葉綠體中色素的提取和分離

1、【實(shí) 驗(yàn)】葉綠體中色素的提取和分離葉綠體中色素的提取和分離 主講人：主講人： 段段 娜娜 肖祖文肖祖文 助助 理：谷維佳理：谷維佳 黃素芬黃素芬 孫捷吉孫捷吉 馬牧原馬牧原 周梟楠周梟楠色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膙 進(jìn)行綠葉中色素的提取和分離v 探究綠葉中含有色素種類(lèi)數(shù)目和顏色v 培養(yǎng)合作和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)精神 色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)二、實(shí)驗(yàn)原理v 提取提?。喝~綠體色素易溶于無(wú)水乙醇（酒精、汽油、苯、石油醚等）等有機(jī)溶劑中，可以用無(wú)水乙醇提取綠葉中的葉綠體色素。v 分離分離：紙層析法 不同的葉綠體色素隨層析液在濾紙上擴(kuò)散速度不同。不同的色素會(huì)在擴(kuò)散過(guò)程中分離開(kāi)來(lái)，形成條帶。 （色素在層析液中溶解

2、度不同，溶解度高的色素分子隨層析液在濾紙條上的擴(kuò)散速度快，溶解度低的色素分子隨層析液在濾紙條上的擴(kuò)散速度慢，因而可用層析液將不同的色素分離。） 色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)三、實(shí)驗(yàn)材料【實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料】：新鮮新鮮菠菜綠葉菠菜綠葉【實(shí)驗(yàn)藥品實(shí)驗(yàn)藥品】：層析液（汽油：石油醚：丙酮：苯層析液（汽油：石油醚：丙酮：苯=20:2=20:2：2:12:1），無(wú)水乙），無(wú)水乙 醇，石英砂醇，石英砂，碳酸鈣，碳酸鈣【實(shí)驗(yàn)用具實(shí)驗(yàn)用具】：研缽研缽，藥匙，紗布，小燒杯，干燥濾紙，藥匙，紗布，小燒杯，干燥濾紙， 剪刀，試管，毛細(xì)吸管，棉塞剪刀，試管，毛細(xì)吸管，棉塞色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)提取葉綠體色素v 取材取材：取新鮮菠菜

3、葉取新鮮菠菜葉5g5g，撕去葉脈，盡量剪碎，放入研缽。，撕去葉脈，盡量剪碎，放入研缽。v 研磨研磨：向研缽中放入少量向研缽中放入少量石英砂石英砂和和碳酸鈣碳酸鈣（量約為藥匙的（量約為藥匙的1/31/3），），加入加入6ml6ml無(wú)水乙醇無(wú)水乙醇，充分、迅速地研磨至勻漿狀態(tài)。，充分、迅速地研磨至勻漿狀態(tài)。v 過(guò)濾過(guò)濾：在小燒杯上放上在小燒杯上放上4 4層紗布，將研磨液倒入小燒杯，過(guò)層紗布，將研磨液倒入小燒杯，過(guò)v 濾制備得到濾液。濾制備得到濾液。【注注】p加石英砂是為了使研磨充分加石英砂是為了使研磨充分p加碳酸鈣是為了防止葉綠體色素被破壞加碳酸鈣是為了防止葉綠體色素被破壞p加入加入CaCOCaC

4、O3 3和石英砂的量均很少，無(wú)水乙醇的量不應(yīng)太少和石英砂的量均很少，無(wú)水乙醇的量不應(yīng)太少四、實(shí)驗(yàn)步驟色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)v 制備濾紙條制備濾紙條：將干燥的定性濾紙剪成長(zhǎng)與寬略小于試管將干燥的定性濾紙剪成長(zhǎng)與寬略小于試管長(zhǎng)與寬的濾紙條，將其一端剪去兩個(gè)角，并在距這一端長(zhǎng)與寬的濾紙條，將其一端剪去兩個(gè)角，并在距這一端1cm1cm處用鉛筆劃線。處用鉛筆劃線。v 畫(huà)濾液細(xì)線畫(huà)濾液細(xì)線：用毛細(xì)吸管吸取少量濾液，用毛細(xì)吸管吸取少量濾液，沿鉛筆線均勻沿鉛筆線均勻畫(huà)出細(xì)線畫(huà)出細(xì)線（細(xì)而齊）（細(xì)而齊）。待濾液干后，。待濾液干后，重復(fù)畫(huà)線重復(fù)畫(huà)線3-43-4次。次?！咀⒆ⅰ縫畫(huà)濾液線時(shí)盡量畫(huà)直、畫(huà)細(xì)、畫(huà)濃畫(huà)濾液線

5、時(shí)盡量畫(huà)直、畫(huà)細(xì)、畫(huà)濃p每次畫(huà)完，要等濾液干時(shí)再重復(fù)畫(huà)，以防濾液擴(kuò)散開(kāi)使濾液線過(guò)每次畫(huà)完，要等濾液干時(shí)再重復(fù)畫(huà)，以防濾液擴(kuò)散開(kāi)使濾液線過(guò)寬，影響結(jié)果寬，影響結(jié)果分離葉綠體色素四、實(shí)驗(yàn)步驟色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)v 固定裝置：固定裝置：將將3 3mLmL層析液倒入試管中，將畫(huà)好線的濾層析液倒入試管中，將畫(huà)好線的濾紙條紙條插入層析液中插入層析液中，用棉，用棉塞塞塞緊試管口塞緊試管口。v 觀察現(xiàn)象：觀察現(xiàn)象：10min10min后，將濾紙條取出，風(fēng)干。觀察色素后，將濾紙條取出，風(fēng)干。觀察色素帶及其顏色，作好記錄。帶及其顏色，作好記錄?！咀⒆ⅰ縫放濾液條時(shí)，要避免放濾液條時(shí)，要避免濾液細(xì)線濾液細(xì)線浸沒(méi)到浸

6、沒(méi)到層析液。不要讓濾紙條貼在層析管層析液。不要讓濾紙條貼在層析管壁上。壁上。p層析液中一些成分易揮發(fā)，要避免開(kāi)放在空氣中。層析液中一些成分易揮發(fā)，要避免開(kāi)放在空氣中。分離葉綠體色素四、實(shí)驗(yàn)步驟1 1、選材時(shí)應(yīng)注意選擇鮮嫩、色濃綠、無(wú)漿汁的菠菜葉片。、選材時(shí)應(yīng)注意選擇鮮嫩、色濃綠、無(wú)漿汁的菠菜葉片。2 2、研磨要快，收集的濾液要用棉塞塞住，層析時(shí)要加蓋，、研磨要快，收集的濾液要用棉塞塞住，層析時(shí)要加蓋，盡量減少有機(jī)溶劑的揮發(fā)。（無(wú)水乙醇和層析液都易盡量減少有機(jī)溶劑的揮發(fā)。（無(wú)水乙醇和層析液都易揮發(fā)、易燃且有一定毒性）揮發(fā)、易燃且有一定毒性）3 3、每次點(diǎn)樣前要把燒杯中的濾液搖勻。、每次點(diǎn)樣前要把

7、燒杯中的濾液搖勻。4 4、盡量避免手上的雜質(zhì)沾到濾紙條上。、盡量避免手上的雜質(zhì)沾到濾紙條上。5 5、實(shí)驗(yàn)時(shí)保持通風(fēng)，安全操作、實(shí)驗(yàn)時(shí)保持通風(fēng)，安全操作6 6、實(shí)驗(yàn)注重團(tuán)隊(duì)合作，組員們共同完成實(shí)驗(yàn)。、實(shí)驗(yàn)注重團(tuán)隊(duì)合作，組員們共同完成實(shí)驗(yàn)。五、注意事項(xiàng)色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果葉綠素的提取與分離你的疑問(wèn)？你的疑問(wèn)？七、實(shí)驗(yàn)總結(jié) 葉綠體中的色素能夠在濾紙上彼此分離的原因是（ ）A色素提取液中色素已經(jīng)分層B陽(yáng)光的照射使不同色素彼此分開(kāi)C乙醇有使色素溶解并彼此分離的特性D各種色素在濾紙上隨層析液擴(kuò)散的速度不同 加SiO2、加CaCO3的目的分別是 ：研磨充分；保護(hù)葉綠素研磨充分；保護(hù)葉綠素。 為什

8、么濾液細(xì)線越細(xì)、越齊越好？防止色素帶之間部分重疊。防止色素帶之間部分重疊。 為什么層析液不能沒(méi)及濾紙條的濾液細(xì)線？ 防止色素溶解在層析液中，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。防止色素溶解在層析液中，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。八、課堂反饋D聚焦高考（2012上海理綜17）圖6表示葉綠體色素提取分離實(shí)驗(yàn)中紙層析的結(jié)果，據(jù)圖判斷用作實(shí)驗(yàn)材料的葉片顏色為（ ） A紅色 B黃色 C綠色 D紫色B聚焦高考（2011江蘇生物4）某研究組獲得了水稻的葉黃素缺失突變體。將其葉片進(jìn)行了紅光照射光吸收測(cè)定和色素層析條帶分析（從上至下），與正常葉片相比，實(shí)驗(yàn)結(jié)果是（ ） A.光吸收差異顯著，色素帶缺第2條 B.光吸收差異不顯著，色素帶缺第2條 C.光吸收差異顯著，色素帶缺第3條 D.光吸收差異不顯著，色素帶缺第3條B （1）二氧化硅（SiO2） 使