兒茶酚胺的分離檢測方法概述

1、兒茶酚胺的分離檢測方法概述佳木斯大學藥學院藥學專業(yè)班級:一班姓名：姜亭亭學號：0911074124兒茶酚胺類物質(zhì)分離分析方法概述（姜亭亭 佳木斯大學藥學院藥學一班）摘要兒茶酚胺類物質(zhì)是一種內(nèi)源性物質(zhì)，當其的含量發(fā)生顯著變化時，就代表人 體出現(xiàn)了一些病變，如巴金森氏病、高血壓等，著要對這些疾病進行診斷和治療，兒茶酚 胺類物質(zhì)的檢出和定量是不可缺少的手段，本文通過引用一些文獻對兒茶酚胺類物質(zhì)的一 些分離分析方法進行了概述。關(guān)鍵詞兒茶酚胺；分離；檢測兒茶酚胺類物質(zhì)作為交感腎上腺素能神經(jīng)元和腎上腺髓質(zhì)合成與釋放的單胺類神經(jīng)遞 質(zhì)，是生物體內(nèi)具有較強生理學效應的內(nèi)源性活性物質(zhì)，它包括去甲腎上腺素（NE）

2、、5- 羥色胺（5-HT）、腎上腺素（E）和多巴胺（DA）,這一類物質(zhì)的化學結(jié)構(gòu)特點是都含有一 個雙羥基苯核和一個帶氨基的側(cè)鏈。此類物質(zhì)在腦和神經(jīng)信號傳導中起著重要的作用并且 與多種生理、病理現(xiàn)象密切相關(guān)，參與心率呼吸和睡眠等植物神經(jīng)功能調(diào)控，是一類重 要的神經(jīng)遞質(zhì)，與人們的健康有密切關(guān)系。在醫(yī)學方面其含量測定不僅可作為神經(jīng)母細胞 瘤、嗜銘細胞瘤和原發(fā)性高血壓的診斷依據(jù)，而且可應用于其他兒茶酚胺相關(guān)的疾病研究, 如傳統(tǒng)兒茶酚胺類物質(zhì)活動癥、憂郁癥及神經(jīng)系統(tǒng)變性病變?nèi)缗两鹕暇C合癥，還與心血 管疾病等的出現(xiàn)有關(guān)。因此兒茶酚胺的分析在生物學和醫(yī)學方面有著重要意義，此類物質(zhì) 的分離分析就更為關(guān)鍵，然

3、而使用正確的方法是得到正確的結(jié)論前提5。早在20世紀40年代人們已經(jīng)開始對兒茶酚胺類物質(zhì)的檢測分析4,早期的測定方法主要是三羥基口引喋法和乙二胺縮合法.隨著分析科學的蓬勃發(fā)展人們對兒茶酚胺研究己經(jīng)更加深入，目前主要的分離檢測方法主要有高 效液相色譜法(HPLC)、毛細管電泳法(CE)、化學修飾電極法、氣相色譜法(GC)、離 子交換色譜(IEC)、能催化動力學光度法以及與質(zhì)譜、電化學檢測法、熒光檢測法、化 學發(fā)光檢測法之間的聯(lián)用等1-5, 7, 8, 1076, 18, 21-22。1化學修飾電極法兒茶酚胺在固體電極上的電子傳遞速率非常緩慢，旦其本身或反應產(chǎn)物易在電極表面 吸附，導致電極表面鈍化

4、。利用具有特定功能的化學修飾電極可避免電極表面的污染，提 供三維空間反應場，從而進行電催化測定。莫金垣等24人研究了血紅素修飾電極上兒茶 酚胺的電催化測定，DA和E的線性范圍達L0*10-7l*10-4mol/L和8*10-8 4*10-5 mol/Lo餓配位聚合物因其獨特的電子轉(zhuǎn)移特性，己被廣泛地應用于化學修飾電極的制備。 倪靜安等25人用碳及石墨作基底,討論了 0s(bpy)2(PVP)10Cl Cl (OsP)修飾碳基電的 制備及電化學性質(zhì)，研究了三種神經(jīng)遞質(zhì)在OsP電極上的電催化行為，測得DA、E和NE 的線性范圍分別為(TO. Immol/L、600. Immol/L和00. 13m

5、mol/La實驗證明化學修飾電極 法十一中高選擇性的，可連續(xù)測定的方法3。2高效液相色譜法(HPLC)高效液相色譜法是在經(jīng)典液相色譜發(fā)的基礎(chǔ)上，引入了氣相色譜法的理論和實驗技術(shù), 以高壓輸送流動相，采用高靈敏度檢測器，發(fā)展而成的現(xiàn)代液相色譜分析方法。其中高效 液相色譜與電化學檢測法、熒光檢測法、化學發(fā)光檢測法、紫外檢測的聯(lián)用應用比較廣泛。 2.1高效液相色譜-紫外檢測(HPLC- UV)法梁秋云等2在高效液相色譜-紫外檢測(HPLC- UV)法測定自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)血 漿中去甲腎上腺素(NA)的含量實驗中，他們以C18為色譜柱，以甲醇- 0. 15 mol* L-1磷 酸二氫鉀緩沖液(

6、1： 9, V/V, PH6.0)為流動相，檢測波長為280nm,柱溫為室溫，流速為 1.0 mL *min-lo結(jié)果顯示NA檢測濃度線性范圍為0. 540微克每升(廠0. 999 9),最 低檢測濃度為0.05微克每升。平均回收率為97. 49%, RSD小于3.81%。本方法線性、 精密度、回收率良好，靈敏度高，操作簡便，可用于NA的藥動學及相關(guān)研窕。2. 2高效 液相色譜-熒光檢測(HPLC-FD )法此方法為高效液相色譜與熒光檢測法的聯(lián)用。鄧向軍6在高效液相-熒光檢測法測定 尿液中兒茶酚胺類化合物的含量中就是運用了此方法，他采用真空濃縮和真空干燥法對樣 品進行預處理，H PLC-FD測

7、定結(jié)果線性關(guān)系良好，回收率較高，得出此方法準確性好、 離效率高、操作簡單、易于控制操作條件、CA s具有高靈敏度和高對選擇性等眾多優(yōu)點。方蘭云等13在測定血漿中的兒茶酚胺及其代謝產(chǎn)物中乂加入了 固相萃取，他們采取采用固相萃取方法對血漿樣品進行預處理,利用高效液相色譜分離待測物，最后使用熒光檢測器檢測兒茶酚胺及其代謝產(chǎn)物。C18小柱處理加標血漿樣品，在優(yōu) 化的最佳洗脫條件下，加標回收率在85. 6% 106. 3%范圍內(nèi)。方法的相對標準差(RSD ) 為2 3 % 6 7 %。各被測物質(zhì)線性關(guān)系良好，方法準確和精密，但熒光粉光光度法前 處理復雜，不能把集中成分完全分開8。2. 3高效液相色譜-串

8、聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS)法此方法是高效液相色譜與質(zhì)譜的聯(lián)用，王賢親等21液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定人血 漿中兒茶酚胺的含量中就是運用的此方法進行定量分析。腎上腺素、去甲腎上腺素和多巴 胺的最小檢測限(L0D)在4. 3, 2.4和6. 6ng/mL之間，濃度在0 500 ng/ mL范圍內(nèi) 線性良好(r=0. 9921),平均回收率在85. 8% 93. 4%之間，日內(nèi)、日間精密度 RSD為9與 ( n=5) 結(jié)果表明該方法專屬性強、靈敏及準確，具有二次分離作用、專屬 性強的優(yōu)勢，分析時間短的優(yōu)勢，適用r-人血漿中兒茶酚胺快速分析的需要，可以適用于 人血漿兒茶酚胺的快速分析。還可以有HPLC- F