輔助降血糖功能檢驗(yàn)方法

1、附件 3：輔助降血糖功能評價(jià)方法試驗(yàn)項(xiàng)目、試驗(yàn)原則及結(jié)果判定Items, Principles and Result Assessment1 試驗(yàn)項(xiàng)目1.1 動物實(shí)驗(yàn)分為方案一（胰島損傷高血糖模型）和方案二（胰島素抵抗糖脂代謝紊亂模型）兩種1.1.1 方案一（胰島損傷高血糖模型）1.1.1.1 體重1.1.1.2 空腹血糖1.1.1.3 糖耐量1.1.2 方案二（胰島素抵抗糖脂代謝紊亂模型）1.1.2.1 體重1.1.2.2 空腹血糖1.1.2.3 糖耐量1.1.2.4 胰島素1.1.2.5 總膽固醇1.1.2.6 甘油三酯1.2 人體試食試驗(yàn)1.2.1 空腹血糖1.2.2 餐后 2 小時(shí)血糖

2、1.2.3 糖化血紅蛋白（ HbA1c ）或糖化血清蛋白1.2.4 總膽固醇1.2.5 甘油三酯2 試驗(yàn)原則2.1 動物實(shí)驗(yàn)和人體試食試驗(yàn)所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。2.2 根據(jù)受試樣品作用原理不同，方案一和方案二動物模型任選其一進(jìn)行動物實(shí)驗(yàn)。2.3 除對高血糖模型動物進(jìn)行所列指標(biāo)的檢測外，應(yīng)進(jìn)行受試樣品對正常動物空腹血糖影響的觀察。2.4 人體試食試驗(yàn)應(yīng)在臨床治療的基礎(chǔ)上進(jìn)行。2.5 應(yīng)對臨床癥狀和體征進(jìn)行觀察。2.6 在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察。3 結(jié)果判定3.1 動物實(shí)驗(yàn)：方案一：空腹血糖和糖耐量二項(xiàng)指標(biāo)中一項(xiàng)指標(biāo)陽性，且對正常動物空腹血糖無影響，即可判定該受

3、試樣品輔助降血糖功能動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。方案二：空腹血糖和糖耐量二項(xiàng)指標(biāo)中一項(xiàng)指標(biāo)陽性，血脂（總膽固醇、甘油三酯）無明顯升高，且對正常動物空腹血糖無影響，即可判定該受試樣品輔助降血糖功能動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。3.2 人體試食試驗(yàn)：空腹血糖、餐后 2 小時(shí)血糖、糖化血紅蛋白（或糖化血清蛋白） 、血脂四項(xiàng)指標(biāo)均無明顯升高，且空腹血糖、餐后 2 小時(shí)血糖兩項(xiàng)指標(biāo)中一項(xiàng)指標(biāo)陽性，對機(jī)體健康無影響，可判定該受試樣品具有輔助降血糖功能的作用。40輔助降血糖功能檢驗(yàn)方法Method for the Assessment of Assisting BloodSugar Reduction Function1 .動物

4、實(shí)驗(yàn)1.1 實(shí)驗(yàn)動物選用成年動物，選用小鼠（26±2g）或大鼠（180±20g）,單一性別，大鼠每組 812只、 小鼠每組1015只。1.2 材料1.2.1 試齊 IJ四氧喀咤（C4H2N2O4 - H2O,分子量160.08）或鏈月尿佐菌素、地塞米松磷酸鈉注射液、葡萄 糖或醫(yī)用淀粉、血糖測定試紙或試劑盒，胰島素、甘油三酯、總膽固醇測定試劑盒1.2.2 高熱能飼料豬油10%、蔗糖15%、蛋黃粉15%、酪蛋白5%、膽固醇1.2%、膽酸鈉0.2%、碳酸 氫車0.6%、石粉0.4%、鼠維持料 52.6%1.2.3 儀器血糖儀、全自動生化儀、可見光分光光度計(jì)、酶標(biāo)儀、天平。1.3

5、劑量分組及受試樣品給予時(shí)間實(shí)驗(yàn)設(shè)三個劑量組和一個模型對照組，以人體推薦量的10倍（小鼠）或5倍（大鼠）為其中的一個劑量組，另設(shè)二個劑量組，高劑量一般不超過30倍，必要時(shí)設(shè)空白對照組。同時(shí)設(shè)給予受試樣品高劑量的正常動物組。受試樣品給予時(shí)間30天，必要時(shí)可延長至 45天。1.4 實(shí)驗(yàn)方法1.4.1 正常動物降糖實(shí)驗(yàn)選健康成年動物按禁食 3-5小時(shí)的血糖水平分組，隨機(jī)選1個對照組和1個劑量組。對照組給予溶劑，劑量組給予高劑量濃度受試樣品，連續(xù) 30天，測空腹血糖值（禁食同實(shí)驗(yàn)前）， 比較兩組動物血糖值。1.4.2 高血糖模型降糖實(shí)驗(yàn)萬案一1.4.2.1 胰島損傷高血糖模型1.4.2.1.1 原理四氧

6、喀咤（或鏈月尿佐菌素）是一種P細(xì)胞毒劑，可選擇性地?fù)p傷多種動物的胰島P細(xì)胞，造成胰島素分泌低下，引起實(shí)驗(yàn)性糖尿病。1.4.2.1.2 造模方法購入成年動物，適應(yīng) 1天后，隨機(jī)取15只動物禁食35小時(shí)，測空腹血糖，作為該批次 動物基礎(chǔ)血糖值。隨后動物禁食24小時(shí)（自由飲水），注射四氧喀咤（用前新鮮配制）造模，小鼠 4550mg/kg BW.iv 或 125 130mg/kg BW.ip ,大鼠 5080mg/kg BW.iv 或 120160mg/kg BW.ip。57天后動物禁食35小時(shí)，測血糖，血糖值1025mmol/L為高血糖模型成功動物。 1.4.2.1.3高血糖模型動物降糖實(shí)驗(yàn)選高血糖

7、模型動物按禁食 3-5小時(shí)的血糖水平分組，隨機(jī)選 1個模型對照組和3個劑量 組（組間差不大于1.1mmol/L）。劑量組給予不同濃度受試樣品，模型對照組給予溶劑，連續(xù) 30 天，測空腹血糖值（禁食同實(shí)驗(yàn)前），比較各組動物血糖值及血糖下降百分率。（實(shí)驗(yàn)前血糖值-實(shí)驗(yàn)后血糖值）血糖下降率= X 100%實(shí)驗(yàn)前血糖值1.4.2.1.4 高血糖模型動物糖耐量實(shí)驗(yàn)劑量分組及受試樣品給予時(shí)間同1.4.2。各組動物禁食 3- 5小時(shí)，測定給葡萄糖或醫(yī)用淀粉前（即0小時(shí)）血糖值，劑量組給予不同濃度受試樣品，模型對照組給予同體積溶劑，15-20分鐘后各組經(jīng)口給予葡萄糖2.0g/kg BW醫(yī)用淀粉3- 5g/kg

8、 BW測定給葡萄糖后各組0.5、2小時(shí)的血糖值或給醫(yī)用淀粉后1、2小時(shí)的血糖值，觀察模型對照組與受試樣品組給葡萄糖或醫(yī)用淀粉后各時(shí)間點(diǎn)（0、0.5、2小時(shí)）血糖值及血糖曲線下面積的變化。（0小時(shí)血糖+ 0.5小時(shí)血糖）X 0.5（2小時(shí)血糖+ 0.5小時(shí)血糖）X 1.5血糖曲線下面積= +22萬案一1.4.2.2 胰島素抵抗糖脂代謝紊亂模型（任選其一）1.4.2.2.1 地塞米松誘導(dǎo)胰島素抵抗糖脂代謝紊亂模型1.4.2.2.1.1 原理糖皮質(zhì)激素具有拮抗胰島素生物效應(yīng)的作用，可抑制靶組織對葡萄糖的攝取和利用，促進(jìn) 蛋白質(zhì)和脂肪的分解及糖異生作用，導(dǎo)致糖、脂代謝紊亂，胰島素抵抗，誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性糖尿病

9、。1.4.2.2.1.2 試驗(yàn)方法購入健康雄性大鼠（150±20g）,普通維持料適應(yīng)飼養(yǎng) 35天，禁食3 4小時(shí)，取尾血， 測定空腹即給葡萄糖前（0小時(shí)）血糖值，給 2.5g/kgBW葡萄糖后測定0.5、2小時(shí)血糖值，作 為該批次動物基礎(chǔ)值。以0、0.5小時(shí)血糖水平分 5個組，即1個空白對照組、1個模型對照組和3個劑量組，每組15只。空白對照組不做處理，3個劑量組灌胃給予不同濃度受試樣品，模型對照組給予同體積溶劑，連續(xù)35天。各組給予維持料飼養(yǎng)，1周后模型對照組和 3個劑量組更換高熱能飼料，喂飼 2周后，模型對照組和3個劑量組在高熱能飼料基礎(chǔ)上分別給予地塞米松0.8mg/kgBW 腹

10、腔注射（0.008%地塞米松注射量 1ml/100g體重），每日1次，連續(xù)1012天。試驗(yàn)結(jié)束，各組動物禁食3-4小時(shí)，檢測空腹血糖、糖耐量、血清胰島素及膽固醇、甘油三脂水平。1.4.2.2.1.3 觀察指標(biāo)1.4.221.3.1 空腹血糖、糖耐量各組動物禁食3-4小時(shí)，測定空腹血糖即給葡萄糖前（0小時(shí)）血糖值，劑量組給予不同濃度受試樣品，模型對照組給予同體積溶劑，空白對照組不做處理，15-20分鐘后各組經(jīng)口給予葡萄糖2.5g/kg BW測定給葡萄糖后各組0.5、2小時(shí)的血糖值，若模型對照組0.5小時(shí)血糖值>10mmol/L ,或模型對照組 0.5小時(shí)、2小時(shí)任一時(shí)間點(diǎn)血糖升高或血糖曲線

11、下面積升高，與 空白對照組比較，差異有顯著性，判定模型糖代謝紊亂成立，在此基礎(chǔ)上，觀察模型對照組與 受試樣品組空腹血糖、給葡萄糖后（0.5、2小時(shí)）血糖及 0、0.5、2小時(shí)血糖曲線下面積的變化。（實(shí)驗(yàn)前血糖值-實(shí)驗(yàn)后血糖值）血糖下降率= X 100%實(shí)驗(yàn)前血糖值（0小時(shí)血糖+ 0.5小時(shí)血糖）X 0.5（2小時(shí)血糖+ 0.5小時(shí)血糖）X 1.5血糖曲線下面積= +221.4.2.2.1.3.2 膽固醇、甘油三脂各組動物禁食3- 4小時(shí)，檢測血清膽固醇、 甘油三脂，若模型對照組血清膽固醇或甘油三 酯明顯升高，與空白對照組比較，差異有顯著性，判定模型脂代謝紊亂成立，在此基礎(chǔ)上，觀 察模型對照組與

12、受試樣品組血脂變化。1.4.2.2.1.3.3 胰島素各組動物禁食3-4小時(shí)，檢測血清胰島素，模型對照組與空白對照組比較胰島素抵抗指數(shù) 無明顯下降，且動物糖/脂代謝紊亂成立，判定胰島素抵抗糖 脂代謝紊亂模型成功。觀察模型 對照組與受試樣品組胰島素抵抗情況。血糖x胰島素胰島素抵抗指數(shù)=胰島素/22.5e-血糖22.51.4.2.2.2四氧喀咤誘導(dǎo)胰島素抵抗糖脂代謝紊亂模型1.4.2.2.2.1 原理高熱能飼料喂飼基礎(chǔ)上，輔以小劑量四氧喀咤（C4H2N2O4 - H2O,分子量160.08）,造成糖/脂代謝紊亂，胰島素抵抗，誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性糖尿病。1.4.2.2.2.2 造模方法購入健康雄性大鼠（150

13、±20g）,普通維持料適應(yīng)飼養(yǎng)35天，禁食3 4小時(shí)，取尾血，測定給葡萄糖前（即 0小時(shí)）血糖值，給2.5g/kgBW葡萄糖后0.5、2小時(shí)血糖值，作為該批次 動物基礎(chǔ)值。以0、0.5小時(shí)血糖水平分 5個組，即1個空白對照組、1個模型對照組和 3個劑 量組，每組15只?？瞻讓φ战M不做處理，3個劑量組灌胃給予不同濃度受試樣品，模型對照組給予同體積溶劑，連續(xù)33天。各組給予維持料飼養(yǎng)，1周后模型對照組和 3個劑量組更換高熱能飼料，喂飼 3周后，模型對照組和3個劑量禁食24小時(shí)（不禁水），給予四氧喀咤 103 105mg/kgBW 腹腔注射，注射量1ml/100g 體重。注射后繼續(xù)給予高熱

14、能飼料喂飼 35 天。試驗(yàn)結(jié)束，各組動物禁食3 4 小時(shí)，檢測空腹血糖、糖耐量、血清胰島素及膽固醇、甘油三脂水平。1.4.2.2.2.3 觀察指標(biāo)1.4.2.2.2.3.1 空腹血糖、糖耐量各組動物禁食3 4 小時(shí)，測定空腹血糖即給葡萄糖前（ 0 小時(shí)）血糖值，劑量組給予不同濃度受試樣品，模型對照組給予同體積溶劑，空白對照組不做處理， 15 20 分鐘后各組經(jīng)口給予葡萄糖 2.5g/kg BW ，測定給葡萄糖后各組 0.5、 2小時(shí)的血糖值，若模型對照組 0.5 小時(shí)血糖值R10mmol/L,或模型對照組0.5小時(shí)、2小時(shí)任一時(shí)間點(diǎn)血糖升高或血糖曲線下面積升高，與空白對照組比較，差異有顯著性，

15、判定模型糖代謝紊亂成立，在此基礎(chǔ)上，觀察模型對照組與受試樣品組空腹血糖、給葡萄糖后（ 0.5、 2 小時(shí)）血糖及0、 0.5 、 2 小時(shí)血糖曲線下面積的變化。（實(shí)驗(yàn)前血糖值實(shí)驗(yàn)后血糖值）血糖下降率= X 100%實(shí)驗(yàn)前血糖值（0小時(shí)血糖+ 0.5小時(shí)血糖）X 0.5（2小時(shí)血糖+ 0.5小時(shí)血糖）X 1.5血糖曲線下面積= +221.4.2.2.2.3.2 膽固醇、甘油三脂各組動物禁食3 4 小時(shí)， 檢測血清膽固醇、 甘油三脂， 若模型對照組血清膽固醇或甘油三酯明顯升高，與空白對照組比較，差異有顯著性，判定模型脂代謝紊亂成立，在此基礎(chǔ)上，觀察模型對照組與受試樣品組血脂變化。1.4.2.2.2

16、.3.3 胰島素各組動物禁食3 4 小時(shí)， 檢測血清胰島素， 模型對照組與空白對照組比較胰島素抵抗指數(shù)無明顯下降，且動物糖/ 脂代謝紊亂成立，判定胰島素抵抗糖脂代謝紊亂模型成功。觀察模型對照組與受試樣品組胰島素抵抗情況。血糖X胰島素胰島素抵抗指數(shù)=胰島素/22.5e血糖弋22.51.5數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F 值， F彳t< F0.05,結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值RF0.05, PW0.05,用多個實(shí)驗(yàn)組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，

17、用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。1.5.1 指標(biāo)判定1.5.1.1 正常動物降糖試驗(yàn)血糖指標(biāo)：空腹血糖受試樣品劑量組與對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，判定對正常動物血糖無影響。1.5.1.2 高血糖模型降糖試驗(yàn)空腹血糖指標(biāo)：模型成立的前提下，受試樣品劑量組與模型對照組比較，空腹血糖下降或血糖下降百分率升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，判定該受試樣品空腹血糖指標(biāo)結(jié)果陽性。糖耐量指標(biāo)：模型成立的前提下，受試樣品劑量組與模型對照組比較，在給葡萄糖或醫(yī)用淀粉后0.5、 2 小時(shí)任一時(shí)間點(diǎn)血糖下降（或血糖下降百分率升高）有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，或0、 0.5、2 小時(shí)血糖曲線下面積降

18、低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，判定該受試樣品糖耐量指標(biāo)結(jié)果陽性。血脂指標(biāo)：模型成立的前提下，受試樣品劑量組與模型對照組比較，血清膽固醇或甘油三酯下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可判定該受試樣品降血脂指標(biāo)陽性。1.5.2 結(jié)果判定方案一：空腹血糖和糖耐量二項(xiàng)指標(biāo)中一項(xiàng)指標(biāo)陽性，且對正常動物空腹血糖無影響，即可判定該受試樣品輔助降血糖功能動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。方案二：空腹血糖和糖耐量二項(xiàng)指標(biāo)中一項(xiàng)指標(biāo)陽性，且血脂（總膽固醇、甘油三酯）無明顯升高，對正常動物空腹血糖無影響，即可判定該受試樣品輔助降血糖功能動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。1.6 注意事項(xiàng)1.6.1 為了使實(shí)驗(yàn)動物糖代謝功能狀態(tài)盡量保持一致，也為了準(zhǔn)確地按體重計(jì)算受試樣品的用量，實(shí)

19、驗(yàn)前動物應(yīng)嚴(yán)格禁食（不禁水） ，實(shí)驗(yàn)前后禁食條件應(yīng)一致，鼠類在禁食的同時(shí)應(yīng)更換襯墊物。1.6.2 如用血清樣品進(jìn)行測定，應(yīng)于取血后 30 分鐘內(nèi)分離血清，分離后血清的含糖量在 6 小時(shí)內(nèi)不變。用血清制備的無蛋白血濾液可保存48 小時(shí)以上。1.6.3 高濃度的還原性物質(zhì)如 Vit C 亦能與色素原競爭游離氧，干擾反應(yīng)，使結(jié)果偏低。血紅蛋白能使過氧化氫過早分解，亦干擾反應(yīng)，致使測得血糖值偏低。故對已溶血的全血或血清必須制備無蛋白濾液后，再進(jìn)行測定。1.7 血糖測定方法用試紙或試劑盒，按說明書操作；若自行配制試劑，按下列方法操作：1.7.1 原理葡萄糖氧化酶是一種需氧脫氫酶，能催化葡萄糖生成葡萄糖酸

20、和過氧化氫，后者在過氧化物酶作用下放出氧，使4-氨基安替比林與酚氧化縮合，生成紅色醌類化合物，可在波長505nm比色測定。葡萄糖氧化酶葡萄糖-葡萄糖酸+過氧化氫過氧化物酶過氧化氫+酚+ 4-氨基安替比林一紅色醍類化合物1.7.2 試劑配制磷酸鹽緩沖液（0.2mol/L , pH7.0）0.2mol/L Na 2HPO461mL , 0.2mol/L KH 2P0439mL 混合即可。酶試劑葡萄糖氧化酶 400u,過氧化物酶0.6mg, 4-氨基安替比林10mg,疊氮鈉100mg,加磷酸鹽緩沖液至100mL, PH調(diào)至7。冰箱存放至少可穩(wěn)定 2個月。酚試劑酚100mg溶于100mL蒸儲水中。酶混

21、合試劑取等量酶試劑和酚試劑混合。在冰箱中可存放1個月。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液儲存液：無水D-葡萄糖（A.R.）在烤箱中80 c烤4小時(shí)，冷卻后，存放于干燥器中至恒重。精確稱取2g以0.25%苯甲酸溶液溶解并移入100mL容量瓶中，再用苯甲酸溶液稀釋至100mL。應(yīng)用液：在100mL容量瓶中準(zhǔn)確加入儲存液5mL,再用0.25%苯甲酸溶液稀釋至 100mL,即1mg/mL應(yīng)用液。蛋白沉淀劑溶解磷酸氫二鈉10g、鴇酸鈉10g、氯化鈉9g于800mL蒸儲水中，加入1mol/L鹽酸125mL,并用蒸儲水稀釋至 1000mL。1.7.3 操作步驟取蛋白沉淀劑1mL加入血漿（血清）50 dL混勻。室溫放置7分鐘后，離

22、心，取上清液（無 蛋白血濾液）測定。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液亦進(jìn)行同樣處理。測定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管無蛋白血濾液 mL0.5-處埋后的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液 mL-0.5-蛋白沉淀液mL0.5酶混合試劑mL444混勻后，37c水浴保溫15分鐘，用空白管調(diào)零點(diǎn)，在波長 505nm處比色。1.7.4 結(jié)果計(jì)算測定管OD血糖含量（mmol/L ） = X 100/18標(biāo)準(zhǔn)管OD2人體試食試驗(yàn)2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)采用隨機(jī)分組，組間和自身兩種對照設(shè)計(jì)。2.2 受試產(chǎn)品受試產(chǎn)品必須是具有定型包裝、 標(biāo)明服用方法和服用量的定型產(chǎn)品； 安慰劑除功效成分外，在劑型、口感、外觀和包裝上與受試產(chǎn)品保持一致。2.3 受試者選擇2.3.1 納

23、入標(biāo)準(zhǔn)選擇經(jīng)飲食控制或口服降糖藥治療后病情較穩(wěn)定，不需要更換藥物品種及劑量，僅服用維持量的成年 II型糖尿病患者(DM),即空腹血糖 R7mmol/L (126mg/dl)或餐后 2小時(shí)血糖 > 11.1mmol/L (200mg/dl);也可選擇空腹血糖 5.67mmol/L (100 126mg/dl)或餐后 2 小時(shí) 血糖 7.811.1mmol/L (140 200mg/dl)的糖調(diào)節(jié)受損(IGR)人群。2.3.2 排除標(biāo)準(zhǔn)2.3.2.1 I型糖尿病病人。2.3.2.2 年齡在 18 歲以下或 65歲以上，妊娠或哺乳期婦女，對受試樣品過敏者。2.3.2.3 有心、肝、腎等主要臟器

24、并發(fā)癥，或合并有其它嚴(yán)重疾病，精神病患者，服用糖皮質(zhì)激 素或其它影響血糖藥物者。2.3.2.4 不能配合飲食控制而影響觀察結(jié)果者。2.3.2.5 近 3 個月內(nèi)有糖尿病酮癥、酸中毒以及感染者。2.3.2.6 短期內(nèi)服用與受試功能有關(guān)的物品，影響到對結(jié)果的判斷者。2.3.2.7 凡不符合納入標(biāo)準(zhǔn)，未按規(guī)定服用受試樣品，或資料不全影響觀察結(jié)果者。2.4 受試者分組采用自身和組間兩種對照設(shè)計(jì)。根據(jù)隨機(jī)盲法的要求進(jìn)行分組。按受試者的糖化血紅蛋白或糖化血清蛋白及血糖水平隨機(jī)分為試食組和對照組， 盡可能考慮影響結(jié)果的主要因素如病程、 服藥種類(磺脲類、雙胍類)等，進(jìn)行均衡性檢驗(yàn)，以保證組間的可比性。每組受

25、試者不少于2.5 例。2.6 試驗(yàn)方法試驗(yàn)前對每一位受試者按性別、年齡、不同勞動強(qiáng)度、理想體重參照原來生活習(xí)慣規(guī)定相應(yīng)的飲食，試食期間堅(jiān)持飲食控制，治療糖尿病的藥物種類和劑量不變。試食組在服藥的基礎(chǔ)上，按推薦服用方法服用量每日服用受試樣品，對照組在服藥的基礎(chǔ)上可服用安慰劑或采用空白對照。受試樣品給予時(shí)間 2 個月，必要時(shí)可延長至4 個月。2.7 觀察指標(biāo)2.7.1 安全性指標(biāo)2.7.1.1 一般狀況體征包括精神、睡眠、飲食、大小便、血壓等2.7.1.2 血、尿、便常規(guī)檢查2.7.1.3 肝、腎功能檢查2.7.1.4 胸透、心電圖、腹部 B超檢查（僅試驗(yàn)前檢查一次）2.7.2 功效指標(biāo)2.7.2

26、.1 癥狀觀察詳細(xì)詢問病史，了解患者飲食情況，用藥情況，活動量，觀察口渴多飲、多食易饑、倦怠 乏力、多尿等主要臨床癥狀，按癥狀輕重積分，于試食前后統(tǒng)計(jì)積分值，并就其主要癥狀改善 （改善1分為有效），觀察臨床癥狀改善率。臨床癥狀積分表無癥狀 （積0分）輕癥（積1分）中癥（積2分）重癥（積3分）口渴多飲無有口渴感，飲水量1 L/日口渴感明顯，飲水量1-2 L/日口渴顯著，飲水量2L/日多食易饑無餐前有輕度饑餓感餐前有明顯饑餓感晝夜均有饑餓感多尿尿量1.8L/日尿量1.8 2.5 L/日尿量2.5 3 L/日尿里3 L/日倦怠乏力無精神不振，不耐勞力精神疲乏，可堅(jiān)持輕體 力勞動精神極度疲乏，勉強(qiáng) 堅(jiān)

27、持日?；顒?.7.2.2 空腹血糖觀察試食前后空腹血糖值、空腹血糖下降百分率、空腹血糖有效率。2.7.2.3 餐后2小時(shí)血糖觀察試食前后食用100g精粉饅頭后2小時(shí)血糖值、餐后 2小時(shí)血糖下降百分率、餐后2小時(shí)血糖有效率。2.7.2.4 糖化血紅蛋白或糖化血清蛋白觀察試食前后糖化血紅蛋白或糖化血清蛋白變化。2.7.2.5 血脂觀察試食前后血清總膽固醇、血清甘油三酯水平。2.8 注意2.8.1 血清（漿）中的葡萄糖能與白蛋白及其他血清蛋白分子末端的氨基上發(fā)生非酶促糖化反應(yīng) 而形成高分子酮胺結(jié)構(gòu)。此酮胺結(jié)構(gòu)能在堿性環(huán)境中與硝基四氮陛蘭（NBT）發(fā)生還原反應(yīng)生成藍(lán)紫色物質(zhì)，以1-脫氧-1-嗎啡咻果糖

28、（DMF）作標(biāo)準(zhǔn)參照物在540 nm波長處（530 nm 550 nm） 進(jìn)行比色測定，求得樣本中果糖胺的濃度。參考值為1.7 mmol/L -2.5 mmol/L。由于血清中白蛋白的半衰期約21 d,所以糖化血清蛋白測定可反映患者過去2- 3周平均血糖水平。糖尿病患者的糖化血清蛋白的增加比糖化血紅蛋白迅速，當(dāng)血糖得到較好控制時(shí)，糖化血清蛋白的下降也比糖化血紅蛋白迅速，因此能較早地提供血糖控制信息。糖化血清蛋白更能靈敏地反映近期糖尿病患者血糖的波動情況。它的敏感度高，特異強(qiáng)。并不受年齡，飲食，藥物，妊娠等因素的 影響，對血糖濃度的臨時(shí)波動反應(yīng)不敏感，是診斷糖尿病和較長時(shí)間血糖控制水平研究的良好

29、指標(biāo)。標(biāo)本溶血對糖化血清蛋白的測定結(jié)果有較大影響，血清中1 g/L的血紅蛋白可導(dǎo)致 GSP測 定結(jié)果增高 0.6 mmol/L 左右。2.8.2 糖化血紅蛋白是經(jīng)過緩慢的， 不可逆的， 非酶促反應(yīng)而結(jié)合形成的產(chǎn)物，其濃度與紅細(xì)胞壽命(平均120天) 和該時(shí)期內(nèi)血糖平均濃度有關(guān)，不受每天葡萄糖波動的影響，也不受運(yùn)動或食物的影響，可反映患者抽血前2個月3個月的平均血糖水平，是判斷糖尿病長期控制的良好指標(biāo)。糖化血紅蛋白在健康人體內(nèi)的波動范圍很小 (0.1% 0.2%) ，正常值為 4%6%。2.9 數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定凡自身對照資料可以采用配對 t 檢驗(yàn)， 兩組均數(shù)比較采用成組t 檢驗(yàn)， 后者需進(jìn)行方

30、差齊性檢驗(yàn)，對非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)方差齊后，用轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)進(jìn)行 t 檢驗(yàn)； 若轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)仍不能滿足正態(tài)方差齊要求， 改用 t 檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)； 方差齊但變異系數(shù)太大(如 CV>50 )的資料應(yīng)用秩和檢驗(yàn)。2.9.1 血糖下降幅度試驗(yàn)前空腹血糖 試驗(yàn)后空腹血糖空腹血糖下降百分率= X100%試驗(yàn)前空腹血糖試驗(yàn)前餐后 2 小時(shí)血糖 試驗(yàn)后餐后 2 小時(shí)血糖餐后2小時(shí)血糖下降百分率= X 100%試驗(yàn)前餐后2 小時(shí)血糖2.9.2 糖化血紅蛋白或糖化血清蛋白下降幅度試驗(yàn)前糖化血紅蛋白 試驗(yàn)后糖化血紅蛋白糖化血紅蛋白下降百分率= X 100%試驗(yàn)前糖化血紅蛋白試驗(yàn)前糖化請紅蛋白 試驗(yàn)后糖化血清蛋白糖化血清蛋白下降百分率= X 100%試驗(yàn)