實(shí)驗(yàn)七酵母RNA的提取及鑒定

1、姓名:郭沈杰年級(jí)專業(yè)：2012級(jí)生物科學(xué)同組者：蔡萍萍學(xué)號(hào)：12050011012實(shí)驗(yàn)七酵母RNA的提取及鑒走一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆障A法提取酵母RNA的原理和方法。二實(shí)驗(yàn)原理酵母核酸中RNA含量較多，DNA含呈則少于2%0 RNA可溶于堿性溶液，當(dāng)堿被中和 后，可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。用堿液提取的RNA有不同程度的降解。三、實(shí)驗(yàn)儀器1、離心機(jī)2、水浴鍋3、電爐4、饒杯5、呈筒6、移液管7、玻璃棒8、濾紙10、試劑瓶llx電子天平12、pH 試紙（pHl14）實(shí)驗(yàn)試劑1、干酵母粉2、0.2%氫氧化鈉溶液：2g氫氧化鈉溶于蒸懾水并稀釋至1000mlo3、乙酸（A.R.）4、95%乙醇5

2、、無水乙B （ A.R.）6、10%硫酸:濃硫酸（比重1.84 ） 10ml,緩緩傾于水中稀釋至lOOmL7、氨水（A.R.）& 5%硝酸銀溶液：5g硝酸銀溶于蒸諂水并稀釋至100ml ,貯于棕色瓶中。五. 實(shí)驗(yàn)步驟（-）RNA的提取:1、稱取2g干酵母粉于100ml燒杯中，加入0.2%氫氧化鈉溶液10ml,沸水浴加熱30分鐘，經(jīng)常攪拌（如沸水浴過程中溶液蒸干可再加58ml氫氧化鈉X冷卻,然后加入乙酸數(shù)滴，使提取液呈酸性（pH試紙檢驗(yàn)，pH56 ）,離心10-15分鐘（4000r.p.m 倒取上清液,加入2倍體積的9 5%乙醇，邊加邊攪,加畢，靜置，待完全沉淀，過濾。2、濾渣先用95%

3、乙醇洗2次，每次約5毫升，再用無水乙讎洗2次,每次也約5ml。3、洗滌時(shí)可/卜匕、地用玻璃棒攪動(dòng)沉淀。乙醞濾干后，濾渣即為粗RNA ,可鑒走和測(cè)走含呈用。(二)鑒定：1、取上述RNA約O.Sg ,加10%硫酸5ml加熱至沸12分鐘，將RNA水解。2、水解液2ml,加入氨水2ml和5%硝酸銀溶液lml ,觀察是否產(chǎn)生絮狀瞟噲銀化合 物。注意事項(xiàng)：1、離心管回收2、離心的時(shí)候,要兩兩對(duì)稱放置,且離心管中溶液的星基本一樣。否則會(huì)遭成離心'機(jī)轉(zhuǎn)子 的損壞。六. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果(-)RNA的提?。杭尤胍宜崾谷芤撼仕嵝?，溶液呈土黃色。進(jìn)行離心后，沉淀沉于離心管的下部,上半部分上清液呈土黃色。取上清液,加

4、入2倍體積的95%乙醇后,溶液呈現(xiàn)白色渾濁狀完全渾濁后,上清液呈白色,沉淀為白色。過濾洗滌后，得RNA粗品。(二)鑒走：(1)水解后,溶液呈無色透明狀。加入氨水后,溶液仍澄清，溶液中似有油狀物質(zhì)產(chǎn)生。加入硝酸銀后，仍似有油狀物質(zhì)產(chǎn)生。(2)取水解液0.5ml,加苔黑酚一三氯化鐵試劑lml,加熱至沸l(wèi)min,觀察顏色變化七. 實(shí)驗(yàn)分析稱取干酵母粉:2.0096g最后得到的RNA粗品：0.034 gRNA提取率(%) =RNA質(zhì)臺(tái)(g ) /干酵母粉質(zhì)星(g ) X100%本實(shí)驗(yàn)中 RNA 提取率(%) = 0.0346 g / 2.0096g = 1.722%(稀堿法提取的RNA為變性RNA )

5、本實(shí)驗(yàn)為走性實(shí)驗(yàn)，提取酵母中的RNA中，產(chǎn)生白色沉淀時(shí)可能因副反應(yīng)產(chǎn)生的具他沉淀,即最終的沉淀中可能混有其他雜質(zhì)，不適于逬行走臺(tái)測(cè)走。依據(jù):酵母細(xì)胞冨含核酸，且核酸主要是RNA ,含星為干菌體的2.67%10.0% ,而DNA 含量較少，僅為0.03%0.516%。為此提取RNA多以酵母為原料。工業(yè)上制備RNA多選 用低成本、適于大規(guī)模操作的稀堿法或濃鹽法。這兩種方法所提取的核酸均為變性的RNA , 主要用作制備單核苔酸的原料，其工藝比較簡(jiǎn)單。八、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1. 過濾時(shí)，洗滌不能帶水，否則沉淀粘在濾紙上取不下來。2. 有時(shí)絮狀沉淀出現(xiàn)較慢，可放十多分鐘。3. 利用等電點(diǎn)控制RNA析出時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格控pH。4. 稀堿法提取的RNA為變性RNA ,可用于RNA組分鑒走及單核苜酸制備,不能作為RNA生物活性實(shí)驗(yàn)轎斗。九. 思考題1、簡(jiǎn)述核酸分離純化的一®原則。保J寺核算一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性；盡臺(tái)排除其他分子的污染,保持核酸純度。2、RNA提取過程中的關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)有哪些？過濾時(shí),洗滌不能帶水，否則沉淀粘在濾紙上