大腸桿菌生長(zhǎng)曲線試驗(yàn)報(bào)告

1、、實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)序號(hào)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定實(shí)驗(yàn)時(shí)間2012.6.4實(shí)驗(yàn)室生化樓327小組成員一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.通過(guò)對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定，了解細(xì)菌生長(zhǎng)的特點(diǎn)，綜合訓(xùn)練微生物實(shí)驗(yàn)的基本實(shí)驗(yàn)技能。2,鞏固培養(yǎng)基的配制、火菌、儀器的包扎、倒平板。3.掌握用比濁法測(cè)定細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線。二.實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)流程或裝置示意圖將少量細(xì)菌接種到一定體積的、適合的新鮮培養(yǎng)基中，在適宜的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，一定時(shí)間測(cè)定培養(yǎng)液中的菌 量，以菌量的數(shù)量作縱坐標(biāo)，生長(zhǎng)時(shí)間作橫坐標(biāo)，繪制的曲線叫生長(zhǎng)曲線。它反映了單細(xì)胞微生物在一定環(huán)境條件 下于液體培養(yǎng)時(shí)所表現(xiàn)出的群體生長(zhǎng)規(guī)律。依據(jù)其生長(zhǎng)速率的不同，一般可把生長(zhǎng)曲線分為

2、延緩期、生長(zhǎng)期、穩(wěn)定 期和衰亡期。將每一種一定量的細(xì)菌轉(zhuǎn)入新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)細(xì)胞要經(jīng)歷延遲期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng) 期、穩(wěn)定期和衰亡期四個(gè)階段。延遲期：又叫調(diào)整期。細(xì)菌接種至培養(yǎng)基后，對(duì)新環(huán)境有一個(gè)短暫適應(yīng)過(guò)程（不適應(yīng)者可因轉(zhuǎn)種而死亡） 。此期曲線平坦穩(wěn)定，因?yàn)榧?xì)菌繁殖極少延遲期長(zhǎng)短因素種、接種菌量、菌齡以及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等不同而異，一般為14小時(shí)。此期中細(xì)菌體積增大，代謝活躍，為細(xì)菌的分裂增殖合成、儲(chǔ)備充足的酶、能量及中間代謝產(chǎn)物。對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期： 又稱指數(shù)期。此期生長(zhǎng)曲線上活菌數(shù)直線上升。細(xì)菌以穩(wěn)定的幾何級(jí)數(shù)極快增長(zhǎng)，可持續(xù)幾小時(shí) 至幾天不等（視培養(yǎng)條件及細(xì)菌代時(shí)而異）。此期細(xì)菌形態(tài)、染色、生

3、物活性都很典型，對(duì)外界環(huán)境因素的作用敏 感，因此研究細(xì)菌性狀以此期細(xì)菌最好?？股刈饔?，對(duì)該時(shí)期的細(xì)菌效果最佳。穩(wěn)定期：該期的生長(zhǎng)菌群總數(shù)處于平坦階段，但細(xì)菌群體活力變化較大細(xì)菌濃度達(dá)到最大即環(huán)境最大容納量。由于培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗、毒性產(chǎn)物（有機(jī)酸、過(guò)氧化物等）積累PH下降等不利因素的影響，細(xì)菌繁殖速度漸趨下降，相對(duì)細(xì)菌死亡數(shù)開始逐漸增加，此期細(xì)菌增殖數(shù)與死亡數(shù)漸趨平衡。細(xì)菌形態(tài)、染色、生物活性可出現(xiàn)改變，并產(chǎn)生相應(yīng)的代謝產(chǎn)物如外毒素、內(nèi)毒素、抗生素、以及芽胞等。衰亡期： 隨著穩(wěn)定期發(fā)展，細(xì)菌繁殖越來(lái)越慢，死亡菌數(shù)明顯增多?；罹鷶?shù)與培養(yǎng)時(shí)間呈反比關(guān)系，此期細(xì)菌 變長(zhǎng)腫脹或畸形衰變，甚至菌體自

4、溶，難以辯認(rèn)其形。生理代謝活動(dòng)趨于停滯。故陳舊培養(yǎng)物上難以鑒別細(xì)菌。體內(nèi)及自然界細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖受機(jī)體免疫因素和環(huán)境因素的多方面影響，不會(huì)出現(xiàn)象培養(yǎng)基中那樣典型的生長(zhǎng)曲線。掌握細(xì)菌生長(zhǎng)規(guī)律，可有目的地研究控制病原菌的生長(zhǎng)，發(fā)現(xiàn)和培養(yǎng)對(duì)人類有用的細(xì)菌。這4個(gè)時(shí)期的長(zhǎng)短因菌種的遺傳性、接種量和培養(yǎng)條件的不同而有所不向。因此通過(guò)測(cè)定微生物的生長(zhǎng)曲線， 可了解個(gè)菌的生長(zhǎng)規(guī)律，對(duì)于科研和生產(chǎn)都具有重要的指導(dǎo)意義。測(cè)定微生物的數(shù)量有多種不同的方法，可根據(jù)要求和實(shí)驗(yàn)室條件選用。本實(shí)驗(yàn)用比濁法測(cè)定，由于細(xì)菌懸液的濃度與光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度計(jì)測(cè)定菌懸液的光密度來(lái)推知菌液的濃度，并將所測(cè)的OD

5、值與其對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)時(shí)間作圖，即可繪出該菌在一定條件下的生長(zhǎng)曲線，此法快捷、簡(jiǎn)單。三.實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料大腸桿菌斜面菌種、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、生理鹽水（0.85%NaCl） 50mL、721型分光光度計(jì)、比色皿、怛溫?fù)u床、培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、電子天平、酒精燈、電爐、接種環(huán)、試管架、錐形瓶15個(gè)（250mL）、無(wú)菌吸管、燒杯（ 1000mL）、乳膠頭、報(bào)紙、膠塞、玻璃棒等四.實(shí)驗(yàn)方法步驟及注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)步驟：配制營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基承養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基滅菌T制大腸桿菌菌液標(biāo)語(yǔ)接種培養(yǎng)測(cè)定一繪制生長(zhǎng)曲線一1 .配制營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基：用電子天平稱取14.4g營(yíng)養(yǎng)肉湯粉末置于 1000mL燒杯中，加水至 800mL，用電爐加

6、熱（加熱 過(guò)程中要用玻璃棒不斷攪拌）至沸騰后，冷卻少許后分別倒進(jìn)15個(gè)錐形瓶中，每個(gè)錐形瓶倒50mL,塞上膠塞，用報(bào)紙包好，棉繩系好。2 .營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基滅菌：將步驟一包好的培養(yǎng)基置于高壓蒸汽火菌鍋121c火菌30min.3 .配制大腸桿菌菌液：取大腸桿菌斜面菌種一支，在酒精如火焰上方操作，用接種環(huán)刮取少量菌苔于約50mL生理鹽水中，充分震海均勻。4 .標(biāo)記：將15個(gè)錐形瓶進(jìn)行標(biāo)記，分別標(biāo)號(hào)1、2、314、15.5 .接種：用1mL無(wú)菌移液管分別移取 1mL大腸桿菌菌液到已編號(hào)的15個(gè)錐形瓶中，并充分震蕩均勻.6 .培養(yǎng)：將錐形瓶置于37 c下在恒溫?fù)u床上培養(yǎng)（150r/min ）。然后分別按

7、對(duì)應(yīng)時(shí)間將錐形瓶取出，待培養(yǎng)結(jié)束時(shí)測(cè) 定 OD©。7 .測(cè)定：將培養(yǎng)的大腸菌群菌液用無(wú)菌移液管移取到比色皿中，選用600nm分光光度計(jì)上調(diào)節(jié)零點(diǎn)，用蒸播水作為空白對(duì)照，并對(duì)不同時(shí)間培養(yǎng)液從0起依次進(jìn)行測(cè)定，對(duì)濃度大的菌懸液用自來(lái)水適當(dāng)稀釋后測(cè)定，使其OD值在0.1-0.65之間，經(jīng)稀釋后測(cè)得的OD值要乘十稀釋倍數(shù)，才是培養(yǎng)液實(shí)際的OD值。8 .繪制生長(zhǎng)曲線：對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行生長(zhǎng)曲線的繪制，分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。五.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理方法與原始記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理方法：以時(shí)間為橫坐標(biāo)，OD00為縱坐標(biāo)，用excel繪制大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線，分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)原始記錄：12345678（3 倍）9（4 倍

8、）12:0013:0015:4518:0019:0020:0020:3021:0022:00ODooI0.0720.0730.0790.2820.4561.1051.1690.5540.572ODoo 20.0730.0730.0790.2820.4561.1031.1700.5540.571ODoo 30.0740.0730.0790.2820.4561.1061.1660.5540.570平均0.0730.0730.0790.2820.4561.1051.1680.5540.57110（4 倍）11（4 倍）12（4 倍）13（5 倍）14（5 倍）15（5 倍）5（6 倍）6（6 倍）2

9、3:0000:001:002:006:208:3011:0012:00ODooI0.6420.5030.7510.5180.6610.5810.5030.553ODoo 20.6410.5010.7560.5230.6640.5640.5040.555ODoo 30.6410.5090.7580.5230.6630.5720.5040.555平均0.6410.5040.7550.5210.6630.5720.5040.554修正前的大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線圖修正后的大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線圖時(shí)間/h013.756788.5910O展00.0730.0730.0790.2820.4561.1051.1681

10、.6622.284時(shí)間/h1112131418.3320.52324O展02.5642.0163.0202.6053.3152.8603.0243.324修正前的大腸桿菌的吸光度數(shù)據(jù)時(shí)間/h013.756788.5910111318.3320.5OD000.0730.0730.0790.2820.4561.1051.1681.6622.2842.5643.0203.3152.86修正后的大腸桿菌的吸光度數(shù)據(jù)時(shí)間/h013.756788.591011OD000.0730.0730.0790.2820.4561.1051.1681.6622.2842.564前12小時(shí)的大腸桿菌的吸光度數(shù)據(jù)前12小

11、時(shí)的大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線圖六.參考文獻(xiàn)1,牛天貴.食品微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù).第1版.北京：科學(xué)出版社，2010.2.楊革.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程.第2版.北京：科學(xué)出版社，2010.3,何國(guó)慶，賈英民，丁立孝等.食品微生物學(xué).第2版.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2009.4,周德慶，胡寶龍,微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程.第2版,北京：高等教育出版社，2006.七.教師對(duì)實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)的意見簽名：年 月 日、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1.友制塞驗(yàn)現(xiàn)象、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析及其結(jié)論好培養(yǎng)時(shí)間的增加，培養(yǎng)基里的液體變得越來(lái)越混濁，所散發(fā)出來(lái)的味道也越來(lái)越濃，味道很難聞。實(shí)驗(yàn)名蹲：隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，培養(yǎng)基里的液體變得越來(lái)越混濁，所散發(fā)出來(lái)的味道也越來(lái)

12、越濃，味道很難 大腸州幫幃蚓他矍麻喃感赧明遏Mferf期用硼提脆翎噌詢i慚踹母腸桿菌 養(yǎng)和州詞哪牖解詞窕。曜UMM”則外直至變枳°。通過(guò)對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定，了解了細(xì)菌生長(zhǎng)的特點(diǎn)，是：剛開始時(shí)細(xì)菌緩慢增長(zhǎng)，后來(lái)增長(zhǎng)迅速，呈“r型，最后細(xì)菌生長(zhǎng)緩慢，數(shù)量達(dá)到頂峰，在一段時(shí)間內(nèi)保持不變。因?qū)嶒?yàn)測(cè)量的時(shí)間不夠合理等各種因素，因此用原始數(shù)據(jù)繪制出來(lái)的大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線圖不夠有規(guī) 律，經(jīng)修正后生長(zhǎng)曲線比較好。結(jié)論：細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線分為延緩期、生長(zhǎng)期、穩(wěn)定期和衰亡期。體內(nèi)及自然界細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖受機(jī)體免疫 因素和環(huán)境因素的多方面影響，不會(huì)出現(xiàn)象培養(yǎng)基中那樣典型的生長(zhǎng)曲線。掌握細(xì)菌生長(zhǎng)規(guī)律，可 有

13、目的地研究控制病原菌的生長(zhǎng)，發(fā)現(xiàn)和培養(yǎng)對(duì)人類有用的細(xì)菌。這4個(gè)時(shí)期的長(zhǎng)短因菌種的遺傳性、接種量和培養(yǎng)條件的不同而有所不同。因此通過(guò)測(cè)定微生物的生長(zhǎng)曲線，可了解細(xì)菌的生長(zhǎng)規(guī)律，對(duì)于科研和生產(chǎn)都具有重要的指導(dǎo)意義。三.實(shí)驗(yàn)總結(jié)1 .本次實(shí)驗(yàn)成敗及其原因分析總的來(lái)說(shuō)，本實(shí)驗(yàn)算是成功的。在一定程度生探討出了大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定。通過(guò)此次試實(shí)驗(yàn)，了 解了細(xì)菌生長(zhǎng)的特點(diǎn)，綜合訓(xùn)練了微生物實(shí)驗(yàn)的基本實(shí)驗(yàn)技能。鞏固培養(yǎng)基的配制、滅菌、儀器的包扎、倒 平板。在一定程度上掌握了用比濁法測(cè)定細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線的方法。但有兩點(diǎn)不足：一是一開始忽略了 OD值必須在0.10-0.65 之間才有效；二是時(shí)間的間隔不太合理，開

14、始的 階段應(yīng)該時(shí)間安排緊密一點(diǎn)，還有晚上的一段數(shù)據(jù)沒(méi)有測(cè)，實(shí)驗(yàn)時(shí)間不夠長(zhǎng)，延遲期和衰亡期曲線不明顯。實(shí)驗(yàn)中若能考慮全面，這樣測(cè)出來(lái)的數(shù)據(jù)才更有代表性，更加準(zhǔn)確。2 .本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)及改進(jìn)措施本試驗(yàn)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)有以下四點(diǎn)：整個(gè)過(guò)程最好是在無(wú)菌操作臺(tái)上操作，這樣培養(yǎng)基受空氣中微生物的影響就較小，同時(shí)也可以減少污染， 保證培養(yǎng)基里大腸桿菌純度較高，否則會(huì)在一定程度上影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。每隔半小時(shí)或一個(gè)小時(shí) （測(cè)量時(shí)間要安排合理，時(shí)間要控制好：在實(shí)驗(yàn)初期30min對(duì)菌懸液進(jìn)行一次測(cè)定。實(shí)驗(yàn)中期每小時(shí)測(cè)一次，后期12小時(shí)測(cè)定一次，依次持續(xù)到 20小時(shí)后。）從恒溫?fù)u床取出錐形瓶，用無(wú)菌移液管移取少量，操作要快，先進(jìn)行預(yù)測(cè)，OD值應(yīng)在0.10-0.65 之間，如果超過(guò)這個(gè)范圍則需要進(jìn)行稀釋后再測(cè)量。 測(cè)量時(shí)要等數(shù)字變化不大時(shí)再讀取，可以讀三