張小茜 中藥常用檢驗方法介紹

1、 中藥常用檢驗方法介紹 藥品檢驗包括性狀、鑒別、檢查、浸出物、含量測定等。 （一）性狀：藥材首先要從其來源進行判斷，對于多品種來源的藥材，要注意區(qū)分，因為有些檢驗項目的限度可能不同，比如砂仁，其來源有陽春砂、綠殼砂和海南砂，它們的揮發(fā)油含量測定限度就不同，陽春砂、綠殼砂種子團含揮發(fā)油不得少于3.0%（ml/g），而海南砂種子團含揮發(fā)油不得少于1.0%（ml/g）；其次要對藥材進行以下幾項特征的描述，如形狀、大?。ㄩL短、粗細、厚度等）、色澤、表面、質(zhì)地、斷面（折斷面或切斷面）、氣味等。 制劑性狀的描述要按顏色、外形、氣、味依次描述。如有兩種顏色，應(yīng)先描述淺的，后描述深的（如本品為無色或微黃色的澄

2、清液體）；如果用兩種色調(diào)復(fù)合描述顏色時，以后一種色調(diào)為主。如棕褐色，即以褐色為主，黃棕色即以棕色為主；中藥在儲存期間顏色往往變深，描述時可根據(jù)實際情況規(guī)定幅度（如本品為黃色至棕褐色的水丸）。 （二）鑒別：包括經(jīng)驗鑒別、顯微鑒別、理化鑒別。 1經(jīng)驗鑒別： 用簡便易行的傳統(tǒng)方法觀察樣品的顏色變化、浮沉情況以及爆鳴、色焰等特征。如：麝香中的鑒別（2）取麝香粉末少量，置手掌中，加水潤濕，用手搓之能成團，再用手輕柔即散，不應(yīng)粘手、染手、頂指或結(jié)塊。血竭的鑒別（1）取本品粉末，置白紙上，用火隔紙烘烤即熔化，但無擴散的油跡，對光照視呈鮮艷的紅色。以火燃燒則產(chǎn)生嗆鼻的煙氣。 2顯微鑒別： 顯微鏡觀察藥材切片、

3、粉末或表面等的組織、細胞或內(nèi)含物等特征。有些藥材既有橫切面的顯微特征，又有粉末的特征，如黃芪；有些藥材則僅有橫切面的特征，如黃連、麻黃等。另外要注意多品種來源的藥材，其顯微上的差異，如黃連有味連、雅連、云連之分，味連在皮層、中柱鞘有石細胞，髓部無石細胞，雅連在皮層、中柱鞘、髓部均有石細胞，而云連在皮層、中柱鞘、髓部均無石細胞。 3理化鑒別： 用化學(xué)和物理的方法，對藥材中所含某些化學(xué)成分進行鑒別試驗。色譜鑒別都歸于理化鑒別。 （1）用熒光法鑒別：將藥材（包括斷面、浸出物等）、制劑經(jīng)酸、堿處理后，在紫外光燈下觀察所產(chǎn)生的熒光。如蘆薈，取粉末0.5g，加水50ml，振搖，濾過，取濾液5ml，加硼砂0

4、.2g，加熱使溶解，取溶液數(shù)滴，加水30ml，搖勻，顯綠色熒光，置紫外光燈（365nm）下觀察，顯亮黃色熒光。 （2）用微量升華法鑒別：如大黃微量升華后，可見菱狀針晶或羽狀針晶。 （3）顯色、沉淀、泡沫反應(yīng)等：比如黃酮類的鹽酸鎂粉反應(yīng)，生物堿的沉淀反應(yīng)，皂苷類的泡沫反應(yīng)等。 （4）一般鑒別試驗：指鈣鹽、鈉鹽等鑒別反應(yīng)，此類鑒別一般列有一項以上的試驗，應(yīng)逐項進行試 1 項，第一項為與氯化鋇試液生成白色沉淀，驗，不得任選其中之一作為依據(jù)，如硫酸鹽的鑒別共有3在醋酸銨試液或氫氧化鈉試液中沉淀在鹽酸或消酸中不溶解；第二項為與醋酸鉛試液生成白色沉淀，項或所以不能只做前1不溶解；加鹽酸不能生成白色沉淀。最

5、后一項是硫酸鹽與硫代硫酸鹽的區(qū)別， 2項，否則不能下“硫酸鹽呈正反應(yīng)”的結(jié)論。 5）薄層色譜鑒別：采用最多的一種色譜鑒別方法。（聚酰胺薄膜,薄層板：市售薄層板：普通薄層板和高效薄層板，有硅膠薄層板，硅膠AGF254薄層板 分鐘，聚酰胺薄膜不需活化。等，臨用前110活化30微晶纖維素等，制備時，一般HF254,GF254，硅膠H，硅膠自制薄層板：常用固定相有硅膠G，硅膠分鐘，置干燥 30 份固定相和3份水在研缽中按同一方向研磨。鋪好的薄層板室溫晾干，110烘1 器中備用。 點樣：一般為圓點狀或窄細的條帶狀B 高效薄層板普通薄層板 8-10 點樣基線距底邊（mm） 10-15 2 3 mm） 原點

6、直徑（4-8 5-10 條帶寬度（mm） 5 8 mm） 點間距離（5-8 8-15 展開距離（mm） ，上行展開。展開前如需溶劑蒸氣預(yù)平衡，可在展開缸中展開：浸入展開劑的深度為距原點5mmC分鐘，溶劑蒸氣預(yù)平衡后，展開；如需使展開缸達到溶劑蒸氣飽加入適量展開劑，密閉，保持5-30 和狀態(tài)，則須在展開缸的內(nèi)側(cè)放置與展開缸內(nèi)徑同樣大小的濾紙，達到飽和后展開。 此外，還有紫外鑒別（香加皮）、液相鑒別和氣相鑒別（安宮牛黃丸）等。 檢查（三）：常見的有雜質(zhì)、水分、總灰分、酸不溶性灰分、重金屬及有害元素、砷鹽、有機氯農(nóng)藥殘留量、含氮量、總固體等。 本版藥典藥材在雜質(zhì)、水分、總灰分、酸不溶性灰分等四項有了

7、大幅增長。 1雜質(zhì)：包括來源與規(guī)定相同，但其性狀或部位與規(guī)定不符；來源與規(guī)定不同的物質(zhì)；無機雜質(zhì)，如沙石、泥塊、塵土等。計算時分別計算三者。如麻黃、銀杏葉等。 2水分： 第一法 第二法 第三法 第四法 氣相色譜法 減壓干燥法 烘干法甲苯法 含有揮發(fā)性成不含或少含揮發(fā)含揮發(fā)性成貴重藥品 適用范圍分的貴重藥品 性成分的藥品分的藥品 2 約相當于含約相當于含1g 5g 0.5取樣 20.2g 水水14ml 減壓干燥法需要以下的可以不破碎；的顆?；蛩槠?；直徑在3mm供試品先破碎成直徑不超過3mm 通過二號篩。）供試品于該稱量瓶中2g：首先將空稱量瓶干燥至恒重，再稱取2-5g（一般取第一法（烘干法）分鐘

8、，精5h，冷卻30，疏松供試品不超過 10mm ），精密稱重，100105干燥（厚度不超過 5mm ，稱重，后兩次差異不超過5mg為止。密稱重，再干燥1h，冷卻（時間與前一次相同）干燥至恒重、以下的重量。一般敘述為：恒重的概念：連續(xù)兩次干燥或熾灼后稱重的差異在0.3mg熾灼至1小時后進行；熾灼至恒重。干燥至恒重的第二次及以后各次稱重均應(yīng)在規(guī)定條件下繼續(xù)干燥 30分鐘后進行。恒重的第二次及以后各次稱重均應(yīng)在規(guī)定條件下繼續(xù)熾灼注意：空稱量瓶和取樣后的稱量瓶放入烘箱，應(yīng)將瓶蓋半開或打開，放入干燥器后應(yīng)蓋住瓶蓋； 稱量瓶在干燥器中放置時間應(yīng)嚴格掌握，幾次稱量放置時間應(yīng)一致。 以黃柏舉例： 天平型號：天

9、平編號：水分：（ g ） 21.3342 105空瓶恒重： 21.3343 2.0560 取樣： 23.2198 小時：105干燥 5 23.2187 1 小時：105干燥 8.3% 水分： 不得過12.0標準規(guī)定： 符合規(guī)定結(jié)論： 21.3342+2.0560-23.2187 8.34% 100% 計算：×2.0560 3 ：以廣藿香為例第二法（甲苯法），那么4ml14.0% 首先是如何取樣：廣藿香水分限度是不得過，按照規(guī)定取樣約相當于含水1 1.4ml。10g，按照14.0% 計算，相當含水最少要取，將水分測定儀包括兩部分，短頸圓底燒瓶和水分測定管（全部儀器應(yīng)清潔，并置烘箱中烘干

10、），200ml（必要時可加少許玻璃珠或沸石，防止暴沸）樣品放入500ml的短頸圓底燒瓶中，加甲苯約/2滴安裝好后，從冷凝管頂端加入甲苯，使充滿水分測定管。用電熱套進行加熱，注意回流速度（；這時用甲苯?jīng)_洗冷凝管，用銅絲將水分測秒），回流時間（水分完全蒸餾出來，水分讀數(shù)不再增加）分鐘，最后應(yīng)放置，使水分與甲苯完全分離后方可讀數(shù)。計算比定管支管壁的水分推下，繼續(xù)蒸餾5 較簡單，用出水量除以取樣量即可。 天平編號：水分：天平型號： 15.0025 g 取樣： 1.2ml 出水量： 8.0 % 水分： 不得過 14.0 標準規(guī)定： 符合規(guī)定結(jié)論： ：樣品應(yīng)過二號篩，空稱量瓶與加樣后的稱量瓶干燥條件應(yīng)一致

11、，減壓至第三法（減壓干燥法）小時，分別只需稱取一個數(shù)，不像烘干法每個至 24 20mmHg）以下持續(xù)半小時，室溫放置2.67kPa（ 少需要兩個數(shù)。 注意：用五氧化二磷干燥時，干燥劑應(yīng)保持在有效狀態(tài)，結(jié)塊或結(jié)膜時應(yīng)更換。 干燥失重與水分減壓干燥法的區(qū)別：項目 干燥失重 水分減壓干燥法 與樣品相同恒重（至少兩個數(shù)） 空稱量瓶 小時24減壓后，室溫放置 樣品稱量瓶+ 恒重（至少兩個數(shù)）: 總灰分3，將空的坩堝熾灼至恒重；將，比如固定為550500-600首先確定一下熾灼的溫度，要求是稱定重量，）3-5g，置上述恒重的坩堝中，取樣2-3g樣品過二號篩后，稱?。ㄈ珥殰y定酸不溶性灰分， 在電爐上熾熱至完

12、全炭化，再置馬福爐中至灰化并恒重。根據(jù)殘留量計算總灰分的百分含量。 4酸不溶性灰分，用表面皿覆蓋坩堝，水浴在灰分的基礎(chǔ)上做，取上述灰分，在坩堝中小心地加入稀鹽酸10ml沖洗，洗液并入坩堝中，用無灰濾紙濾過，坩堝內(nèi)的殘渣用水洗5ml分鐘，表面皿用熱水10上加熱。AgNO3于濾紙上，不斷洗滌，至洗液不顯氯化物反應(yīng)為止（將洗液滴至溶液中，不再生成白色沉淀） 4 濾渣和濾紙置同一坩堝中，干燥，熾灼至恒重。根據(jù)殘留重量計算酸不溶性灰分的百分含量。 以當歸為例：實驗中坩堝應(yīng)加蓋 編號：）：天平型號： 總灰分（g 28.5625 空坩堝550恒重： 28.5624 3.0245 取樣： 緩緩熾灼，炭化，55

13、0完全灰化 28.6691 坩堝+樣品恒重： 28.6688 3.52% 結(jié)果：7.0% 不得過標準規(guī)定： 符合規(guī)定結(jié)論：28.6688-28.5624 3.52% 100% 計算： ×3.0245 酸不溶性灰分：分鐘，洗滌，定量濾紙濾過，殘渣用水10上項所得灰分，加入稀鹽酸10ml，表面皿覆蓋，水浴 洗于濾紙上，并洗至洗液不顯氯化物反應(yīng)。濾渣連同濾紙移至同一坩堝內(nèi)，干燥，熾灼恒重。 28.5788 樣品恒重：550坩堝+ 28.5787 0.5% 結(jié)果：2.0% 標準規(guī)定： 不得過 結(jié)論： 符合規(guī)定28.5787-28.5624 0.54% 100% 計算： ×3.024

14、5 重金屬及有害元素5版藥典收載的六個品種要做這一項，否則不能2005按照附錄鉛、鎘、砷、汞、銅測定法測定， 算全檢，六個品種是：黃芪、甘草、白芍、丹參、金銀花、西洋參。）和電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定方法有兩種（任選其一）：原子吸收分光光度法（ AAS 應(yīng)用最為普遍。按照原子化 AAS ICP-MS （）。雖然后者最為先進，但其價格很高，所以目前還是以, As Pb, Cd Hg Cu 方式不同，分為四種測定方式，采用火焰法，采用冷吸收法，采用石墨爐法 5 采用氫化物法。 干法灰化濕法消化 C. 供試品消解的方法有三種：A. 微波消解 B. 測定元素 消解方法 A、 B、C 鉛A鎘 、B、C

15、A、B 砷 A、B（需控制溫度120左右） 汞 C 、B銅 、A 三種消解方法： A：微波消解： 7ml 取樣 5 0.5g，加硝酸 微波消解爐內(nèi)進行消解 以溫度控制方式進行消解最好 嚴格遵守操作規(guī)程和安全使用守則 版藥典中列為首選方法（第一法）。2005目前，最先進的元素分析樣品前處理方法，在 B：濕法消解： 14高氯酸（：）的混合溶液為消化液-以硝酸 14-電加熱板通過調(diào)整電壓，控制反應(yīng)液溫度以硝酸高氯酸（：）的混合溶液為消化液 C：干法灰化：繼續(xù)灰450450500 樣品干燥，除去水分高溫灰化放冷后加少量硝酸潤濕在 化放冷，以2%硝酸溶解 6農(nóng)藥殘留量測定： 農(nóng)藥分類： 按照用途：殺蟲劑

16、、殺螨劑、殺菌劑、殺線蟲劑、除草劑、植物生長調(diào)節(jié)劑等。 按照結(jié)構(gòu)特點：有機氯類、有機磷類、菊酯類、氨基甲酸酯類，有機硫類、有機雜環(huán)類、砷汞類等。 農(nóng)藥殘留量測定：有機氯農(nóng)藥殘留量、有機磷類農(nóng)藥殘留量、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留版有機氯類農(nóng)藥殘留量按照附錄農(nóng)藥殘留量測定法中的有機氯類農(nóng)藥殘留量測定法測定， 2005 ） PCNB 、五氯硝基苯（ DDT 、滴滴涕（總）藥典收載的品種有黃芪、甘草，測定六六六（總BHC） BHC限度：六六六（總）千萬分之二 滴滴涕（總）千萬分之二 DDT 6 ）千萬分之一五氯硝基苯（ PCNB 但附錄農(nóng)藥殘留量測定法中還有有機磷類農(nóng)藥殘留量測定法和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量測

17、定法， 正文中尚未涉及相關(guān)品種。氣相色譜法是目前農(nóng)藥殘留分析中的最重要的檢測手段，主要用于具有一定揮發(fā)性的農(nóng)藥檢測， 以上農(nóng)藥殘留量分析是基于氣相色譜法完成的。采用的檢測器：目前 70% -14，線性范圍可達1×10g/ml電子捕獲檢測器（ECD）只對具有電負性的物質(zhì)有響應(yīng)，檢測靈敏度可達4 ,10擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留分析中獲得廣泛的應(yīng)用。，在含有鹵素的有機氯類43，是有機磷類和有,磷的化合物有響應(yīng)，靈敏度較高，線性范圍1010氮磷檢測器（NPD）只對含氮 機氮類農(nóng)藥殘留檢測的首選檢測器。 ,含磷類農(nóng)藥殘留量的檢測。火焰光度檢測器（ FPD ）廣泛用于含硫除重金屬和農(nóng)藥殘留問題外，中

18、藥用硫磺熏，以漂白、增艷、防蟲雖是傳統(tǒng)加工方法，但現(xiàn)代研等重金屬，本版藥典將山藥、葛根等加工方法中的、HgSO及As究證明由此會使中藥材殘留大量的2年版增補本中增加二氧化硫殘留2005硫黃熏刪除，即表示中藥材以后不允許再用硫黃熏，并擬將在 量測定法。：分為水溶性浸出物、醇溶性浸出物、揮發(fā)性醚浸出物，前兩者中又包含有冷浸法和（四）浸出物 熱浸法。樣品均需過二號篩，揮發(fā)性醚浸出物中，樣品需過四號篩。水溶性浸出物 醇溶性浸出物 揮發(fā)性醚 浸出物 2-5g 取樣量 冷浸法：4g 熱浸法：2-4g 水 規(guī)定濃度乙醇 乙醚 提取溶劑 冷浸、回流索氏提取提取方式 提取時間 冷浸法：前6小時內(nèi)時時振搖，再靜置

19、18小時 小時回流8 熱浸法：靜置1小時，回流1小時 注意事項：加入的提取溶劑量與取樣量有關(guān)，冷浸法取樣4g，即加入溶劑100ml，熱浸法取2g時加50ml溶劑，取4g時加100ml；揮發(fā)性醚浸出物原來采用的時硫酸干燥器，這次改為五氧化二磷干燥器；浸出物的計算藥材一定要按干燥品計算。 以當歸為例： 【浸出物】天平型號： 編號： 1 2 取樣： 2.0035 2.0052 精密加入 70 乙醇 50ml ，密塞 7 135.27 152.40 稱重 乙醇補足減失的重量，1小時，放冷，用70靜置1小時，回流135.27 152.40 蒸干搖勻，濾過，精密量取25ml 37.2236 36.5022

20、 空皿恒重：37.2235 36.5024 3hr 37.7787 37.0584 樣105皿+: 37.7787-37.2235 計算60.24% × 100% （ 1 ） -8.0%) 2.0035/50× 25 ×(1 37.0584-36.5022 60.30% 100% （ 2 ） × -8.0%) 2.0052/50× 25 ×(1 ）平均 60.3% 符合規(guī)定（不得少于 45.0% 需要注意的是，藥材浸出物計算時一定要扣除水分，而制劑中按要求計算，如果在標準中提到： 本品按干燥品計算，則需扣除水分，否則不用。 （五）含量

21、測定： ）1.高效液相色譜法（HPLC）色譜柱：最常用的填充劑為化學(xué)鍵合硅膠。反相色譜系統(tǒng)使用非極性填充劑，以十八烷基鍵合（1氨基柱等，正相色譜系統(tǒng)使用極性填充劑，常用的柱，氰基柱,C8硅膠最為常用，即C18，其他還有時與硅2，大于應(yīng)為2-88時可使載體硅膠溶解，小于填充劑有硅膠等。使用時要注意流動相的pH 膠相連的化學(xué)鍵合相易水解脫落。對于新的色譜柱，一般采用甲醇進行洗脫。）檢測器：最常用的檢測器為紫外檢測器，其他常見的有二極管陣列檢測器、熒光檢測器、示差2（ 檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器、電化學(xué)檢測器和質(zhì)譜檢測器。）流動相：可采用固定比例（等度洗脫）或按規(guī)定程序改變比例（梯度洗脫）的溶劑組成作

22、為流（3。柱5%C18動相系統(tǒng)。若使用柱，不管是分析還是沖柱子，流動相中有機溶劑的比例通常應(yīng)不低于最后一般沖柱子使用的溶劑為：5%甲醇遞增的不同濃度的甲醇甲醇，子使用后要及時進行沖洗，柱子一般停留在甲醇或高濃度乙腈中，并將柱子兩頭封好，避免污染，損壞柱子。當我們使用含鹽流動相測定樣品時，應(yīng)當先用低醇水洗脫，以免柱子中的甲醇與流動相中的鹽作用，形成結(jié)晶，堵塞柱 子，同樣，使用后先以低醇水沖洗。 8 試驗中，除固定相種類、流動相組成、檢測器類型不得改變外，其余如色譜柱的內(nèi)徑、長度、固定相牌號、載體粒度、流動相流速、混合流動相各組成比例、梯度洗脫程序中的時間長度、柱溫、進樣量、檢測器的靈敏度等，均可

23、適當改變。系統(tǒng)適用性試驗中，要考察色譜柱的理論板數(shù)、分離度、 重復(fù)性、拖尾因子。 舉例： 等度洗脫：以黃芩為例。A.，470ml）配制，以1000ml為例，取甲醇-水磷酸（47：53：0.2色譜柱為C18柱，流動相為甲醇-，混勻，脫氣，如果儀器有在線脫氣裝置，混勻就可使用，無在線2ml加入超純水530ml，再加磷酸脫氣就需要脫氣，脫氣的方式有多種，比如超聲，過濾膜，通氦氣，前兩種比較常用，如果流動相中 含鹽或離子對時，即使有在線脫氣也要過濾膜。小時，按規(guī)定濃度配制，標準操作規(guī)程要求60減壓干燥4對照品溶液的制備：黃芩苷對照品 份，但遇到不合格樣品時，需配2份復(fù)檢。配制2份，但中藥對照品比較貴，

24、目前可以配制1 供試品溶液的制備，按標準制備。，一RSD（相對標準偏差）實驗中，要考察系統(tǒng)適用性，首先是重復(fù)性，對照品連進5針，計算；其次是理論板數(shù)，用供試品中主成分峰（黃芩苷峰）計算，有些儀器可自動小于2.0%般要求RSD2 （n=5.54t/W）給出，計算按下式：R。分離度和拖尾因子有時根據(jù)峰形，即可判斷，若兩峰完全分離，分離度一定大2500n應(yīng)大于規(guī)定的 ，這兩項藥典上都有公式，不再詳細介紹了。于1.5 黃芩苷的含量要按干燥品計算，所以隨行要做水分，扣除水分即可。 樣品×對照品取樣量/稀釋倍數(shù)×進樣量計算： A ×100%) (1-水分 A對照品×

25、樣品取樣量/稀釋倍數(shù)×進樣量 梯度洗脫：人參B ：乙腈A B：水流動相： A% 時間（分鐘）B% 81 19 0-35 8171 29 1935-55 71 29 55-70 9 60 40 7170-100 29 在這個流動相中，有等度，有梯度。 TLCS）2薄層色譜掃描法（一般選擇反射按照規(guī)定方式掃描測定，測定時可根據(jù)不同薄層掃描儀的特點，使用市售薄層板。供試品斑點的量應(yīng)在線性范圍掃描方法可采用單波長掃描或雙波長掃描，式，采用吸收法或熒光法。測定和計算。掃描、內(nèi)，必要時可適當調(diào)整供試品溶液的點樣量，供試品與對照品應(yīng)同板點樣、展開、每份點樣不得少份，通常采用線性回歸二點法計算，供試品與對照品應(yīng)交叉點樣，供試品平行操作2 個。掃描時，應(yīng)沿展開方向掃描，不可橫向掃描。于2個，對照品每一濃度不得少于2只須在薄層板上覆蓋同比如中青黛中靛玉紅的測定，注意：對于無須顯色的樣品來說比較簡單，如枸杞結(jié)果的準確與否與顯色的均勻度有很大關(guān)系，樣大小的玻璃板，而對于需要顯色的樣品來說， 子中的甜菜堿，要噴以新配制的改良碘化鉍鉀，并放置1-3小時至