改良硫黃素S染色老人斑

1、改良硫黃素S老年斑（淀粉質(zhì)）染色目的： 用于鑒別 Alzheimers 病腦組織切片中的神經(jīng)纖維、扣結(jié)和老年斑。PRINCIPLE:切厚度為30卩m石蠟切片或冰凍切片，不用貼片而使用漂染法。玻 片染色用于熒光檢查領(lǐng)域。老年斑顯示為成群異常腫脹的神經(jīng)元突起或神經(jīng)突，因而被稱為“神經(jīng)炎”。老人 斑的可能由中心淀粉體和周圍放射狀腫脹神經(jīng)突構(gòu)成。對照： 含有老人斑的腦組織固定液： 10% 甲醛技術(shù)：切片30卩m，不要貼片。設(shè)備： 有蓋培養(yǎng)皿或小燒杯，彎頭玻棒。試劑：0.25% 高猛酸鉀：高猛酸鉀 Potassium permanganate0.25 gm蒸餾水 Distilled water100.0

2、 ml新鮮配制，用后丟棄。警告：腐蝕性。漂白液：亞硫酸鉀 Potassium metabisulfite1.0 gm草酸 Oxalic acid1.0gm蒸餾水 Distilled water100.0ml新鮮配制，用后丟棄。警告：腐蝕性。封閉液 Blocking Solution:氫氧化鈉 Sodium hydroxide1.0 gm過氧化氫 30% hydrogen peroxide3.0 ml蒸餾水 Distilled water100.0 ml新鮮配制，用后丟棄。警告：腐蝕性。0.25% 醋酸洗液 Acetic Acid Rinse:醋酸 Acetic acid0.25 ml蒸餾水 D

3、istilled water100.0 ml新鮮配制，用后丟棄。警告：腐蝕性。硫黃素S染色液：硫黃素 SThioflavine S0.0125 gm50%酒精 ethanol100.0 ml新鮮配制，用后丟棄。警告：毒性，易燃性。50.0 ml50.0 ml50% 酒精 Ethanol: 無水乙醇 Absolute ethanol 蒸餾水 Distilled water 警告：易燃性。 甘油凝膠： 詳見備用液。安全： 穿戴手套、護目鏡和白大衣。避免接觸和吸入。 高猛酸鉀：對眼睛和皮膚有刺激性，攝入可能引起嚴(yán)重胃腸道不適。強氧化劑。 草酸：可能引起眼睛、皮膚或口腔粘膜嚴(yán)重灼傷。侵入途徑：吸入、攝

4、入。影響靶 器官為泌尿和心血管系統(tǒng)，反復(fù)接觸能引起皮炎。腐蝕性。 過氧化氫：對皮膚有刺激性。 .氫氧化鈉：對眼睛和皮膚有強烈刺激性和腐蝕性。能引起灼燒。 程序：1. 石蠟切片，通過二甲苯和酒精脫蠟至水。2. 切片放入0.25%高猛酸溶液中漂染 20 minutes 。3. 蒸餾水稍洗。4. 切片放入漂白液中漂洗 2 minutes 。5. 蒸餾水稍洗。6. 切片放入封閉液中漂染 20 minutes 。7. 蒸餾水稍洗。8. 切片放入 0.25%醋酸液中漂洗 5 seconds.9. 蒸餾水稍洗。10. 將切片裱于載玻片上涼干、玻片保持平放。11. 玻片用蒸餾水稍洗。12. 滴上硫黃素S染液染

5、3-5 minutes.13. 50% 酒精沖洗 2次。14. 蒸餾水沖洗 2次。15. 甘油凝膠封裱。結(jié)果： 老人斑和神經(jīng)纖維扣結(jié)熒光 背景黑色參考文獻：R.Guntern, C.Bouras, P.R.Hof And P.G.Vallett, An Improved Thioflavine S Method For Staining Neurofibrillary Tangles And Senile Plaques In Alzheimers Disease, 1992Powers, J.M., Making the Diagnosis of Alzheimers Disease, AS

6、C1P9/9C2APFall Meeting, Oct. 10-16, 1992程序卡：改良硫黃素S老年斑（淀粉質(zhì)）染色對照： 含有老人斑的腦組織 固定液： 10% 甲醛 技術(shù)：切片30卩m，不要貼片。程序：1. 石蠟切片，通過二甲苯和酒精脫蠟至水。2. 切片放入 0.25% 高猛酸溶液中漂染 20 minutes3. 蒸餾水稍洗。4. 切片放入漂白液中漂洗 2 minutes 。5. 蒸餾水稍洗。6. 切片放入封閉液中漂染 20 minutes 。7. 蒸餾水稍洗。8. 切片放入 0.25% 醋酸液中漂洗 5 seconds.9. 蒸餾水稍洗。10. 將切片裱于載玻片上涼干、玻片保持平放。1

7、1. 玻片用蒸餾水稍洗。12. 滴上硫黃素 S 染液染 3-5 minutes.13. 50% 酒精沖洗 2 次。14. 蒸餾水沖洗 2 次。15. 甘油凝膠封裱。 結(jié)果： 老人斑和神經(jīng)纖維扣結(jié)熒光，背景黑色0.25% 高猛酸鉀：高猛酸鉀 Potassium permanganate 0.25 gm 蒸餾水 Distilled water100.0 ml新鮮配制，用后丟棄。警告：腐蝕性。 漂白液： 亞硫酸鉀 Potassium metabisulfite1.0 gm草酸 Oxalic acid1.0gm蒸餾水 Distilled water100.0ml新鮮配制，用后丟棄。警告：腐蝕性。封閉液 Blocking Solution:氫氧化鈉 Sodium hydroxide1.0 gm過氧化氫 30% hydrogen peroxide3.0 ml蒸餾水 Distilled water100.0 ml新鮮配制，用后丟棄。0.25% 醋酸洗液 Acetic Acid Rinse:醋酸 Acetic acid0.25 ml蒸餾水 Distilled water100.0 ml新鮮配制，用后丟棄。警告：腐蝕性。硫黃素S染色液：硫黃素 SThioflavine S0.0125 gm50