酶標儀工作原理及使用方法

1、酶標儀簡介：酶標儀即酶聯免疫檢測儀是酶聯免疫吸附試驗的專用儀器又稱微孔板檢測器?？珊唵?地分為半自動和全自動 2大類，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一個比色計 即用比色法來進行分析。測定一般要求測試液的最終體積在250 dL以下，用一般光電比色計無法完成測試，因此對酶標儀中的光電比色計有特殊要求。酶標儀原理：酶標儀實際上就是一臺變相光電比色計或分光光度計，其基本工作原理與主要結構和 光電比色計基本相同.圖示是一種單通道自動進樣的酶標儀工作原理圖.光源燈發(fā)出的光波經過濾光片或單色器變成一束單色光，進入塑料微孔極中的待測標本.該單色光一部分被標本吸收，另一部分則透過標本照射到光電檢測器上

2、，光電檢測器將這一待測標本不同而強弱不同的光信號轉換成相應的電信號.電信號經前置放大，對數放大，模數轉換等信號處理后送入微處理器進行數據處理和計算，最后由顯示器和打印機顯示結果.微處理機還通過控制電路控制機械驅動機構 X方向和Y方向的運動來移動微孔板，從而實現自動進樣檢測過程 而另一些酶標儀則是采用手工移動微孔板進行檢測，因此省去了X,Y方向的機械驅動機構和控制電路，從而使儀器更小巧，結構也更簡單微孔板是一種經事先包理專用于放置待測樣本的透明塑料板，板上有多排大小均勻一致的小孔，孔內都包埋著相應的抗原或抗體，微孔板上每個小孔可盛放零點幾毫升的溶液光是電磁波，波長 100nm400nm 稱為紫外

3、光，400nm780nm 之間的光可被人眼觀察到， 大于780nm稱為紅外光。人們之所以能夠看到色彩，是因為光照射到物體上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色， 是因為植物吸收的大部分為紅橙光和藍紫光， 但對綠色不吸收， 反射出來，所以植物呈現為綠色。酶標儀測定的原理是在特定波長下， 檢測被測物的吸光值。隨著檢測方式的發(fā)展，擁有多種檢測模式的單體臺式酶標儀叫做多功能酶標儀，可檢測吸光度（Abs）、熒光強度（FI）、時間分辨熒光（TRF）、熒光偏振（FP）、和化學發(fā)光（Lum）。酶標儀從原理上可以分為光柵型酶標儀和濾光片型酶標儀。光柵型酶標儀可以截取光源波長范圍內的任意波長，而濾光片型酶標儀則根

4、據選配的濾光片，只能截取特定波長進行檢測。檢測單位光通過被檢測物，前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量，特定波長下，同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關系。檢測單位用OD值表示，OD是optical density(光密度)的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度， OD=log(1/trans),其中trans為檢測物的透光值。根據 Bouger-amberT-beer 法則, OD值與光強度成下述關系：E=OD=log(lo/ I淇中E表示被吸收的光密度，I o為在檢測物之前的光強度，I為從被檢測物出來的光強度。OD值由下述公式計算：c為檢測物的濃度 b為檢測物的厚度 a為摩爾因子在特定

5、波長下測定每一種物質都有其特定的波長，在此波長下，此物質能夠吸收最多的光能量。如果選擇其它的波長段，就會造成檢測結果的不準確。因此，在測定檢測物時，我們選 擇特定的波長進行檢測，稱為測量波長。但是每一種物質對光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收， 我們再選取一個參照波長， 以消除這個不準確性。在參照波長下，檢測物光的吸收最小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。檢測值計算儀器中的檢測器接收透過被檢測物的光能量，轉換成二進位數字信號，最大為4095。儀器定義沒有光源下的透光值為0%,沒有檢測物的透光值為100%。則實際檢測中，檢測物的透光值均在 0% 100%

6、之間。透光值的計算如下：T=(Meas-Min)/(Max-Min)其中T為透光值，Meas為檢測的二進位數值，Min為在0%的情況下檢測的二進位數值，Max為在100%的情況下檢測的二進位數值，舉例如下：MaX=3600Min=20Meas=30T=(30-20)/3600-20)=0.0028OD=log(1/T)=log(1/0.0028)=2.552中心定位儀器會自動對酶標孔進行中心定位，中心定位是要消除酶標孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來檢測的不準確。在對每一個酶標儀進行檢測時，儀器其實要進行35個點的測量，選取最中間的5個點的均值為本孔的 OD值。光源的參照通道參照通道是用來校準由于電

7、壓不穩(wěn)或燈泡磨損帶來的影響。用途和其它提示用于ELISA試劑的測定，廣泛用于各種實驗室，包括臨床實驗室。質量控制質量控制是試劑檢測的重要因素。請按照試劑說明書的要求進行質量控制。空白校正有一些試劑盒的說明書將空白孔設置為空氣，其它大多數空白孔的設置是用試劑來設置的， 請按照試劑盒的說明書要求進行。檢測結果的解釋由于有相當多的因素會影響檢測的結果，如不同的酶標板，檢測試劑的體積，都會造成OD值的不同，因此，只有使用同一酶標板反應的試劑檢測結果才能比較和分析。對結果的臨床解釋請依照試劑盒的說明書進行 .結構折疊規(guī)格有24孔板，48孔板，96孔板等多種，不同的儀器選用不同規(guī)格的孔板，對其可進行 一孔

8、一孔地檢測或一排一排地檢測.酶標儀所用的單色光既可通過相干濾光片來獲得，也可用分光光度計相同的單色器來得到.在使用濾光片作濾波裝置時與普通比色計一樣，濾光片即可放在微孔板的前面， 也可放在微孔板的后面，聚光鏡，光欄后到達反射鏡， 經反射鏡作90。反射后垂直通過比色溶液，然后再 經濾光片送到光電管.從酶標儀工作框圖和光路圖上可看出，它和普通的光電比色計有以下幾點差異：(l)盛裝待測比色液的容器不再使用比色皿，而是使用塑料微孔板.微孔板常用透明的聚乙烯材料制成，對抗原抗體有較強的吸附作用，故用它作為固相載體由于盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的，光線只能垂直穿過，因此酶標儀的光束都是垂直通過待測溶液和

9、微孔板的，光束既可是從上到下，也可以是從下到上穿過比色液酶標儀通常不僅用 A,有時也使用光密度 OD來表示吸光度.酶標儀可分為單通道和多通 道2種類型，單通道又有自動和手動2種之分.自動型的儀器有 X,Y方向的機械驅動機構，可將微孔板L的小孔一個個依次送入光束下面測試，手動型則靠手工移動微孔板來進行測 量.在單通道酶標儀的基礎上又發(fā)展了多通道酶標儀，此類酶標儀一般都是自動化型的.它沒有多個光束和多個光電檢測器， 如12個通道的儀器設有 12條光束或12個光源，12個檢測 器和12個放大器，在X方向的機械驅動裝置的作用下，樣品 12個為一排被檢測.多通道酶 標儀的檢測速度快，但其結構較復雜價格也

10、較高用途折疊可廣泛應用于低紫外區(qū)的DNA、RNA定量及純度分析(A260/A280)和蛋白定量(A280/BCA/Braflod/Lowery),酶活、酶動力學檢測，酶聯免疫測定 (ELISAs),細胞增殖與 毒性分析，細胞凋亡檢測(MTT),報告基因檢測及 G蛋白偶聯受體分析(GPCR)等。應用范圍折疊分類項目名稱簡稱血液學檢驗血小板相關抗體的檢驗PAIgA、PAIgG、PAIgMD-二聚體的測定 D-Dimer血清纖維蛋白降解產物的測定FDP三碘甲腺原氨酸、四碘甲腺原氨酸測定T3、T4免疫學檢驗 C反應蛋白的測定 CRP免疫球蛋白的測定 IgD、IgE循環(huán)免疫復合物的測定CIC類風濕因子的

11、測定 IgG、IgA、IgM類RF抗甲狀腺球蛋白抗體、微粒體抗體的測定TG、TM腫癌免疫學檢測 甲胎蛋白的測定 AFP癌胚抗原的測定 CEA前列腺特異抗原的測定PSA胰癌、膽道癌、胃癌的測定 CA19-9卵巢癌的測定 CA125乳腺癌的測定 CA15-3宮頸鱗癌的測定 SCC多發(fā)性骨髓癌的測定甲狀腺癌的測定 hTG傳染病免疫學檢驗甲肝血清學的檢測抗HAV-IgM乙肝血清學的檢測兩對半丙肝血清學的檢測 抗HAV-IgG、抗HCV-IgM丁肝血清學的檢測 抗HDV-IgG、抗HDV-IgM戊肝血清學的檢測抗HEV-IgG腎綜合征出血熱類抗體的檢測HFRS-IgG乙型腦炎病毒抗體的檢測IgM人類免疫

12、缺陷病毒抗體（即艾滋病）的檢測HW 3 2 M優(yōu)生優(yōu)育功能檢測弓形蟲（體）病毒的檢測TOXO風疹病毒的檢測 RV巨細胞病毒的檢測 CMV單純皰病毒的檢測 抗HSV（ I、n ）其 它 本儀器還可做基因檢驗及獸殘、農殘檢驗項目等選購指南折疊酶標儀（MicroplateReader）是對酶聯免疫檢測（EIA）實驗結果進行讀取和分析的專業(yè)儀器。 酶 聯免疫反應通過偶聯在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進行的，反應結果以顏色顯示， 通過顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標本中待測抗體或抗原的濃度。酶標儀廣泛地應用在臨床檢驗、生物學研究、農業(yè)科學、食品和環(huán)境科學中，特別在近幾年中，由于大量的酶聯免疫檢測試

13、劑盒的應用，使得酶標儀在生殖保健領域中應用越來越廣泛，同時促進了生殖健康技術水平提高。目前國內許多計生站系統(tǒng)開展了酶免檢測項目，如：乙肝五項、艾滋病檢測、優(yōu)生優(yōu)育系列檢測、激素檢測等。過去多數采用目測方法，報出的結果缺乏科學的依據。例如：某弓形蟲檢測試劑盒中，臨界值規(guī)定為：陰性對照品的OD值X2.5,通過目測無法判斷標本孔的反應顏色是否超過臨界值。肉眼進行兩孔之間的顏色比較可能還行，但比較一孔的顏色是否超過另一孔顏色的2.5倍就不可能。國內多家權威機構，如衛(wèi)生部臨床檢驗中心和計劃生育系統(tǒng)等多次強調酶標儀的重要性，并要求酶聯免疫檢測試劑應使用酶標儀判讀，酶免試劑的質控也應使用酶標儀，并提供酶標儀

14、測定的原始數據，而各廠家的試劑盒說明書沒有是讓用目測的。同時酶免檢測的項目往往是一些實質性的感染和病變（如:肝炎、艾滋病、優(yōu)生優(yōu)育等），判讀更要求嚴謹，由誤診引起的 糾紛很難處理。另外，住院手術病人術前的丙肝、艾滋等 EIA試劑檢測是避免因輸血引起 感染引發(fā)的醫(yī)療事故糾紛的必要手段，正逐漸被許多單位所采用。診斷方法折疊中國免疫診斷方法主要有如下三種：酶免（EIA）、放免（RIA）和發(fā)光，在市場上的情況如下 ：方法所處市場周期放免衰退期酶免成長期發(fā)光進入期放免技術由于試劑的污染和有效期等問題在國際和國內市場逐漸被淘汰，而化學發(fā)光試劑和設備比較昂貴，使得其在國內的普及特別在計生系統(tǒng)普及需要較長時間

15、，EIA技術穩(wěn)定，試劑價格合理，供應充，酶免技術在中國市場處于成長期，因此購買酶標儀正合適宜。工作環(huán)境 折疊酶標儀是一種精密的光學儀器，因此良好的工作環(huán)境不僅能確保其準確性和穩(wěn)定性，還能夠延長其使用壽命。根據 DINVDE0871條例，儀器應放置在無磁場和干擾電壓的位置。依據DIN45635-19 條例：儀器應放置在低于 40分貝的環(huán)境下。為延緩光學部件的老化，應避免陽光直射。操作時環(huán)境溫度應在 15 C-40 c之間，環(huán)境濕度在 15%-85%之間。操作電壓應保持穩(wěn)定。操作環(huán)境空氣清潔，避免水汽，煙塵。保持干燥、干凈、水平的工作臺面，以及足夠的操作空間。規(guī)格性能光學系統(tǒng)折疊光柵光路系統(tǒng)，包括

16、內建的參比檢測通道，確保任何測量情況下獲得一致的結果。光路折疊長壽命閃爍氤燈光源，光柵單色光發(fā)生器，200 1000 nm 波長范圍內全波長掃描，1nm步進檢測模式折疊在微孔板檢測模式和比色杯檢測模式下均可進行全波長范圍光譜掃描，對樣品和空白同時掃描。光譜掃描速度折疊10s, 2007000nm , 1nm 步進樣品前處理折疊無需衍生處理，即可直接測定DNA、RNA和蛋白的吸光值。光程校準折疊使用微孔板檢測時可直接讀出OD值和濃度，對于水相溶液可使用光程校正樣品容器折疊可使用96&384孔板，或標準杯/微量杯帶寬折疊帶寬2.4nm讀數范圍折疊0 4 OD線性范圍折疊450nm:0 2.

17、5 Abs , ±2%檢測準確度折疊450nm:1%+0.003 Abs(02.0Abs), 2%(2.02.5Abs)檢測精度折疊450nm <1.0% CV檢測速度：折疊8s/96 孑L;13s/384 孑L溫控范圍 折疊微孔板和比色杯模式均具溫控功能，溫控范圍（室溫+4卜65 C振蕩模式 折疊軌道，雙軌道和線性三種調速振蕩模式，動力學過程中可執(zhí)行背景振蕩模式數據處理及分析折疊通過PC端數據分析軟件 Gen5進行操作和設置曲線擬合、定量分析、定性分析、動力學計算、自定義方程以、平行線分析（PLA ,符合歐盟法規(guī)要求）及效價分析等。數據可一鍵導出到Excel ,也可生成詳盡的

18、結果報告。電源折疊電源輸入 100 - 240 V （50/60 Hz）,最大功率消耗 90W體積折疊外部尺寸（H x W x D） 216 x 216 x 406mm重量折疊11kg配置折疊全波長讀數儀一套（含比色杯基座）（比色皿必須為立式），標準96孔酶標板一包，電源線壹根, 說明書一份，軟件光盤一張。操作事項酶標儀的功能是用來讀取酶聯免疫試劑盒的反應結果，因此要得到準確結果，試劑盒的使用必須規(guī)范。許多醫(yī)院在使用酶標儀之前是通過目測判斷結果，操作過程隨意性較大， 在使用酶標儀后如果不能及時糾正操作習慣，會造成較大誤差。在酶標儀的操作中應注意以下事項使用加液器加液，加液頭不能混用。洗板要洗干

19、凈。如果條件允許，使用洗板機洗板，避免交叉污染。嚴格按照試劑盒的說明書操作，反應時間準確。在測量過程中，請勿碰酶標板，以防酶標板傳送時擠傷操作人員的手。請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內部，操作完成后請洗手。如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學危害，請嚴格按照試劑盒的操作說明，以防對操作人員造成損害。如果儀器接觸過污染性或傳染性物品，請進行清洗和消毒。不要在測量過程中關閉電源。對于因試劑盒問題造成的測量結果的偏差，應根據實際情況及時修改參數，以達到最佳效果。使用后蓋好防塵罩。出現技術故障時應及時與廠家聯系，切勿擅自拆卸酶標儀。技術參數折疊常規(guī)波長選擇單色器讀板方法終點法，動力學法，光譜掃

20、描法，孔域掃描法微孔板類型6-384孔板，Take3和Take3 Trio微量檢測板其他實驗室設備標準比色杯（EonC型號）溫度控制環(huán)境以上+4° C至65° C震蕩軌道，雙軌道和線性軟件Gen5?數據分析軟件自動化BioStack? 和第三方自動化設備兼容吸光度光源氤閃燈波長范圍200-999nm, 1nm 步進帶通2.4 nm動態(tài)范圍0.0 - 4.0 OD單色器波長準確性+2 nm單色器波長可重復性+0.2 nmOD準確性0 - 2.0 OD + 1% + 0.0102.0 - 3.0 OD + 3% + 0.010OD線性0 - 2.0 OD + 1% + 0.01

21、02.0 -3.0 OD + 3% + 0.010OD可重復性0 - 2.0 OD + 1% + 0.0052.0 - 3.0 OD + 3% + 0.00596孔板：8秒讀板速度384孔板：13秒物理特性連續(xù)性的USB和RS232串口進行 PC連接功率100240 Volts AC 50/60 Hz尺寸16"長 x 8.5"寬 x 8.5"高(40.6 cm x 21.6 cm x 21.6 cm)重量<24 lbs (11 kg)展開一、常見故障1、打印機不工作酶標儀后部 DIL開關設置不正確。DIL標準設置：左下下下下下下上下上上下下上下上上 右(人站

22、在儀器后部，面向儀器 )。 酶標儀內置打印機開關處于開的位置。應在總參數中設置內置打印機為關。 打印機接口接錯(接在了計算機接口上了 )。應將打印機聯系接在 DIL開關正下方的打印 機接口上，RS-232接口為計算機接口。(4)打印機聯線有問題：有些配備的新打印機聯線仍有問題，請確保打印機聯線無問題。 打印機未聯機，請確認打印機上的聯機鍵已聯機。(6)打印機無紙或紙未裝好，請裝好打印紙。 有些打印機有開機順序，有的需先開打印機，后開儀器；有的需先開儀器，后開打印機。2、調不出所編程序必須在相應程序模塊下調出。如在臨界值模塊下編輯儲存的程序必須要在臨界值模塊下調 出。3、肉眼結果與酶標儀測定結果

23、差異較大3.1濾光片設置不正確：請在"參數"中按濾光片輪中實際的情況設置濾光片。3. 2空白或陰性位置不正確。二、儀器的檢查測試1、檢測電源部分的輸出電壓電源部分輸出電壓可以通過檢測MUSCU板上X11元件得到，每個點的正確對地電壓應該是（順序為從左至右）：5V、0V（地電壓）、15V、24V、-15V、0V。2、 光源電壓的測試和調節(jié)測量光源電壓，如果發(fā)現所測的結果不符合規(guī)定要求可以調節(jié)電源上的R39元件。其操作步驟如下： 打開電源開關，使儀器處在工作狀態(tài)。 用電壓表測量光源電壓，正常電壓應在6.76.9V之間。 選才i 405nm波長的程序，按"開始”鍵，同時

24、測量光源處電壓，正常值應在7.58.1V之間。（4）如果光源電壓不正常，關閉電源開關。旋松測量部分上蓋螺絲并移去上蓋。旋松軌道部分的固定螺絲并移動軌道部分（要特別小心以防損傷軌道部分和主板及電源部分的連線！），能看到軌道下面的電源即可。(6)打開電源開關，調節(jié)電源上R39元件，再重復上面步驟2測量光源電壓，一直到正確為 止。三、儀器的校正1、調節(jié)顯示屏幕的亮度這可以通過調節(jié) MUSCU板上的R14元件來實現。2、 檢查同步性轉動斷路器輪把示波器的探針接在電路板 MUSCU2的D29元件的第二個腳上測定信號的周期，正確的 值應該介于5.1ms5.4ms之間。如果超出這個范圍，可以通過調節(jié)CHOPT電路板上R3元件來校正。檢測活動結束后要用帶有顏色的漆鎖定它的正確位置。檢查同步性a)按"計算模式”鍵，選擇1"調整"，再按"輸入"鍵選擇9"連續(xù)測量"，再按"輸入"鍵兩次選擇 增益0 ,