熒光針定量PCR技術(shù)在臨床醫(yī)學(xué)研究中應(yīng)用

1、熒光定量熒光定量pcrpcr技術(shù)技術(shù)在臨床檢驗(yàn)工作中的應(yīng)用在臨床檢驗(yàn)工作中的應(yīng)用xiaoyuan liangmarketing s美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司 appliedbiosystems全球分析儀器及實(shí)驗(yàn)室設(shè)備銷售額排名： abi公司名列全世界第一！2004年3月20日abi提供提供基因分析全套解決方案基因分析全套解決方案熱循環(huán)儀器專利！熱循環(huán)儀器專利！ pcrpcr儀：儀： 2400，9600， 2720，9700，9800 熒光實(shí)時(shí)定量熒光實(shí)時(shí)定量pcrpcr儀：儀： 7700, 7900, 7000， 7300， 7500 遺傳分析儀遺傳分析儀: : 310, 313

2、0, 3130xl， 3730， 3730 xl dna/rnadna/rna自動(dòng)提取儀自動(dòng)提取儀 6100/tempus 人全血人全血rna提取反應(yīng)管提取反應(yīng)管 dnadna合成儀合成儀 3900, 340020042004年年applied biosystems公司公司基因分析新產(chǎn)品基因分析新產(chǎn)品: :更快更快, ,更好更好, ,更高通量更高通量, ,應(yīng)用更廣應(yīng)用更廣 2004年月 7300/7500型熒光定量pcr 2004年月 1700全基因組表達(dá)譜芯片 2004年6月 snplex技術(shù) 2004年9月 2720pcr擴(kuò)增儀 2004年10月 7900快速熒光定量pcr擴(kuò)增系統(tǒng) 35分

3、鐘完成 儀器/試劑/新型96孔板/20微升 2004年10月 9800快速pcr擴(kuò)增系統(tǒng):25分鐘 2004年11月 3130/3130xl 基因分析儀快速檢測(cè)血液中可能存在的病原體 6100 自動(dòng)核酸提取儀 30分鐘內(nèi)提取96個(gè)樣品中的rna 可以提取同一樣品的dna 和 rna 定性分析: 發(fā)現(xiàn)新病源體/已知病原體分型 9800 pcr: 25分鐘 3130/3130xl: 40分鐘/500堿基,1小時(shí)/700堿基 2小時(shí): q20以上950個(gè)堿基 定量分析: 7300/7500: 96孔板 7900: 384個(gè)樣品/自動(dòng)進(jìn)樣/35分鐘 9800 fast pcr system 25分鐘3

4、0個(gè)循環(huán)the worlds most trusted pcr solutions.mj research侵權(quán)，被判罰侵權(quán)，被判罰1980萬(wàn)美圓萬(wàn)美圓applied biosystems and roche molecular systems win patent infringement litigation against mj research foster city, ca april 19, 2004 applied biosystems (nyse:abi), an applera corporation business, today announced that a u.s.

5、district court jury in new haven, ct has returned a favorable decision in a lawsuit brought by applera corporation and roche molecular systems, inc. against mj research, inc and its principals, michael and john finney. the jury found that mj research infringed u.s. patent nos. 4,683,195, 4,683,202 a

6、nd 4,965,188 (each relates to polymerase chain reaction pcr process technology) and u.s. patent nos. 5,656,493, 5,333,675 and 5,475,610 (each relates to thermal cycler instrument technology). the jury found the infringement of the 195, 202, 188 and 493 patents to be willful. in addition to direct in

7、fringement by mj research of the 610 and 675 patents, the jury found that mj research induced its customers to infringe all of the patents and contributed to infringement by its customers of the 610 and 675 patents. the jury awarded damages in the amount of $19.8 million to applied biosystems and ro

8、che molecular systems. applied biosystems and roche molecular systems are pursuing an enhancement of damages, including legal fees, since several infringements were found to be willful. additionally, the companies are seeking an injunction against ab ab 熒光定量熒光定量pcrpcr儀大家族儀大家族 5700/7700/7000/7900/730

9、0/7500abi 公司熒光定量pcr儀器介紹第一代熒光定量第一代熒光定量pcrpcr儀儀 -1995-1995年推出年推出全世界第一臺(tái)全世界第一臺(tái)77007700型熒光定量型熒光定量pcrpcr儀儀 -1997-1997年推出年推出57005700型熒光定量型熒光定量pcrpcr儀儀第二代熒光定量第二代熒光定量pcrpcr儀儀 -2000-2000年推出年推出79007900型熒光定量型熒光定量pcrpcr儀儀 -20012001年推出年推出70007000型熒光定量型熒光定量pcrpcr儀儀第三代熒光定量第三代熒光定量pcrpcr儀儀 - -2004-2004年推出年推出75007500型

10、熒光定量型熒光定量pcrpcr儀儀7000型熒光定量型熒光定量pcr儀獲儀獲2002年世界科學(xué)家雜志年世界科學(xué)家雜志“最最佳儀器獎(jiǎng)佳儀器獎(jiǎng)”2002年年12月月9日發(fā)表日發(fā)表 第三代熒光定量pcr儀2004年年 2月最新推出！月最新推出！ 75007500型熒光定量?jī)x型熒光定量?jī)x 2004年11月7300/7500獲得醫(yī)療器械注冊(cè)證 市場(chǎng)上最新款的熒光定量pcr儀 applied biosystems 7900ht 快速熒光定量 pcr 系統(tǒng) 唯一能夠按照標(biāo)準(zhǔn)96孔模式進(jìn)行快速定量pcr反應(yīng)的儀器 20l 反應(yīng)體系可以在35分鐘內(nèi)進(jìn)行一次基因表達(dá)檢測(cè) 快速模式的反應(yīng)結(jié)果和標(biāo)準(zhǔn)模式的反應(yīng)結(jié)果相當(dāng)

11、 所有現(xiàn)有的 7900ht 的客戶可以進(jìn)行快速模式的升級(jí)2004年11月10日 獲得熒光定量pcr儀器技術(shù)的專利 (patent no. 6,814,934). abiabi熒光定量熒光定量pcrpcr儀系統(tǒng)儀系統(tǒng)硬件功能硬件功能四色濾光片四色濾光片超低超低溫溫ccd光光源源濾光片濾光片96孔樣品板孔樣品板多元鏡多元鏡雙色鏡雙色鏡96孔透孔透鏡組鏡組反射鏡反射鏡n新型低溫新型低溫ccdccd檢測(cè)器，檢測(cè)器， 信噪比更高，保證更高檢測(cè)靈敏度信噪比更高，保證更高檢測(cè)靈敏度 單一報(bào)告熒光單一報(bào)告熒光taqmantaqman實(shí)驗(yàn)中僅實(shí)驗(yàn)中僅1010個(gè)起始拷貝數(shù)的模板，其置信度高達(dá)個(gè)起始拷貝數(shù)的模板，其

12、置信度高達(dá)99.7%99.7%n新型鹵鎢燈光源，使用壽命更長(zhǎng)，機(jī)器配有時(shí)間監(jiān)測(cè)功能新型鹵鎢燈光源，使用壽命更長(zhǎng)，機(jī)器配有時(shí)間監(jiān)測(cè)功能 使用壽命使用壽命20002000小時(shí)小時(shí)n 四色五色濾光片配置，四色五色濾光片配置， 支持多重定量！支持多重定量！fam, sybr green ivic, joe ned,tamra, cy3 dye. rox (passive reference), texas redcy5 dye同時(shí)檢測(cè)同時(shí)檢測(cè)4色熒光，支持多重定量和突變分析色熒光，支持多重定量和突變分析! abi熒光標(biāo)記-化學(xué)特性及發(fā)光強(qiáng)度線性范圍基本相同 517nm fam/sybr green（蘭

13、色） 第一報(bào)告熒光：靶基因1定量指標(biāo)， 554nm vic 綠色 第二報(bào)告熒光：靶基因2或ipc定量指標(biāo) 583nm tamra，黃色 淬滅熒光，強(qiáng)度隨pcr變化 607nm rox，紅色 內(nèi)置熒光強(qiáng)度校準(zhǔn)，熒光強(qiáng)度不受pcr影響，可校準(zhǔn)加樣誤差及孔間差異。 rox管內(nèi)熒光強(qiáng)度校準(zhǔn)的好處 reporterreference多種基因同時(shí)定量 tnf-, tgf-, tnf-and lymphotoxin- 四種基因定量擴(kuò)增，每種取5個(gè)復(fù)管18s 核糖體 rna 20管定量重復(fù)擴(kuò)增abiabi熒光定量熒光定量pcrpcr儀系統(tǒng)儀系統(tǒng)性能特點(diǎn)性能特點(diǎn) 線性范圍更寬！至少線性范圍更寬！至少9 9個(gè)數(shù)量

14、級(jí)的線性范圍！個(gè)數(shù)量級(jí)的線性范圍！ 靈敏度更高！單一報(bào)告熒光靈敏度更高！單一報(bào)告熒光taqmantaqman實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)中 僅僅1010個(gè)起始拷貝數(shù)的模板，置信度高達(dá)個(gè)起始拷貝數(shù)的模板，置信度高達(dá)99.7%99.7% 具有絕對(duì)定量、相對(duì)定量、等位基因分型、具有絕對(duì)定量、相對(duì)定量、等位基因分型、 陰陽(yáng)性結(jié)果自動(dòng)判定陰陽(yáng)性結(jié)果自動(dòng)判定 (+/-)(+/-)功能功能 支持支持 最大反應(yīng)體積最大反應(yīng)體積 = 100ul 最小反映體積最小反映體積 = 25ul 標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)96孔反應(yīng)板，孔反應(yīng)板，8連管，單管連管，單管 開(kāi)放試劑開(kāi)放試劑 abiabi公司熒光定量公司熒光定量pcrpcr儀系統(tǒng)綜合應(yīng)用儀系統(tǒng)綜合

15、應(yīng)用 絕對(duì)定量絕對(duì)定量 (aq) 精確進(jìn)行病原體含量鑒定和基因模板定量精確進(jìn)行病原體含量鑒定和基因模板定量 相對(duì)定量相對(duì)定量 (rq) 可同時(shí)分析可同時(shí)分析10塊塊96孔反應(yīng)板的數(shù)據(jù)孔反應(yīng)板的數(shù)據(jù) 大規(guī)模高通量對(duì)比觀察、追蹤動(dòng)態(tài)變化大規(guī)模高通量對(duì)比觀察、追蹤動(dòng)態(tài)變化 等位基因分析等位基因分析 (ad) 自動(dòng)判定雜合位點(diǎn)類型自動(dòng)判定雜合位點(diǎn)類型 高通量篩選高通量篩選snp 陰陽(yáng)性結(jié)果自動(dòng)判定陰陽(yáng)性結(jié)果自動(dòng)判定 (+/-) 快速、方便用于臨床、衛(wèi)檢等輔助診斷快速、方便用于臨床、衛(wèi)檢等輔助診斷 sds 1.2擴(kuò)增曲線 sds 1.2相對(duì)定量 sds 1.2等位基因分型abi熒光定量pcr儀的使用優(yōu)點(diǎn)

16、 消耗品便宜 0.2ml反應(yīng)管，標(biāo)準(zhǔn)消耗品 進(jìn)口的約0.2元/個(gè) 國(guó)產(chǎn)的約幾分錢/個(gè) 操作簡(jiǎn)單 使用普通移液器加樣abi熒光定量?jī)x的使用優(yōu)點(diǎn) 標(biāo)準(zhǔn)品成本低 每批可以檢測(cè)96個(gè)樣品 每批樣品檢測(cè)應(yīng)做5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線， 2個(gè)陰性對(duì)照，1個(gè)陽(yáng)性對(duì)照 可以檢測(cè)88個(gè)未知樣品（可以是兩種以上檢測(cè)項(xiàng)目） 未知/標(biāo)準(zhǔn)11 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)容易 提供primer express 軟件，方便設(shè)計(jì)探針 提供2萬(wàn)余種人類基因的定量和15萬(wàn)種snp試劑盒（其他公司的定量pcr儀不支持這種應(yīng)用）abi 公司為您提供公司為您提供最完善的試劑盒服務(wù)系統(tǒng)！最完善的試劑盒服務(wù)系統(tǒng)！abi公司用于定量公司用于定量pcr研究的試劑盒研究的試劑

17、盒 通用的dna和rna定量試劑 含有防污染體系ung酶，內(nèi)參比熒光rox，反轉(zhuǎn)錄試劑盒 全部人類基因定量試劑盒（ assay-on-demand） 轉(zhuǎn)基因檢測(cè)試劑盒（gmo大豆、玉米等） 食品微生物鑒定試劑盒（大腸桿菌、痢疾桿菌等) 卡片式反應(yīng)板(2ul反應(yīng)體系，384基因同時(shí)定量) assay-by-design（待客設(shè)計(jì)、合成服務(wù)） 人類核酸/男性核酸定量檢測(cè)試劑盒（quantifiler） abi abi 實(shí)時(shí)熒光定量實(shí)時(shí)熒光定量pcrpcr儀儀 - - 基因診斷的主要技術(shù)平臺(tái)：快速方便簡(jiǎn)單可靠基因診斷的主要技術(shù)平臺(tái)：快速方便簡(jiǎn)單可靠 臨床病原體檢測(cè)臨床病原體檢測(cè) 定量分析： 單一定量

18、+ 雙重定量(mgb) 各種病毒，細(xì)菌，衣源體，支原體，病毒載量 病原體檢測(cè)-檢測(cè)炭疽菌，ecoli.o157,沙門氏菌 基因分型： 病原耐藥性點(diǎn)突變的檢測(cè)(mgb) 各種基因的定量表達(dá)分析各種基因的定量表達(dá)分析: 人基因定量試劑盒人基因定量試劑盒 大樣本量，快速方便，線性范圍寬 重現(xiàn)性好，定量準(zhǔn)確，可以確定20-30%的差異 snp和基因突變分析：和基因突變分析： snp分型試劑盒分型試劑盒 疾病相關(guān)基因型與臨床表型的關(guān)系 snp檢測(cè)與臨床表現(xiàn)的相關(guān)性：抗高血壓藥物療效個(gè)體差異 藥物副反應(yīng)的預(yù)防定量定量pcrpcr在臨床診斷中的具體應(yīng)用在臨床診斷中的具體應(yīng)用1、肝炎病毒檢測(cè)2、結(jié)核桿菌檢測(cè)3、優(yōu)生優(yōu)育相關(guān)項(xiàng)目檢測(cè)4、性病病原體檢測(cè)5、eb病毒檢測(cè)6.sars病