酶標(biāo)儀工作原理及使用方法

1、酶標(biāo)儀簡介：酶標(biāo)儀即酶聯(lián)免疫檢測儀是酶聯(lián)免疫吸附試驗的專用儀器又稱微孔板檢測器?？珊唵?地分為半自動和全自動 2大類，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一個比色計 即用比色法來進(jìn)行分析。測定一般要求測試液的最終體積在250 dL以下，用一般光電比色計無法完成測試，因此對酶標(biāo)儀中的光電比色計有特殊要求。酶標(biāo)儀原理：酶標(biāo)儀實際上就是一臺變相光電比色計或分光光度計，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和 光電比色計基本相同.圖示是一種單通道自動進(jìn)樣的酶標(biāo)儀工作原理圖.光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光，進(jìn)入塑料微孔極中的待測標(biāo)本.該單色光一部分被標(biāo)本吸收，另一部分則透過標(biāo)本照射到光電檢測器上

2、，光電檢測器將這一待測標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號.電信號經(jīng)前置放大，對數(shù)放大，模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計算，最后由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果.微處理機(jī)還通過控制電路控制機(jī)械驅(qū)動機(jī)構(gòu) X方向和Y方向的運(yùn)動來移動微孔板，從而實現(xiàn)自動進(jìn)樣檢測過程 而另一些酶標(biāo)儀則是采用手工移動微孔板進(jìn)行檢測，因此省去了X,Y方向的機(jī)械驅(qū)動機(jī)構(gòu)和控制電路，從而使儀器更小巧，結(jié)構(gòu)也更簡單微孔板是一種經(jīng)事先包理專用于放置待測樣本的透明塑料板，板上有多排大小均勻一致的小孔，孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的抗原或抗體，微孔板上每個小孔可盛放零點(diǎn)幾毫升的溶液光是電磁波，波長 100nm400nm 稱為紫外

3、光，400nm780nm 之間的光可被人眼觀察到， 大于780nm稱為紅外光。人們之所以能夠看到色彩，是因為光照射到物體上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色， 是因為植物吸收的大部分為紅橙光和藍(lán)紫光， 但對綠色不吸收， 反射出來，所以植物呈現(xiàn)為綠色。酶標(biāo)儀測定的原理是在特定波長下， 檢測被測物的吸光值。隨著檢測方式的發(fā)展，擁有多種檢測模式的單體臺式酶標(biāo)儀叫做多功能酶標(biāo)儀，可檢測吸光度（Abs）、熒光強(qiáng)度（FI）、時間分辨熒光（TRF）、熒光偏振（FP）、和化學(xué)發(fā)光（Lum）。酶標(biāo)儀從原理上可以分為光柵型酶標(biāo)儀和濾光片型酶標(biāo)儀。光柵型酶標(biāo)儀可以截取光源波長范圍內(nèi)的任意波長，而濾光片型酶標(biāo)儀則根

4、據(jù)選配的濾光片，只能截取特定波長進(jìn)行檢測。檢測單位光通過被檢測物，前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量，特定波長下，同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。檢測單位用OD值表示，OD是optical density(光密度)的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度， OD=log(1/trans),其中trans為檢測物的透光值。根據(jù) Bouger-amberT-beer 法則, OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系：E=OD=log(lo/ I淇中E表示被吸收的光密度，I o為在檢測物之前的光強(qiáng)度，I為從被檢測物出來的光強(qiáng)度。OD值由下述公式計算：c為檢測物的濃度 b為檢測物的厚度 a為摩爾因子在特定

5、波長下測定每一種物質(zhì)都有其特定的波長，在此波長下，此物質(zhì)能夠吸收最多的光能量。如果選擇其它的波長段，就會造成檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此，在測定檢測物時，我們選 擇特定的波長進(jìn)行檢測，稱為測量波長。但是每一種物質(zhì)對光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收， 我們再選取一個參照波長， 以消除這個不準(zhǔn)確性。在參照波長下，檢測物光的吸收最小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。檢測值計算儀器中的檢測器接收透過被檢測物的光能量，轉(zhuǎn)換成二進(jìn)位數(shù)字信號，最大為4095。儀器定義沒有光源下的透光值為0%,沒有檢測物的透光值為100%。則實際檢測中，檢測物的透光值均在 0% 100%

6、之間。透光值的計算如下：T=(Meas-Min)/(Max-Min)其中T為透光值，Meas為檢測的二進(jìn)位數(shù)值，Min為在0%的情況下檢測的二進(jìn)位數(shù)值，Max為在100%的情況下檢測的二進(jìn)位數(shù)值，舉例如下：MaX=3600Min=20Meas=30T=(30-20)/3600-20)=0.0028OD=log(1/T)=log(1/0.0028)=2.552中心定位儀器會自動對酶標(biāo)孔進(jìn)行中心定位，中心定位是要消除酶標(biāo)孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來檢測的不準(zhǔn)確。在對每一個酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測時，儀器其實要進(jìn)行35個點(diǎn)的測量，選取最中間的5個點(diǎn)的均值為本孔的 OD值。光源的參照通道參照通道是用來校準(zhǔn)由于電

7、壓不穩(wěn)或燈泡磨損帶來的影響。用途和其它提示用于ELISA試劑的測定，廣泛用于各種實驗室，包括臨床實驗室。質(zhì)量控制質(zhì)量控制是試劑檢測的重要因素。請按照試劑說明書的要求進(jìn)行質(zhì)量控制。空白校正有一些試劑盒的說明書將空白孔設(shè)置為空氣，其它大多數(shù)空白孔的設(shè)置是用試劑來設(shè)置的， 請按照試劑盒的說明書要求進(jìn)行。檢測結(jié)果的解釋由于有相當(dāng)多的因素會影響檢測的結(jié)果，如不同的酶標(biāo)板，檢測試劑的體積，都會造成OD值的不同，因此，只有使用同一酶標(biāo)板反應(yīng)的試劑檢測結(jié)果才能比較和分析。對結(jié)果的臨床解釋請依照試劑盒的說明書進(jìn)行 .結(jié)構(gòu)折疊規(guī)格有24孔板，48孔板，96孔板等多種，不同的儀器選用不同規(guī)格的孔板，對其可進(jìn)行 一孔

8、一孔地檢測或一排一排地檢測.酶標(biāo)儀所用的單色光既可通過相干濾光片來獲得，也可用分光光度計相同的單色器來得到.在使用濾光片作濾波裝置時與普通比色計一樣，濾光片即可放在微孔板的前面， 也可放在微孔板的后面，聚光鏡，光欄后到達(dá)反射鏡， 經(jīng)反射鏡作90。反射后垂直通過比色溶液，然后再 經(jīng)濾光片送到光電管.從酶標(biāo)儀工作框圖和光路圖上可看出，它和普通的光電比色計有以下幾點(diǎn)差異：(l)盛裝待測比色液的容器不再使用比色皿，而是使用塑料微孔板.微孔板常用透明的聚乙烯材料制成，對抗原抗體有較強(qiáng)的吸附作用，故用它作為固相載體由于盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的，光線只能垂直穿過，因此酶標(biāo)儀的光束都是垂直通過待測溶液和

9、微孔板的，光束既可是從上到下，也可以是從下到上穿過比色液酶標(biāo)儀通常不僅用 A,有時也使用光密度 OD來表示吸光度.酶標(biāo)儀可分為單通道和多通 道2種類型，單通道又有自動和手動2種之分.自動型的儀器有 X,Y方向的機(jī)械驅(qū)動機(jī)構(gòu)，可將微孔板L的小孔一個個依次送入光束下面測試，手動型則靠手工移動微孔板來進(jìn)行測 量.在單通道酶標(biāo)儀的基礎(chǔ)上又發(fā)展了多通道酶標(biāo)儀，此類酶標(biāo)儀一般都是自動化型的.它沒有多個光束和多個光電檢測器， 如12個通道的儀器設(shè)有 12條光束或12個光源，12個檢測 器和12個放大器，在X方向的機(jī)械驅(qū)動裝置的作用下，樣品 12個為一排被檢測.多通道酶 標(biāo)儀的檢測速度快，但其結(jié)構(gòu)較復(fù)雜價格也

10、較高用途折疊可廣泛應(yīng)用于低紫外區(qū)的DNA、RNA定量及純度分析(A260/A280)和蛋白定量(A280/BCA/Braflod/Lowery),酶活、酶動力學(xué)檢測，酶聯(lián)免疫測定 (ELISAs),細(xì)胞增殖與 毒性分析，細(xì)胞凋亡檢測(MTT),報告基因檢測及 G蛋白偶聯(lián)受體分析(GPCR)等。應(yīng)用范圍折疊分類項目名稱簡稱血液學(xué)檢驗血小板相關(guān)抗體的檢驗PAIgA、PAIgG、PAIgMD-二聚體的測定 D-Dimer血清纖維蛋白降解產(chǎn)物的測定FDP三碘甲腺原氨酸、四碘甲腺原氨酸測定T3、T4免疫學(xué)檢驗 C反應(yīng)蛋白的測定 CRP免疫球蛋白的測定 IgD、IgE循環(huán)免疫復(fù)合物的測定CIC類風(fēng)濕因子的

11、測定 IgG、IgA、IgM類RF抗甲狀腺球蛋白抗體、微粒體抗體的測定TG、TM腫癌免疫學(xué)檢測 甲胎蛋白的測定 AFP癌胚抗原的測定 CEA前列腺特異抗原的測定PSA胰癌、膽道癌、胃癌的測定 CA19-9卵巢癌的測定 CA125乳腺癌的測定 CA15-3宮頸鱗癌的測定 SCC多發(fā)性骨髓癌的測定甲狀腺癌的測定 hTG傳染病免疫學(xué)檢驗甲肝血清學(xué)的檢測抗HAV-IgM乙肝血清學(xué)的檢測兩對半丙肝血清學(xué)的檢測 抗HAV-IgG、抗HCV-IgM丁肝血清學(xué)的檢測 抗HDV-IgG、抗HDV-IgM戊肝血清學(xué)的檢測抗HEV-IgG腎綜合征出血熱類抗體的檢測HFRS-IgG乙型腦炎病毒抗體的檢測IgM人類免疫

12、缺陷病毒抗體（即艾滋?。┑臋z測HW 3 2 M優(yōu)生優(yōu)育功能檢測弓形蟲（體）病毒的檢測TOXO風(fēng)疹病毒的檢測 RV巨細(xì)胞病毒的檢測 CMV單純皰病毒的檢測 抗HSV（ I、n ）其 它 本儀器還可做基因檢驗及獸殘、農(nóng)殘檢驗項目等選購指南折疊酶標(biāo)儀（MicroplateReader）是對酶聯(lián)免疫檢測（EIA）實驗結(jié)果進(jìn)行讀取和分析的專業(yè)儀器。 酶 聯(lián)免疫反應(yīng)通過偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進(jìn)行的，反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示， 通過顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標(biāo)本中待測抗體或抗原的濃度。酶標(biāo)儀廣泛地應(yīng)用在臨床檢驗、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中，特別在近幾年中，由于大量的酶聯(lián)免疫檢測試

13、劑盒的應(yīng)用，使得酶標(biāo)儀在生殖保健領(lǐng)域中應(yīng)用越來越廣泛，同時促進(jìn)了生殖健康技術(shù)水平提高。目前國內(nèi)許多計生站系統(tǒng)開展了酶免檢測項目，如：乙肝五項、艾滋病檢測、優(yōu)生優(yōu)育系列檢測、激素檢測等。過去多數(shù)采用目測方法，報出的結(jié)果缺乏科學(xué)的依據(jù)。例如：某弓形蟲檢測試劑盒中，臨界值規(guī)定為：陰性對照品的OD值X2.5,通過目測無法判斷標(biāo)本孔的反應(yīng)顏色是否超過臨界值。肉眼進(jìn)行兩孔之間的顏色比較可能還行，但比較一孔的顏色是否超過另一孔顏色的2.5倍就不可能。國內(nèi)多家權(quán)威機(jī)構(gòu)，如衛(wèi)生部臨床檢驗中心和計劃生育系統(tǒng)等多次強(qiáng)調(diào)酶標(biāo)儀的重要性，并要求酶聯(lián)免疫檢測試劑應(yīng)使用酶標(biāo)儀判讀，酶免試劑的質(zhì)控也應(yīng)使用酶標(biāo)儀，并提供酶標(biāo)儀

14、測定的原始數(shù)據(jù)，而各廠家的試劑盒說明書沒有是讓用目測的。同時酶免檢測的項目往往是一些實質(zhì)性的感染和病變（如:肝炎、艾滋病、優(yōu)生優(yōu)育等），判讀更要求嚴(yán)謹(jǐn)，由誤診引起的 糾紛很難處理。另外，住院手術(shù)病人術(shù)前的丙肝、艾滋等 EIA試劑檢測是避免因輸血引起 感染引發(fā)的醫(yī)療事故糾紛的必要手段，正逐漸被許多單位所采用。診斷方法折疊中國免疫診斷方法主要有如下三種：酶免（EIA）、放免（RIA）和發(fā)光，在市場上的情況如下 ：方法所處市場周期放免衰退期酶免成長期發(fā)光進(jìn)入期放免技術(shù)由于試劑的污染和有效期等問題在國際和國內(nèi)市場逐漸被淘汰，而化學(xué)發(fā)光試劑和設(shè)備比較昂貴，使得其在國內(nèi)的普及特別在計生系統(tǒng)普及需要較長時間

15、，EIA技術(shù)穩(wěn)定，試劑價格合理，供應(yīng)充，酶免技術(shù)在中國市場處于成長期，因此購買酶標(biāo)儀正合適宜。工作環(huán)境 折疊酶標(biāo)儀是一種精密的光學(xué)儀器，因此良好的工作環(huán)境不僅能確保其準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，還能夠延長其使用壽命。根據(jù) DINVDE0871條例，儀器應(yīng)放置在無磁場和干擾電壓的位置。依據(jù)DIN45635-19 條例：儀器應(yīng)放置在低于 40分貝的環(huán)境下。為延緩光學(xué)部件的老化，應(yīng)避免陽光直射。操作時環(huán)境溫度應(yīng)在 15 C-40 c之間，環(huán)境濕度在 15%-85%之間。操作電壓應(yīng)保持穩(wěn)定。操作環(huán)境空氣清潔，避免水汽，煙塵。保持干燥、干凈、水平的工作臺面，以及足夠的操作空間。規(guī)格性能光學(xué)系統(tǒng)折疊光柵光路系統(tǒng)，包括

16、內(nèi)建的參比檢測通道，確保任何測量情況下獲得一致的結(jié)果。光路折疊長壽命閃爍氤燈光源，光柵單色光發(fā)生器，200 1000 nm 波長范圍內(nèi)全波長掃描，1nm步進(jìn)檢測模式折疊在微孔板檢測模式和比色杯檢測模式下均可進(jìn)行全波長范圍光譜掃描，對樣品和空白同時掃描。光譜掃描速度折疊10s, 2007000nm , 1nm 步進(jìn)樣品前處理折疊無需衍生處理，即可直接測定DNA、RNA和蛋白的吸光值。光程校準(zhǔn)折疊使用微孔板檢測時可直接讀出OD值和濃度，對于水相溶液可使用光程校正樣品容器折疊可使用96&384孔板，或標(biāo)準(zhǔn)杯/微量杯帶寬折疊帶寬2.4nm讀數(shù)范圍折疊0 4 OD線性范圍折疊450nm:0 2.

17、5 Abs , ±2%檢測準(zhǔn)確度折疊450nm:1%+0.003 Abs(02.0Abs), 2%(2.02.5Abs)檢測精度折疊450nm <1.0% CV檢測速度：折疊8s/96 孑L;13s/384 孑L溫控范圍 折疊微孔板和比色杯模式均具溫控功能，溫控范圍（室溫+4卜65 C振蕩模式 折疊軌道，雙軌道和線性三種調(diào)速振蕩模式，動力學(xué)過程中可執(zhí)行背景振蕩模式數(shù)據(jù)處理及分析折疊通過PC端數(shù)據(jù)分析軟件 Gen5進(jìn)行操作和設(shè)置曲線擬合、定量分析、定性分析、動力學(xué)計算、自定義方程以、平行線分析（PLA ,符合歐盟法規(guī)要求）及效價分析等。數(shù)據(jù)可一鍵導(dǎo)出到Excel ,也可生成詳盡的

18、結(jié)果報告。電源折疊電源輸入 100 - 240 V （50/60 Hz）,最大功率消耗 90W體積折疊外部尺寸（H x W x D） 216 x 216 x 406mm重量折疊11kg配置折疊全波長讀數(shù)儀一套（含比色杯基座）（比色皿必須為立式），標(biāo)準(zhǔn)96孔酶標(biāo)板一包，電源線壹根, 說明書一份，軟件光盤一張。操作事項酶標(biāo)儀的功能是用來讀取酶聯(lián)免疫試劑盒的反應(yīng)結(jié)果，因此要得到準(zhǔn)確結(jié)果，試劑盒的使用必須規(guī)范。許多醫(yī)院在使用酶標(biāo)儀之前是通過目測判斷結(jié)果，操作過程隨意性較大， 在使用酶標(biāo)儀后如果不能及時糾正操作習(xí)慣，會造成較大誤差。在酶標(biāo)儀的操作中應(yīng)注意以下事項使用加液器加液，加液頭不能混用。洗板要洗干

19、凈。如果條件允許，使用洗板機(jī)洗板，避免交叉污染。嚴(yán)格按照試劑盒的說明書操作，反應(yīng)時間準(zhǔn)確。在測量過程中，請勿碰酶標(biāo)板，以防酶標(biāo)板傳送時擠傷操作人員的手。請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部，操作完成后請洗手。如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學(xué)危害，請嚴(yán)格按照試劑盒的操作說明，以防對操作人員造成損害。如果儀器接觸過污染性或傳染性物品，請進(jìn)行清洗和消毒。不要在測量過程中關(guān)閉電源。對于因試劑盒問題造成的測量結(jié)果的偏差，應(yīng)根據(jù)實際情況及時修改參數(shù)，以達(dá)到最佳效果。使用后蓋好防塵罩。出現(xiàn)技術(shù)故障時應(yīng)及時與廠家聯(lián)系，切勿擅自拆卸酶標(biāo)儀。技術(shù)參數(shù)折疊常規(guī)波長選擇單色器讀板方法終點(diǎn)法，動力學(xué)法，光譜掃

20、描法，孔域掃描法微孔板類型6-384孔板，Take3和Take3 Trio微量檢測板其他實驗室設(shè)備標(biāo)準(zhǔn)比色杯（EonC型號）溫度控制環(huán)境以上+4° C至65° C震蕩軌道，雙軌道和線性軟件Gen5?數(shù)據(jù)分析軟件自動化BioStack? 和第三方自動化設(shè)備兼容吸光度光源氤閃燈波長范圍200-999nm, 1nm 步進(jìn)帶通2.4 nm動態(tài)范圍0.0 - 4.0 OD單色器波長準(zhǔn)確性+2 nm單色器波長可重復(fù)性+0.2 nmOD準(zhǔn)確性0 - 2.0 OD + 1% + 0.0102.0 - 3.0 OD + 3% + 0.010OD線性0 - 2.0 OD + 1% + 0.01

21、02.0 -3.0 OD + 3% + 0.010OD可重復(fù)性0 - 2.0 OD + 1% + 0.0052.0 - 3.0 OD + 3% + 0.00596孔板：8秒讀板速度384孔板：13秒物理特性連續(xù)性的USB和RS232串口進(jìn)行 PC連接功率100240 Volts AC 50/60 Hz尺寸16"長 x 8.5"寬 x 8.5"高(40.6 cm x 21.6 cm x 21.6 cm)重量<24 lbs (11 kg)展開一、常見故障1、打印機(jī)不工作酶標(biāo)儀后部 DIL開關(guān)設(shè)置不正確。DIL標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置：左下下下下下下上下上上下下上下上上 右(人站

22、在儀器后部，面向儀器 )。 酶標(biāo)儀內(nèi)置打印機(jī)開關(guān)處于開的位置。應(yīng)在總參數(shù)中設(shè)置內(nèi)置打印機(jī)為關(guān)。 打印機(jī)接口接錯(接在了計算機(jī)接口上了 )。應(yīng)將打印機(jī)聯(lián)系接在 DIL開關(guān)正下方的打印 機(jī)接口上，RS-232接口為計算機(jī)接口。(4)打印機(jī)聯(lián)線有問題：有些配備的新打印機(jī)聯(lián)線仍有問題，請確保打印機(jī)聯(lián)線無問題。 打印機(jī)未聯(lián)機(jī)，請確認(rèn)打印機(jī)上的聯(lián)機(jī)鍵已聯(lián)機(jī)。(6)打印機(jī)無紙或紙未裝好，請裝好打印紙。 有些打印機(jī)有開機(jī)順序，有的需先開打印機(jī)，后開儀器；有的需先開儀器，后開打印機(jī)。2、調(diào)不出所編程序必須在相應(yīng)程序模塊下調(diào)出。如在臨界值模塊下編輯儲存的程序必須要在臨界值模塊下調(diào) 出。3、肉眼結(jié)果與酶標(biāo)儀測定結(jié)果

23、差異較大3.1濾光片設(shè)置不正確：請在"參數(shù)"中按濾光片輪中實際的情況設(shè)置濾光片。3. 2空白或陰性位置不正確。二、儀器的檢查測試1、檢測電源部分的輸出電壓電源部分輸出電壓可以通過檢測MUSCU板上X11元件得到，每個點(diǎn)的正確對地電壓應(yīng)該是（順序為從左至右）：5V、0V（地電壓）、15V、24V、-15V、0V。2、 光源電壓的測試和調(diào)節(jié)測量光源電壓，如果發(fā)現(xiàn)所測的結(jié)果不符合規(guī)定要求可以調(diào)節(jié)電源上的R39元件。其操作步驟如下： 打開電源開關(guān)，使儀器處在工作狀態(tài)。 用電壓表測量光源電壓，正常電壓應(yīng)在6.76.9V之間。 選才i 405nm波長的程序，按"開始”鍵，同時

24、測量光源處電壓，正常值應(yīng)在7.58.1V之間。（4）如果光源電壓不正常，關(guān)閉電源開關(guān)。旋松測量部分上蓋螺絲并移去上蓋。旋松軌道部分的固定螺絲并移動軌道部分（要特別小心以防損傷軌道部分和主板及電源部分的連線?。芸吹杰壍老旅娴碾娫醇纯?。(6)打開電源開關(guān)，調(diào)節(jié)電源上R39元件，再重復(fù)上面步驟2測量光源電壓，一直到正確為 止。三、儀器的校正1、調(diào)節(jié)顯示屏幕的亮度這可以通過調(diào)節(jié) MUSCU板上的R14元件來實現(xiàn)。2、 檢查同步性轉(zhuǎn)動斷路器輪把示波器的探針接在電路板 MUSCU2的D29元件的第二個腳上測定信號的周期，正確的 值應(yīng)該介于5.1ms5.4ms之間。如果超出這個范圍，可以通過調(diào)節(jié)CHOPT電路板上R3元件來校正。檢測活動結(jié)束后要用帶有顏色的漆鎖定它的正確位置。檢查同步性a)按"計算模式”鍵，選擇1"調(diào)整"，再按"輸入"鍵選擇9"連續(xù)測量"，再按"輸入"鍵兩次選擇 增益0 ,