食用菌液體發(fā)酵罐制種技術(shù)(共6頁)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上食用菌液體發(fā)酵罐制種技術(shù)食用菌制種主要有液體和固體兩種制種方式。液體制種是目前國際上通用的、先進的方法。液體菌種具有生產(chǎn)周期短、用工成本低、菌絲活力強、接種后萌發(fā)吃料快、菌種在培養(yǎng)基中的流動性和分散性好、菌齡一致、出菇整齊、可縮短栽培時間等優(yōu)點。在對液體制種與固體制種經(jīng)濟效益分析比較中指出，液體菌種發(fā)育時間可以減少24d，接栽培袋菌絲滿菌時間縮短約10d，污染率可以降低1.5%，成本利潤率可提高42%。液體菌種作為食用菌基料工廠化生產(chǎn)發(fā)展過程中的重要環(huán)節(jié)，具有重要意義。而現(xiàn)在食用菌產(chǎn)業(yè)受資金和技術(shù)的限制，其規(guī)?；?、工廠化生產(chǎn)仍然以固體菌種為主，液體菌種的應用只有少數(shù)較

2、大規(guī)模工廠化生產(chǎn)的企業(yè)及少數(shù)栽培品種工廠化栽培中獲得應用，液體菌種的優(yōu)勢完全沒有發(fā)揮出來。液體菌種在制作過程中對設備、技術(shù)的要求較高，液體菌種發(fā)酵罐的操作技術(shù)流程復雜，增加了使用者的生產(chǎn)難度。我們將對食用菌液體菌種發(fā)酵罐的生產(chǎn)工藝、操作流程進行技術(shù)總結(jié)，為食用菌項目的液體菌種提供參考。1、研發(fā)液體菌種發(fā)酵罐的構(gòu)造液體菌種在發(fā)酵培養(yǎng)過程中需要充足的氧氣，屬好氧性發(fā)酵。滿足于好氧性發(fā)酵的生化反應器主要有兩大類即機械攪拌通風發(fā)酵罐和氣流攪拌發(fā)酵罐。前者利用通風裝置和攪拌裝置將氧溶入發(fā)酵液中，因機械攪拌剪切力而對菌絲產(chǎn)生破壞作用，因此不適于栽培型菌種的應用。而后者則利用外部供氣裝置將氣體通入發(fā)酵罐內(nèi)形

3、成環(huán)流將氧溶入發(fā)酵液中，其特點是基質(zhì)溶液分布均勻、具有較高的溶解氧速率和溶解氧效率、結(jié)構(gòu)簡單、易于加工和操作。而氣流攪拌發(fā)酵罐的構(gòu)造主要由電控系統(tǒng)、氣體輸送系統(tǒng)、發(fā)酵培養(yǎng)系統(tǒng)三部分組成。1.1電控系統(tǒng)。由控制箱體、微型電腦、集成傳感器、報警器、數(shù)碼顯示屏、控制開關(guān)等組成，可調(diào)控滅菌溫度、時間、壓力及培養(yǎng)溫度等。1.2氣體輸送系統(tǒng)。由無油隔膜泵、氣水分離器、空氣過濾器、濾芯、止回閥、壓力表、硅膠管等組成，可為發(fā)酵罐提供純凈、無菌的氣源。1.3發(fā)酵培養(yǎng)系統(tǒng)。由發(fā)酵罐體、鼓泡器、加熱管、進氣閥、接種閥、冷卻水進出孔、壓力表、安全閥、排氣閥、接種孔、視鏡等組成，液體菌種的滅菌、接種、發(fā)酵培養(yǎng)都在發(fā)酵罐

4、體內(nèi)完成。2、食用菌栽培一級種子的制備適宜的生長條件對發(fā)酵結(jié)果很重要，發(fā)酵必須用生長良好的種子進行接種。一級種子的培養(yǎng)通常是在搖瓶中進行，所使用的2L三角瓶中種子培養(yǎng)基的裝量為500mL。二級種子可在發(fā)酵罐中培養(yǎng)。其生產(chǎn)工藝流程如下：試管母種試管母種擴繁一級種子搖瓶培養(yǎng)二級種子發(fā)酵罐培養(yǎng)液體菌種轉(zhuǎn)接栽培袋。2.1母種準備。食用菌母種通常在PDA或改良的PDA斜面培養(yǎng)基上生長良好。長期冰箱保存的母種必須在新鮮的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)接，活化后才能作為液體培養(yǎng)的種子。也可用當年栽培的子實體進行組織分離，可獲得純度高、菌絲健壯、生命力強、色澤純正的母種。2.2搖瓶菌種準備。母種培養(yǎng)好后再轉(zhuǎn)接入5001000mL

5、的三角瓶中擴大培養(yǎng)。搖瓶菌種可用配方馬鈴薯200g，葡萄糖20g，酵母膏2g，蛋白胨3g，磷酸二氫鉀2g，硫酸鎂1g，維生素B11粒，水1000mL，pH自然。每瓶可裝200300mL培養(yǎng)基在0.130.15MPa壓力、121條件下，滅菌40min。在無菌條件下接種到三角瓶內(nèi)，置于搖床上振蕩培養(yǎng)，搖床振蕩頻率為80100r/min，溫度控制在2426，培養(yǎng)46d即可。3、食用菌二級種子發(fā)酵培養(yǎng)罐的清洗與檢查培養(yǎng)基制作上料培養(yǎng)基滅菌降溫發(fā)酵罐接種培養(yǎng)栽培袋接種。3.1發(fā)酵罐的清洗和檢查。一是新購的發(fā)酵罐或是使用過的發(fā)酵罐，在生產(chǎn)前都必須對罐內(nèi)進行徹底清洗。清除罐壁上菌球、菌塊、菌皮、料液及其它污

6、垢，用清水沖刷干凈。二是檢查各個閥門、加熱管、電控系統(tǒng)、氣泵、壓力表等是否正常，如有故障及時排除。3.2煮罐空消。新罐初次使用、上一罐污染、更換生產(chǎn)品種或罐長時間放置重新使用時，須對罐體內(nèi)部進行徹底消毒。方法是加水至視鏡中線，扣緊接種蓋，關(guān)閉排氣閥，打開啟動開關(guān)，當溫度達到100時，排氣閥微開。溫度達到121時計時40min，關(guān)閉排氣閥，悶20min后放水。放水結(jié)束后，再用水從進料口反復刷罐數(shù)次，使罐內(nèi)殘存物排放干凈。3.3培養(yǎng)基制作與上料。可用配方葡萄糖30%，玉米粉1%，黃豆粉2%，酵母膏0.5%，磷酸二氫鉀0.1%，碳酸鈣0.2%，硫酸鎂0.05%，pH自然，適用于多種食用菌菌種的液體培

7、養(yǎng)。依據(jù)液體發(fā)酵罐的容積按配方計算所需用量。其中玉米粉與黃豆粉需加水煮沸騰后計時20min，用68層紗布過濾，取濾液加入罐內(nèi)。其它化學制劑加水溶解后直接加入培養(yǎng)基內(nèi)即可。3.4培養(yǎng)基滅菌。打開啟動開關(guān)，當溫度達到100時，排氣閥微開，溫度達到121時自動計時40min?？諝鉃V芯要提前另滅菌，此時可安裝上，打開氣泵吹干濾芯。在滅菌過程中，為避免閥門處成為滅菌死角，需要在保壓過程中每隔15min排料一次，共3次，每次排料35min。3.5降溫。滅菌結(jié)束后將夾層進水閥門打開通水冷卻。在火焰的保護下將過濾器進氣管接在培養(yǎng)器進氣閥上，當培養(yǎng)器壓力降至0.1MPa以下，進氣系統(tǒng)氣壓高于罐內(nèi)壓0.02MPa

8、以上時，打開進氣閥向罐內(nèi)送氣。打開進氣閥時要慢慢地，防止料液倒流，造成污染。罐內(nèi)溫度降至28以下時即可進行接種操作。3.6接種。接種時須兩人配合操作。首先根據(jù)發(fā)酵罐接種口的大小用粗鐵絲做一個圓圈，鐵絲圈上包裹上脫脂棉，并用95%酒精浸濕備用。再備一條濕毛巾，放到接種口旁邊（待熄滅火用）。接種方法：一是用75%酒精將接種口的外蓋和周圍擦兩遍。二是開大排氣閥，當罐壓降到接近于零時，迅速關(guān)閉排氣閥并點燃火圈。三是在火焰保護下，打開接種口蓋，將搖瓶菌種迅速倒入罐內(nèi)，旋緊接種蓋。四是罐內(nèi)升壓后用濕毛巾滅掉火圈，打開排氣閥，調(diào)整罐壓在0.020.04MPa進入培養(yǎng)狀態(tài)。3.7培養(yǎng)。根據(jù)食用菌品種生物學特性

9、選擇適合的培養(yǎng)溫度。培養(yǎng)24h后，可每隔12h自接種閥取樣一次，觀察菌種萌發(fā)和生長情況。一是觀察菌液顏色及透明度，正常菌液顏色純正，一般呈現(xiàn)出淺黃色、淺棕色等不同顏色，澄清透明不渾濁。二是觀察菌液氣味，正常菌液有一種香甜味，若細菌污染有酸味、異味，霉菌污染有酒味。隨著培養(yǎng)時間的延長，氣味會越來越淡，到后期只有一種菌絲的香味無其它異味。4、液態(tài)發(fā)酵終點技術(shù)的確定食用菌發(fā)酵培養(yǎng)過程中細胞生長情況，遵循微生物生長曲線規(guī)律，可用細胞質(zhì)量的增減來描述，即延遲期、對數(shù)生長期、減速期、穩(wěn)定期、衰亡期。其中對數(shù)生長期的菌絲體生活力最旺盛，菌絲體相互纏繞形成各種形狀的菌球，細胞數(shù)量呈幾何級數(shù)增加，形成活力最旺盛

10、的菌球，直徑約0.3cm，發(fā)酵液中菌球顆粒約占80%90%，菌液顏色變淡透明，菌球與菌液界線分明，是放罐接種的最佳時期。若培養(yǎng)時間過長進入減速期之后，基質(zhì)中營養(yǎng)物質(zhì)被消耗，一些有害的代謝產(chǎn)物也在培養(yǎng)液中積累，菌絲由頂端生長開始分化成一些特定的繁殖器官，停止了細胞的繼續(xù)延伸，甚至菌球內(nèi)部菌絲開始死亡，從而影響栽培袋的接種成活率及產(chǎn)量。5、液態(tài)菌液雜菌預防措施食用菌液體菌種發(fā)酵采用純種培養(yǎng)，要求除生產(chǎn)菌外無其它微生物。生產(chǎn)過程中一旦發(fā)生染菌，菌液將不能作為菌種使用，不但擾亂生產(chǎn)秩序，破壞生產(chǎn)計劃，并且浪費大量原材料，造成經(jīng)濟損失。因此應當做好各種防護措施，樹立以防為主，防重于治的觀念，防止發(fā)酵染菌的發(fā)生，可從以下幾個方面做到提前預防。5.1加強環(huán)境衛(wèi)生管理，為發(fā)酵培養(yǎng)創(chuàng)造良好的環(huán)境條件。建立相應的操作規(guī)程和制度保障，培養(yǎng)具有一定專業(yè)素質(zhì)的操作人員。5.2選用純度高、菌絲健壯、生活力強的菌絲體做為種子。采用當年栽培的子實體進行組織分離，獲得純度高、色澤純正的菌絲體做為母種，可將必要的傳代次數(shù)降低到最低限度，減少衰退及突變機率的發(fā)生。5.3加強無菌操作觀念。試管母種、一級種子、二級種子的轉(zhuǎn)移與接種過程要嚴格按照無菌操作技術(shù)規(guī)程進行。5.4發(fā)酵罐是否正常。在使用前要檢查各閥門是否開啟靈活，管路連接是否有泄露，并及時處理。空氣過濾器濾芯在使用前