每個實驗人員進入實驗室時，必須參閱有關的書籍，或請有經(jīng)驗的人員演示說明，方可開展實驗。另外要著重說明的一點是做標簽，由于實驗室做實驗的人員通常都很多，每人自己的樣品較易與他人的樣品混淆，自己的樣品之間太多時也易混淆;許多樣品需要保存的時間較長，到時可能找不到，所以手頭的樣品、試劑應隨手標好。標簽應寫明樣品名稱、日期和配制人姓名，應牢靠、不能模糊。（三（三) )試劑問題試劑問題 在分子生物學實驗中，要用到多種試劑，并且對試劑的要求十分嚴格，主要表現(xiàn)為:1 試劑等級不夠，如應該用

34、分析純分析純的誤用了化學純;2 試劑配制不當，如有的化學試劑化學試劑結晶體，含有水分子含有水分子， 在稱量時沒有扣除它的份額，配制的試劑濃度過低;3 除菌條件不對，某些試劑應過濾除菌過濾除菌，另一些試劑應高溫高壓高溫高壓滅菌滅菌;4 試劑污染試劑污染，如稱量稱量時，取用試劑時，別人污染時都可能造成污染;5 試劑儲存時間過長試劑儲存時間過長，如測序用的丙烯酰胺膠母液，在4條件下只 能存放一個月;6 試劑保存不當試劑保存不當，如有的試劑應保存在-20下，另一些試劑則只能 在室溫下保存。所以實驗人員在配制試劑時，要嚴格按各個特定試 劑的配制要求來操作。( (四四) )背景知識問題背景知識問題第一是對

35、研究課題的背景知識了解不夠。第一是對研究課題的背景知識了解不夠。實驗人員不知道實驗要解決何種問題，怎樣解決問題，不知道采用何種技術路線最有效地解決問題，這一現(xiàn)象是很嚴重的;第二是對具體的實驗原第二是對具體的實驗原理不懂，以至不能正確地分析實驗現(xiàn)象，不能理不懂，以至不能正確地分析實驗現(xiàn)象，不能靈活地解決實驗中遇到的問題。靈活地解決實驗中遇到的問題。我們建議實驗人員盡可能多地占有有關課題的背景資料，詳細地閱讀和理解有關的實驗資料。( (五五) )安全問題安全問題 在分子生物學實驗中，實驗人員經(jīng)常要接觸到一些對人體有害的實驗試劑，在分子生物學實驗中，實驗人員經(jīng)常要接觸到一些對人體有害的實驗試劑，如溴

36、化乙錠、丙烯酰胺、放射性同位素溴化乙錠、丙烯酰胺、放射性同位素等，它們或者可能誘發(fā)癌癥，或者對人神經(jīng)系統(tǒng)產生累積毒害。因此，為了實驗人員的人身安全，每一個人都應嚴格按照實驗安全操作的有關要求進行操作。另一個問題是，實驗室另一個問題是，實驗室經(jīng)常要使用經(jīng)常要使用煤氣、水及電器水及電器，煤氣泄漏導致爆炸或人員中毒死亡，實驗室水龍頭未關，下水道堵塞造成實驗室水災，實驗室人員觸電等時有發(fā)生，所以每一個實驗人員在離開實驗室時都應注意檢查水、電、煤氣，有關用電設備都應按操作說明使用，以防止不必要的人身意外傷亡。分子生物學實驗成功的關鍵分子生物學實驗成功的關鍵穩(wěn)定的心理素質、正確而精準的實驗技術、良好的實驗

37、習慣，是實驗獲得成功的關鍵。！實驗室基本注意事項實驗室基本注意事項 一、新生進入實驗室后必須做好的幾件事情: 1 1、實驗記錄本、實驗記錄本，上面寫清楚日期每天的實驗內容，操作步驟、結果.如 果結果不好，應試著分析并寫出原因以便以后參考。需要拍照的照 片，必須當時拍完，并編好文件日期妥善保存（格式一般是 *.tif）。如果犯了很不應該的錯誤,必須在實驗記錄本上注明,下次 不要再犯同樣的錯誤. 2 2、有自己專用的實驗樣品盒、有自己專用的實驗樣品盒，盒子放在冰箱的固定位置并且在盒子上面 用標簽紙或記號筆標記上自己的名字以查找方便。盒子中的所有樣品 必須都用記號筆標記好，最好在管子頂部和側壁各寫一

38、個標記，以防 記號模糊。 3 3、實驗儀器使用前必須仔細看懂操作方法、實驗儀器使用前必須仔細看懂操作方法，切忌不懂裝懂。儀器用完應 登記登記。 4 4、看分子克隆等經(jīng)典實驗操作手冊中實驗的原理和關鍵步驟、看分子克隆等經(jīng)典實驗操作手冊中實驗的原理和關鍵步驟，提高自己 的理論水平。 5、跟師兄師姐做實驗的時侯，應保持謙虛謹慎，不懂的地方及時請教。 6、認真學習防盜、防水、放電、防爆、防輻射、防污染的安全常識安全常識。 7、接觸濃鹽酸、濃硫酸、苯酚、EB實驗時，必須小心謹慎，防止受防止受傷傷。新生做實驗時最容易犯的錯誤新生做實驗時最容易犯的錯誤1 1、離心機使用常見錯誤：、離心機使用常見錯誤： （1

39、）離心機使用不規(guī)范。 正確操作應該是：首先應該根據(jù)自己的實驗需求選擇合適的離心機和轉子以及離心根據(jù)自己的實驗需求選擇合適的離心機和轉子以及離心管管，使用離心機時的工作轉速不應該超過離心機、轉子以及離心管的最大允許轉速。離離心前注意嚴格平衡樣品心前注意嚴格平衡樣品。安裝轉子和轉子蓋要規(guī)范、準確。離心時要留人看守，發(fā)現(xiàn)離離心時要留人看守，發(fā)現(xiàn)離心機異常應立即關閉離心機。心機異常應立即關閉離心機。離心結束后要安放好轉子，一般要倒扣轉子一般要倒扣轉子（？）。 （2）3個樣品、5個樣品等的平衡問題。 （3）使用常溫離心機時，必須蓋上轉頭的頂蓋必須蓋上轉頭的頂蓋。 （4）使用低溫離心機時，用后應將轉頭拿下

40、來，倒置放好倒置放好。同時將離心機中的冷凝水冷凝水擦干擦干，將離心機的頂蓋打開離心機的頂蓋打開。 （5）使用低溫離心機時，應提前預冷。預冷時應低速空轉使用低溫離心機時，應提前預冷。預冷時應低速空轉，以免損傷電機。離心機不用的時侯，必須及時關閉。制冷時切忌長時間打開頂蓋，以保護電機。制冷時切忌長時間打開頂蓋，以保護電機。2 2、使用移液器有哪些注意事項？、使用移液器有哪些注意事項？ 垂直吸液、慢吸慢放垂直吸液、慢吸慢放；選擇合適的量程范圍，不能超過量程使用；選擇與移液器匹配的槍頭，安裝槍頭時不要用力太猛；移移液器每日用完后，應旋到最大刻度。液器每日用完后，應旋到最大刻度。 移液器是精密儀器，調刻

41、度時要慢慢調調刻度時要慢慢調。 玻璃移液管的吸取要用吸耳球，而不能用口吸。 吸200微升液體，用100200微升移液器還是2001000微升移液器？吸250微升液體，如果要求體積精確度很高，用哪個移液器？3 3、滅菌鍋使用注意事項、滅菌鍋使用注意事項 （1）定期清洗，一般一般1 12 2個月必須清洗一次。個月必須清洗一次。 否則滅菌鍋底部排水處容易染菌。 （2）根據(jù)不同的滅菌條件選擇不同的程序。如 固體、液體滅菌程序，并根據(jù)自己的特殊根據(jù)自己的特殊 要求設定合適的程序。如要求設定合適的程序。如116116度滅菌。度滅菌。 （3）必須等滅菌鍋內溫度降到必須等滅菌鍋內溫度降到9090度以下才可以打

42、度以下才可以打開開 滅菌鍋。滅菌鍋。 （4）滅菌鍋內滅菌物品不能塞得太滿滅菌鍋內滅菌物品不能塞得太滿，以免影響蒸 汽流通，影響滅菌效果。4 4、電泳實驗容易犯的錯誤、電泳實驗容易犯的錯誤（1）電泳結束后膠拿走，不關電泳儀。電泳結束后膠拿走，不關電泳儀。（2）配膠時侯用水配配膠時侯用水配，而沒有用電泳緩沖液（TAE、TBE等）配。（3）膠板、梳子到處放膠板、梳子到處放。膠板梳子上有EB等有毒物質，必須放在固定 地方。（4）跑完電泳，膠長期留在膠板上，不聞不問；另外每次電泳過后， 不要的膠必須立刻丟棄不要的膠必須立刻丟棄，防止膠干在上面；膠板用過后需要清膠板用過后需要清 洗，以防止污染。洗，以防止

43、污染。（5）EBEB的污染的污染。很多新生為了保護自己，電泳的時侯戴著手套，然后 開抽屜、開門或透射儀時，仍戴著手套。導致EB污染到很多地方。（6）膠拍照的時侯必須在照像儀上貼一張保鮮膜，防止污染和弄花儀器面板。 同時不能戴著手套操作儀器和電腦鍵盤不能戴著手套操作儀器和電腦鍵盤。（7）剛學倒膠的時侯，很容易發(fā)生膠的泄漏，造成生膠的泄漏，造成EBEB的污染的污染。為了防止這種情 況，可用雙層透明膠帶封嚴膠板可用雙層透明膠帶封嚴膠板。（8）每次熔化膠后再加EB，不要預先把EB加到膠中。當然也可以電泳完后在用 EB液浸泡，但EBEB染色液一定要放好染色液一定要放好。5 5、廢棄溴化乙錠、廢棄溴化乙錠

44、EBEB凈化和處理方法凈化和處理方法（1） 嚴禁隨便丟棄。嚴禁隨便丟棄。因為EB是強致癌性，而且易揮發(fā)，揮發(fā)至空氣 中，危害很大。（2） 廢廢EBEB溶液的處理方法溶液的處理方法：對于EB含量大于0.5mg/ml的溶液，可如下處理： a.將EB溶液用水稀釋至濃度低于0.5mg/ml； b.加入一倍體積的0.5mol/LKMnO4，混勻，再加入等量的 2.5mol/LHCl，混勻，置室溫數(shù)小時； c.加入一倍體積的2.5mol/LNaOH，混勻并廢棄。 EB含量小于0.5mg/ml的溶液可如下處理： a.按1mg/ml的量加入活性炭，不時輕搖混勻，室溫放置1小時； b.用濾紙過濾并將活性碳與濾紙

45、密封后丟棄。 (3) 廢廢EBEB接觸物接觸物，如抹布，槍頭。 一般回收至黑色的玻璃瓶中，定期進行焚燒處理。定期進行焚燒處理。6 6、使用恒溫水浴槽容易犯的錯誤、使用恒溫水浴槽容易犯的錯誤（1）水浴槽高溫過夜高溫過夜，比如65度。（2）沒有樣品時儀器長期不關閉沒有樣品時儀器長期不關閉。（3）水浴槽里面添加自來水水浴槽里面添加自來水（產生水垢、 腐蝕）。應該加蒸餾水。（4）使用低溫循環(huán)水?。?6度連接實驗）時 樣品管一定要在浮板上固定好樣品管一定要在浮板上固定好，以免水 流循環(huán)時把樣品沖走。7 7、使用超低溫冰箱時容易犯的錯誤、使用超低溫冰箱時容易犯的錯誤（1）一般情況下，酶不要放在超低溫冰箱中

46、酶不要放在超低溫冰箱中，會影 響活性，放在-20C冰箱即可。（2）超低溫冰箱主要用來保存菌種保存菌種和某些容易降解某些容易降解 或變質的樣品或變質的樣品。（3）不帶加厚手套找樣品時很容易凍傷不帶加厚手套找樣品時很容易凍傷。（4）樣品盒上沒有名字樣品盒上沒有名字（要用中文），很難查 找；（3）樣品盒亂放樣品盒亂放，放到別人的空間；（4）尋找樣品時，長時間打開超低溫冰箱尋找樣品時，長時間打開超低溫冰箱，使得冰 箱很容易損壞。8 8、使用（電子）天平稱量樣品時、使用（電子）天平稱量樣品時易犯的錯誤易犯的錯誤（1）天平?jīng)]有調水平調水平；（2）天平超過了量程超過了量程；（3）直接將樣品放在天平上稱，沒有

47、使用稱使用稱 量皿量皿或稱量管稱量管；（4）稱量化學試劑時，沒有做到一個樣品一做到一個樣品一 個藥匙個藥匙，造成試劑的交叉污染；（5）稱量普通的化學試劑，用高精密度的電普通的化學試劑，用高精密度的電 子天平子天平而不用普通的電子天平；9 9、使用（玻璃探頭）、使用（玻璃探頭）pHpH計時計時易犯的錯誤易犯的錯誤（1）長時間不校正長時間不校正；（2）標準液沒有用容量瓶配，或者配標準液標準液沒有用容量瓶配，或者配標準液 的化學試劑的純度不夠的化學試劑的純度不夠（優(yōu)級純、分析 純、化學純、普通試劑）；（3）探頭長期保存，應浸沒在探頭長期保存，應浸沒在pH7.0pH7.0的保護的保護 緩沖液中緩沖液中

48、；（4）過一段時間，探頭中應該補加一些補加一些KClKCl 緩沖液緩沖液。1010、使用烘箱時的常犯錯誤、使用烘箱時的常犯錯誤（1）高溫（超過100度）烘干過夜；（2）沒有烘干物品時長期開著；（3）有些物品（tips、離心管）不宜高溫烘干，需特別注意；1111、使用、使用PCRPCR儀最易犯的錯誤儀最易犯的錯誤（1）必須學會自己編程序必須學會自己編程序，然后設定自己的程序號設定自己的程序號 碼碼，而不要總是用別人的程序，更不要隨意 修改別人的程序；（2）有的有的PCRPCR儀要加礦物油，有的不用加儀要加礦物油，有的不用加，必須 搞清楚；（3）PCR儀器可以過夜反應，但如果過夜最后一如果過夜最后

49、一 步的溫度應設定在步的溫度應設定在1212度而不是度而不是4 4度度，長時間的 4度會嚴重影響PCR儀的壽命。（4）嚴禁用嚴禁用PCRPCR儀來進行酶切或連接反應儀來進行酶切或連接反應?。?）PCRPCR管子一定要蓋嚴管子一定要蓋嚴，防止樣品蒸發(fā)！1212、使用超凈臺容易犯的錯誤、使用超凈臺容易犯的錯誤（1）超凈臺中并不是絕對無菌超凈臺中并不是絕對無菌，所以在里面進行接種的時侯，仍然要用仍然要用 酒精燈酒精燈，并小心操作；（2）涂布細菌時涂布細菌時玻璃棒用酒精消毒時經(jīng)常容易引起放在平皿中的酒精燃酒精燃 燒燒，此時不要驚慌，只需要迅速用一個平板蓋住平皿迅速用一個平板蓋住平皿，酒精在接觸 不到空

50、氣后會立刻熄滅。（3）每次操作完，應把自己的物品從超凈臺中拿走。除非必要，超凈臺除非必要，超凈臺 不要堆積物品不要堆積物品。另外，每次操作完后，要用清水和酒精清潔臺面清潔臺面。（4）超凈臺中的過濾層應定期取出清潔后再放入過濾層應定期取出清潔后再放入，以免堵塞和增加染菌 機會。（5）不用的時侯，超凈臺應關燈，并保持密封，防止雜菌進入。（6）一般半小時或1小時已足夠滅菌，嚴禁超凈臺長時間紫外消毒嚴禁超凈臺長時間紫外消毒，以 增加燈管的壽命，并減少臭氧的產生。1313、同位素操作時容易犯的錯誤、同位素操作時容易犯的錯誤（1）使用同位素前，沒有進行過同位素安全培訓；（2）進入同位素操作室后，沒有對室內

51、（操作臺、地面等）的同位素情況進行檢測；（3）操作同位素時沒有帶防護裝備（眼睛、頭盔、實驗服等）。（4）試驗完后沒有清理臺面，并對環(huán)境進行同位素檢測；（5）放射性廢棄物沒有放入同位素廢物桶中；（6）操作應盡可能快速，減少在同位素室中的操作時間；（7）經(jīng)常進行同位素操作者，應定期進行身體檢查。文庫的建立與篩選；文庫的建立與篩選；11宏基因組技術；宏基因組技術；13酶的定向進化技術；酶的定向進化技術；14克隆基因的策略；克隆基因的策略；12文庫的建立與篩選；文庫的建立與篩選；11宏基因組技術；宏基因組技術；13酶的定向進化技術；酶的定向進化技術；14克隆基因的策略；克隆基因的策略；12實驗設計的六

52、原則實驗設計的六原則4、平衡原則平衡原則：一個實驗設計方案的均衡性好壞，關系到實驗研 究的成敗。應充分發(fā)揮具有各種知識結構和背景的人的應充分發(fā)揮具有各種知識結構和背景的人的作作 用用， 群策群力，方可有效地提高實驗設計方案的均衡性。 在實驗設計的過程中要注意時間上的分配要注意時間上的分配，只有在時間上分 配好了，才不會出現(xiàn)一段時間特別忙而一段時間特別閑的情 況。5、彈性原則：彈性原則：所謂空格，指的是在時間分配圖上留有空缺時間分配圖上留有空缺。適當?shù)目杖笔欠浅１匾?，只有這樣才能富有彈性的實施實驗計劃，并不斷地調整好自己的實驗進度調整好自己的實驗進度。6、最經(jīng)濟原則最經(jīng)濟原則：不論什么實驗，都

53、有它的最優(yōu)選擇方案最優(yōu)選擇方案，這包括在資金的使用上，也包括人力時間的損耗上，必要時可以預測一下自己實驗的產出和投入的比值，這個比值越大越好，當然是以你所擁有的實驗條件你所擁有的實驗條件作基礎的。 （量力而為，看米下鍋?。┪鍖嶒炐〗Y五實驗小結不斷進行小結與不斷完善。不斷進行小結與不斷完善。在實驗記錄本上記載每周計劃的目的之一就是在周末進行檢查和小結，并根據(jù)結果制定下周計劃。我的導師教導我在工作順利時要注意隨時在工作順利時要注意隨時進行階段性小結，特別是在工作順利時，新的實驗數(shù)據(jù)不斷涌現(xiàn)，進行階段性小結，特別是在工作順利時，新的實驗數(shù)據(jù)不斷涌現(xiàn)，常常會使人忙于收集大量實驗數(shù)據(jù)，而忽略檢查實驗數(shù)據(jù)

54、的可靠性以及對實驗數(shù)據(jù)所說明的問題深入思考，或者說是只見樹木，不見森林。因而收集了大量無用的、錯誤的或意義不大的實驗數(shù)據(jù)，反而忽略了真正關鍵的數(shù)據(jù)，包括必不可少的對照實驗。這些必不可少的對照實驗，當時做當時做是非常方便的，而事后補做往往費時費力。是非常方便的，而事后補做往往費時費力。隨時進行階段性小結不僅可以隨時發(fā)現(xiàn)問題隨時予以解決，還可以隨時注意不僅要深入問題，重視每一個細節(jié)，還要不斷總覽全局，才不致迷失方向，這就是我國古人說做學問不僅要入乎其中還要出乎其外的意思。隨時進行階段性小結的另一目的就是對所得的初步結論隨時予以隨時進行階段性小結的另一目的就是對所得的初步結論隨時予以檢查，每一項實驗

55、結果都可能有多種不同的解釋，特別是在實驗出現(xiàn)檢查，每一項實驗結果都可能有多種不同的解釋，特別是在實驗出現(xiàn)重要結果時，最容易犯的錯誤就是輕率得出結論，要有自以為非的勇重要結果時，最容易犯的錯誤就是輕率得出結論，要有自以為非的勇氣。氣。我一生犯過多次這樣的錯誤。五十年代，王應睞教授、汪靜英同志和我在國際上首先純化了琥珀酸脫氫酶，并發(fā)現(xiàn)它有一個與蛋白部分共價連接含有核黃素的輔基。當時已知的兩種核黃素輔基，核黃素單核苷酸和核黃素腺嘌呤二核苷酸，都是與蛋白部分非共價結合，與蛋白部分共價連接含的核黃素輔基，文獻上尚未見有報道。因此我想，我們很可能發(fā)現(xiàn)了一種新型的核黃素輔基，經(jīng)過把蛋白部分水解進行鑒定，我們

56、觀察到這一輔基含有兩種堿基，一種是核黃素，而另一種在雙向紙層析上的位置表明它不是腺嘌呤而是次黃嘌呤，紫外吸收光譜也與次黃嘌呤相同。這導致我輕率得出結論認為我們獲得了一種全新的，文獻中從未報道過的與蛋白部分共價連接的輔基，核黃素次黃呤嘌呤二核苷酸。但在結構上次黃嘌呤僅比腺嘌呤少一個氨基，為此王應睞教授建議檢查在我們的酶制劑中是否會含有一種從腺嘌呤分子上水解除去氨基的酶，雖然我們的酶經(jīng)過純化，含有雜酶的可能性不大，但我們仍然進行了檢查，結果酶制劑中果然含有腺嘌呤脫氨酶作為雜質，輔基雖然與蛋白部分共價連接，但仍然是核黃素腺嘌呤二核苷酸，次黃呤嘌是在酶純化過程中腺嘌呤的水解產物。這就避免了在論文發(fā)表時出現(xiàn)重大錯誤。五實驗小結五實驗小結不斷進行小結與不斷完善。不斷進行小結與不斷完善。在實驗記