MS培養(yǎng)基配制

1、培養(yǎng)基的配制植物組織培養(yǎng)中常用的一種培養(yǎng)基是 MS 培養(yǎng)基。 MS 培養(yǎng)基的 配制包括以下步驟。培養(yǎng)基母液的配制和保存 MS 培養(yǎng)基含有近 30 種營養(yǎng)成分，為 了避免每次配制培養(yǎng)基都要對這幾十種成分進行稱量， 可將培養(yǎng)基中 的各種成分，按原量的 20 倍或 200倍分別稱量，配成濃縮液，這種 濃縮液叫做培養(yǎng)基母液。這樣每次使用時，取其總量的 1/20（50 mL） 或 1/200（5 mL） ，加水稀釋，制成培養(yǎng)液?，F(xiàn)將制備培養(yǎng)基母液所需 的各類物質(zhì)的量列出，供配制時使用。大量元素（母液I ）mg/ LNH 4NO333 000KNO338 000CaCb2H2O8 800MgSO4 7H2

2、O7400KH 2PO43 400微量元素（母液H ）KI166H3BO31 240Mn SO4 4H2O4 460ZnSO4 7H2O1 720Na2MoO4 2H2O50CuSO4 5H2O5CoCl2 6H2O5鐵鹽（母液皿）FeSO4 7H2O5560Na2-EDTA 2H2O7 460有機成分（母液W ）IV A肌醇 20 000IV B煙酸 100鹽酸吡哆醇 (維生素 B6)100鹽酸硫胺素 (維生素 B1)100甘氨酸 400以上各種營養(yǎng)成分的用量，除了母液I為 20倍濃縮液外，其余 的均為 200 倍濃縮液。上述幾種母液都要單獨配成1L的貯備液。其中，母液I、母液 H及母液V的

3、配制方法是：每種母液中的幾種成分稱量完畢后， 分別 用少量的蒸餾水徹底溶解，然后再將它們混溶，最后定容到 1 L。母液皿的配制方法是：將稱好的 FeSO4 7H2O和Na2-EDTA2H2O 分別放到 450 mL 蒸餾水中，邊加熱邊不斷攪拌使它們?nèi)芙?，然后?兩種溶液混合，并將 pH 調(diào)至 5.5，最后定容到 1 L ，保存在棕色玻璃 瓶中。各種母液配完后， 分別用玻璃瓶貯存，并且貼上標簽，注明母液 號、配制倍數(shù)、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。MS培養(yǎng)基中還需要加入 2, 4-二氯苯氧乙酸(2, 4-D)、萘乙酸 (NAA)、6芐基嘌呤(6BA)等植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，并且分別配成母液 (0.1

4、 mg/mL)。其配制方法是：分別稱取這 3種物質(zhì)各10 mg,將2, 4-D 和 NAA 用少量(1 mL) 無水乙醇預(yù)溶,將 6BA 用少量(1 mL) 的物 質(zhì)的量濃度為 0.1 mol/L 的 NaOH 溶液溶解,溶解過程需要水浴加熱, 最后分別定容至100 mL,即得質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的母液。配制培養(yǎng)液 用量筒或移液管從各種母液中分別取出所需的用 量：母液I為50 mL,母液H、皿、VA和V B各5 mL。再取2, 4-D 5 mL、 NAA 1 mL ,與各種母液一起放入燒杯中。配制培養(yǎng)液時應(yīng)注意： 在使用提前配制的母液時, 應(yīng)在量取各 種母液之前,輕輕搖動盛放母液的瓶子

5、,如果發(fā)現(xiàn)瓶中有沉淀、懸浮 物或被微生物污染，應(yīng)立即淘汰這種母液，重新進行配制；用量筒 或移液管量取培養(yǎng)基母液之前, 必須用所量取的母液將量筒或移液管 潤洗2次；量取母液時，最好將各種母液按將要量取的順序?qū)懺诩?上,量取 1 種,劃掉 1 種,以免出錯。溶化瓊脂 用粗天平分別稱取瓊脂9 g、蒸糖30 g,放入1 000 mL 的搪瓷量杯中，再加入蒸餾水 750 mL,用電爐加熱，邊加熱邊用玻璃棒攪拌， 直到液體呈半透明狀。 然后再將配好的混合培養(yǎng)液加入到煮沸的瓊脂中，最后加蒸餾水定容至 1 000 mL，攪拌均勻。需要注意的是， 在加熱瓊脂、制備培養(yǎng)基的過程中，操作者千萬 不能離開，否則沸騰的

6、瓊脂外溢，就需要重新稱量、制備。此外，如 果沒有搪瓷量杯， 可用大燒杯代替。 但要注意大燒杯底的外表面不能 沾水，否則加熱時燒杯容易炸裂，使溶液外溢，造成燙傷。調(diào) pH 用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為 1 mol/L 的 NaOH 溶液，逐滴 滴入溶化的培養(yǎng)基中，邊滴邊攪拌，并隨時用精密的 pH試紙（5 47 0）測培養(yǎng)基的pH, 直到培養(yǎng)基的pH為5 8為止（培養(yǎng)基的pH必須 嚴格控制在 5 8）。培養(yǎng)基的分裝 溶化的培養(yǎng)基應(yīng)該趁熱分裝。分裝時,先將培養(yǎng) 基倒入燒杯中, 然后將燒杯中的培養(yǎng)基倒入錐形瓶 （50 mL 或 100 mL） 中。注意不要讓培養(yǎng)基沾到瓶口和瓶壁上。 錐形瓶中培養(yǎng)基的量約為

7、 錐形瓶容量的 1/5 1/4。每 1 000 mL 培養(yǎng)基,可分裝 25 30 瓶。培養(yǎng)基分裝完畢后,應(yīng)及時封蓋瓶口。用 2 塊硫酸紙 （每塊大小 約為9 cm>9 cm）中間夾1層薄牛皮紙封蓋瓶口，并用線繩捆扎。最后 在錐形瓶外壁貼上標簽。高壓滅菌 培養(yǎng)基的高壓滅菌包括以下幾個步驟。 第一,碼放錐形瓶。將裝有培養(yǎng)基的錐形瓶直立于金屬小筐中, 再放入高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi)。 如果沒有金屬小筐, 可以在兩層錐形瓶之 間放一塊玻璃板隔開。第二,放置其他需要滅菌的物品。 將其他需要滅菌的物品也放入 高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi),如裝有蒸餾水的錐形瓶、帶螺口蓋的玻璃瓶、燒 杯、廣口瓶 （以上物品都要用牛皮紙封口 ）,用牛皮紙包裹的培