畢業(yè)論文---模版

1、成年飼料雞腸道正常菌群的檢測 本科生畢業(yè)論文(設(shè)計)題 目： 成年飼料雞腸道 正常菌群的檢測 學(xué)生姓名： 劉恒嘉 學(xué) 號： 201013010311 專業(yè)班級： 生物科學(xué)10103班 指導(dǎo)教師： 李娜老師 完成時間： 2014年5月1日 目 錄1 引言42 材料和方法52.1 實(shí)驗材料52.1.1 實(shí)驗動物52.1.2 實(shí)驗菌株52.1.3 實(shí)驗試劑與藥品52.1.4 實(shí)驗器材52.2 實(shí)驗方法52.2.1培養(yǎng)基的配方52.2.2配制培養(yǎng)基62.2.3 菌體分離與純化72.2.4 革蘭氏染色72.2.5 菌株篩選82.2.5.1產(chǎn)蛋白酶菌株的篩選82.2.5.2產(chǎn)脂肪酶菌株的篩選82.2.5.

2、3產(chǎn)淀粉酶菌株的篩選92.2.5.4產(chǎn)纖維素酶菌株的篩選93結(jié)果與分析103.1 菌種分離純化與革蘭氏染色103.2 產(chǎn)蛋白酶菌株的篩選123.3 產(chǎn)脂肪酶菌株的篩選143.4 產(chǎn)纖維素酶菌株的刷選163.5 產(chǎn)淀粉酶菌株的篩選174 討論與小結(jié)195 參考文獻(xiàn)216 致謝22成年飼料雞腸道正常菌群的檢測 生物科學(xué)專業(yè)：劉恒嘉 指導(dǎo)老師：李娜摘要：從健康的成年飼料雞腸道前段、中段、后段分離細(xì)菌30株。革蘭氏染色結(jié)果表明：24株為革蘭氏陰性菌，6株為革蘭氏陽性菌。研究了他們產(chǎn)蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和纖維素酶的能力。結(jié)果表明：本次實(shí)驗從健康的成年飼料雞腸道分離得到的30株菌中，21株都產(chǎn)蛋白酶，占

3、菌株總數(shù)的75%，產(chǎn)脂肪酶的有18株，占總數(shù)的60% ，產(chǎn)淀粉酶的有12株，占總數(shù)的40%，產(chǎn)纖維素酶的有9株，占總數(shù)的30%。其中產(chǎn)4種酶的有1株，產(chǎn)3種酶的有8株，產(chǎn)2中酶的有13株。產(chǎn)一種酶的有6株。關(guān)鍵詞：雞腸道，蛋白酶，脂肪酶，纖維素酶，淀粉酶Adult chicken feed detection of intestinal normal flora Student :Liu Hengjia Advisor:Li NaAbstract：From healthy adult chicken feed front, middle, after a period of separatio

4、n of intestinal bacteria 30 strains.Gram staining results showed that 24 strains of gram-negative bacteria, 6 strains of gram-positive bacteria.They produce protease, amylase, lipase and cellulase.Results show that this experiment from the healthy adult in intestinal 30 strains of bacteria were isol

5、ated from feed chicken, 21 strains producing protease, accounting for 75% of the total number of strains, there are 18 strains of lipase production, accounting for 60% of the total, there were 12 strains produce amylase, accounting for 40% of the total, produce cellulase has 9 strains, 30% of the to

6、tal.Among them one of four kinds of enzyme production, eight strains of the three kinds of enzyme production, have 13 of 2 enzyme production.To produce an enzyme has 6strains.Keywords:Chicken intestine,protease,lipase, cellulase ,amylase1 引言 雞(Chicken)屬雞形目雉科原雞屬紅原雞亞屬。雞是人類飼養(yǎng)最普遍的家禽。家雞源出于野生的原雞，其馴化歷史至少約4

7、000年，但直到1800年前后雞肉和雞蛋才成為大量生產(chǎn)的商品。雞的種類有火雞、烏雞、野雞等。雞的種類很多，各地所產(chǎn)的雞，大小形色都不相同。 雞的體溫在40.9與41.9之間，平均體溫是41.5。雛雞在養(yǎng)殖時舍溫要求比較高，一般在35左右。一只母雞年平均產(chǎn)蛋300枚左右，平均出雛率在70%以上。雞的一般最長存活13年。每100g可食部分含能量167cal，蛋白質(zhì)19.3g，脂肪9.4g，水69g，碳水化合物1.3g，維生素A48mg，維生素B0.05g，維生素B0.09g，維生素E0.67mg，煙酸5.6mg，鈉63.3mg，鈣9mg，鐵1.4mg，膽固醇106mg。雞食性簡單，食料來源廣，且生

8、長迅速，產(chǎn)量高，是人類飼養(yǎng)最普遍的家禽。隨著雞養(yǎng)殖大幅度提高，其病害發(fā)生也日趨嚴(yán)重，各種病原體的侵襲嚴(yán)重影響了雞的產(chǎn)量和效益。而在家禽動物疾病防治過程中，抗生素類的藥物作用明顯，但是它們可導(dǎo)致耐藥性的產(chǎn)生以及耐藥因子的傳遞，殘留的藥物會通過食物鏈影響人類的健康等，所以尋求抗生素替代品就愈加重要，益生菌的出現(xiàn)給人們帶來了新的希望。 雞消化道不同部位在營養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收和腸道健康中發(fā)揮著不同的作用。嗉囊、肌胃和十二指腸的主要功能是消化飼料,空腸和回腸的主要功能是吸收營養(yǎng)物質(zhì),盲腸內(nèi)容物經(jīng)過大量微生物的發(fā)酵,進(jìn)一步吸收營養(yǎng)成分,去除毒性物質(zhì),減少有害微生物數(shù)量。雞消化道中的大量微生物菌群對其營養(yǎng)、

9、免疫、疾病防治以及生理功能的發(fā)揮都要產(chǎn)生重要影響,進(jìn)而影響雞的生長和健康。正常情況下,動物消化道內(nèi)存在的有益微生物對維持消化道內(nèi)的菌群平衡、促進(jìn)動物生長和飼料的消化與吸收起著重要作用。當(dāng)環(huán)境及飼料投放等過激時會造成動物機(jī)體消化道內(nèi)微生物區(qū)系紊亂。病原菌大量繁殖，引起動物消化機(jī)能失調(diào)，生長受阻。本研究旨在研究健康飼料雞腸道中分離到的幾種可以產(chǎn)蛋白酶菌株、纖維素酶菌株、淀粉酶菌株和產(chǎn)脂肪酶的菌株及其分布狀況，以期為后續(xù)研究工作打下基礎(chǔ)。2 材料和方法2.1 實(shí)驗材料2.1.1 實(shí)驗動物 飼料喂養(yǎng)的健康雞個體（數(shù)只）2.1.2 實(shí)驗菌株 大腸桿菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌等。2.1.3 實(shí)驗試劑與藥

10、品 硫酸鎂、牛肉膏、氯化鈉、磷酸氫二鉀、吐溫80、中性紅水溶液、葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、瓊脂、酪蛋白、磷酸氫二鈉、0.4%溴麝香草酚藍(lán)溶液、氯化鈣、吐溫-80、蒸餾水等。2.1.4 實(shí)驗器材 高壓蒸汽滅菌鍋、超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫干燥箱、冰箱、生物顯微鏡、電子天平、移液管、膠頭滴管、培養(yǎng)皿100、微生物實(shí)驗常規(guī)用具等。2.2 實(shí)驗方法2.2.1培養(yǎng)基的配方 FWA培養(yǎng)基：硫酸鎂0.05g，牛肉膏2.50g，氯化鈉5.00g，磷酸氫二鉀0.20g，葡萄糖1.00g，蛋白胨5.00g，酵母膏2.50g，瓊脂15.00g，蒸餾水1000ml，pH為7.2-7.4 測定菌株產(chǎn)蛋白酶的培養(yǎng)基：酪蛋

11、白10.00g，磷酸氫二鈉2.00g，瓊脂13.00g，蒸餾水1000ml，0.4%溴麝香草酚藍(lán)溶液12.5ml，pH為7.2-7.4 測定菌株產(chǎn)脂肪酶的培養(yǎng)基：蛋白胨5.00g，酵母粉1.00g，氯化鈣0.10g，吐溫-80為10ml，氯化鈉5.00g，瓊脂15.00g，蒸餾水1000ml，pH為7.2 測定菌株產(chǎn)纖維素酶的培養(yǎng)基：蛋白胨10.00g，瓊脂10.00g，氯化鈉2.50g，膽鹽2.50g,乳糖5.00g，1%中性紅水溶液2.50g，蒸餾水500ml,pH為7.2測定菌株產(chǎn)淀粉酶的培養(yǎng)基：牛肉膏5.00g，蛋白胨10.00g，瓊脂10.00g，氯化鈉5.00g，淀粉5.00g，p

12、H為7.0-7.22.2.2配制培養(yǎng)基（1）稱藥品：將實(shí)驗所需藥品放在濾紙上用電子天平稱量，稱取后溶解于蒸餾水中倒入大瓷缸。（2）加熱溶解：在大瓷缸中加入所需水量，然后放在電爐上，小火加熱，加熱時在瓷缸底部墊石棉網(wǎng)使瓷缸受熱均勻。邊加熱邊用玻璃棒攪拌，待藥品完全溶解后再補(bǔ)充蒸餾水至1L。（3） 調(diào)pH值：用玻璃棒從瓷缸中沾取一滴待測滴液涂在pH試紙上，再與比色卡上的顏色對比，若發(fā)現(xiàn)瓷缸中的pH值偏堿，用1mol/L的HCl調(diào)至所需pH值范圍，若發(fā)現(xiàn)瓷缸中的pH值偏酸，用1mol/L的NaOH調(diào)至所需pH值范圍。（4） 分裝：將配置的培養(yǎng)基分裝在三角瓶內(nèi)和試管中，分裝時應(yīng)該避免培養(yǎng)基粘在瓶口而造

13、成污染，且分裝量不應(yīng)該超過三角瓶的2/3.試管中的培養(yǎng)基要適量，不超過試管的2/3適宜。（5） 加棉塞：棉塞的形狀、大小和松緊度要適中，不留縫隙，以防被細(xì)菌污染和保持有效的通氣。（6） 包扎：棉塞外包上報紙，紙外用棉繩捆好，防止滅菌時冷凝水沾濕棉塞。（7） 滅菌：采用的是高壓蒸汽滅菌，將帶滅菌的物體放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，放好墊子，將蓋子上與排氣孔相連接的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)，擺正鍋蓋，對齊螺口。以同時旋緊相對的兩個螺栓的方式擰緊所有螺栓，關(guān)上排氣閥后接通電源，開始加熱。當(dāng)壓力表的指針上升到0.05MPa時，打開排氣閥排出鍋內(nèi)冷空氣，待壓力表指針回到0MPa附近時，關(guān)上

14、排氣閥，重復(fù)上述排冷空氣的操作一次，此時鍋內(nèi)的冷空氣一般已經(jīng)排盡，關(guān)上排氣閥，當(dāng)壓力表指針上升到0.1MPa時開始計時，使指針維持在0.1MPa到0.15MPa之間的時間為30分鐘，最后切斷電源，使滅菌鍋?zhàn)匀焕鋮s，待壓力表指針回到0MPa附近時打開排氣閥，擰開蓋上的螺栓，將鍋蓋打開小半，利用鍋內(nèi)的蒸汽將包扎的報紙烘干。之后取出滅菌物品，放入超凈工作臺。注：滅菌過程要注意安全，加水要適量，氣墊要放正，防止漏氣，注意勿燙傷手。滅菌后的物品不能將棉塞上的報紙打開，避免外界細(xì)菌進(jìn)入污染培養(yǎng)基和蒸餾水。試管取出后應(yīng)該斜放，斜面長度達(dá)約為試管長度的1/2。（8） 無菌檢查：將滅菌的培養(yǎng)基放入37恒溫箱中培

15、養(yǎng)48小時，然后取出觀察，培養(yǎng)基上沒有細(xì)菌生長，說明培養(yǎng)基滅菌效果良好，符合實(shí)驗要求。然后將培養(yǎng)基貯存于冰箱的上層，溫度控制在4.注：不能將棉塞上的牛皮紙打開，避免細(xì)菌進(jìn)入污染培養(yǎng)基。2.2.3 菌體分離與純化(1) 取雞的腸道，將雞腸道內(nèi)的糞便等物清除干凈。用手術(shù)剪刀不斷剪切腸體，用研磨棒將腸研磨成糊狀直至沒有明顯的塊狀。于電子秤上準(zhǔn)確稱取1g腸體放入裝有9ml無菌水的試管中震蕩，使腸體與無菌水完全混勻，制成原液10。然后在無菌操作臺中用滅菌過的1ml吸管吸取1ml原液滴入裝有9ml無菌水的試管中混勻進(jìn)行10倍系列稀釋，稀釋至10。在無菌操作臺中取其中10、10、10 3個適宜濃度梯度的菌懸

16、液各0.1ml于FWA平板上涂勻，每個濃度梯度涂布3個平板，將涂好的平板于40下培養(yǎng)48h至菌落長出。(2) 在FWA平板上挑取菌落特征不同的菌落作稀釋劃線培養(yǎng)，并在相應(yīng)的平板上標(biāo)號112號，于40下恒溫培養(yǎng)48h。(3) 倒FWA平板10個，從前面已經(jīng)培養(yǎng)出來菌落的12個平板中挑選長勢相對較好特征不同的10株單個菌落作“Z”字形劃線培養(yǎng)。于40下恒溫培養(yǎng)48h。（注：每個平板上的“Z”線盡可能多，且不用相連，接種時不用灼燒接種環(huán)，在每個平板上貼上110號10個標(biāo)簽）(4) 取來自同一平板的單個菌落倒好的FWA斜面培養(yǎng)基上作“Z”字形劃線，貼上相對應(yīng)的標(biāo)簽于40下培養(yǎng)48h，后置于4冰箱中保藏

17、。(5) 菌體純化：從雞腸道中前段，中段，后段各分離12株菌落特征不同的菌株，分別編號112，挑取分離出來的36株單個菌落于FWA培養(yǎng)基上作“Z”字形劃線，于40下純化培養(yǎng)48h后得到30個菌株。2.2.4 革蘭氏染色（1） 涂片：用消毒棉球擦拭雙手，用鑷子取30塊干凈載玻片，在各個載玻片左右兩端各滴加一滴蒸餾水，用鉑金環(huán)取大腸桿菌加于左側(cè)蒸餾水制成的薄薄的菌涂面，做陰性對照。用鉑金環(huán)從培養(yǎng)皿中分別挑取標(biāo)號為130的菌株涂在玻片右側(cè)蒸餾水中做成菌涂面。（2） 晾干：將涂片放在通風(fēng)處自然晾干或在酒精燈火焰上方文火烘干。（3） 固定：手執(zhí)玻片一端，菌膜朝上，通過火焰23次進(jìn)行固定，以不燙手為宜。（

18、4） 結(jié)晶紫初染色：將玻片置于廢液缸擱架上，加適量的結(jié)晶紫染色液染色1min(以蓋滿菌落涂面為宜)，然后傾去染色液，用蒸餾水小心地沖洗。（5） 碘液媒染：滴加盧哥氏碘液，媒染1min后用蒸餾水洗去碘液。（6） 脫色：將玻片傾斜，連續(xù)滴加95%乙醇，脫色20s直至流出液無色，立即用蒸餾水沖洗。（7） 復(fù)染：滴加番紅復(fù)染3min，再用蒸餾水洗去涂片上番紅染色液。（8） 晾干：將染好的涂片放在空氣中自然晾干或用吸水紙吸干。（9） 鏡檢：先用低倍鏡后用高倍鏡，最后用油鏡觀察，并判斷以及記錄菌體的革蘭氏染色反應(yīng)性，結(jié)果見表1。2.2.5 菌株篩選2.2.5.1產(chǎn)蛋白酶菌株的篩選 本實(shí)驗選用酪蛋白作為底物

19、，菌落長出之后,若菌落四周出現(xiàn)透明的水解圈，說明該菌株能產(chǎn)生蛋白酶，水解培養(yǎng)基中的酪蛋白。蛋白酶篩選培養(yǎng)基接種后于40下培養(yǎng)48h。菌株分泌蛋白酶能力的大小，可以通過比較水解圈直徑：菌落直徑數(shù)值來判斷，該值越大，菌株產(chǎn)蛋白酶能力越強(qiáng)。2.2.5.2產(chǎn)脂肪酶菌株的篩選 產(chǎn)脂肪酶菌株的篩選培養(yǎng)基中含有Tween-80，它對脂肪酶的產(chǎn)生有促進(jìn)作用。經(jīng)接種后，若培養(yǎng)基上菌落周圍出現(xiàn)模糊的暈圈者，說明該菌株能產(chǎn)脂肪酶。菌落形成暈圈直徑：菌落直徑越大，表明此菌株產(chǎn)生的脂肪酶的量和能力都相對較強(qiáng)。菌株接種后置于40下培養(yǎng)48h后觀察結(jié)果。2.2.5.3產(chǎn)淀粉酶菌株的篩選 產(chǎn)淀粉酶菌株的篩選培養(yǎng)基中是以淀粉作

20、為碳氮源進(jìn)行培養(yǎng)，若接種之后培養(yǎng)基表面長出菌落，說明該菌株能產(chǎn)生淀粉酶，水解培養(yǎng)基中的淀粉作為生長的碳氮源。淀粉篩選培養(yǎng)基接種后于40下培養(yǎng)48h。然后往培養(yǎng)基中菌落表面滴加稀碘液，可以看見明顯的水解圈。菌株產(chǎn)淀粉酶能力的大小可以通過比較水解圈的直徑大小來判斷，若直徑越大，則說明該菌株產(chǎn)淀粉酶的能力越強(qiáng)。2.2.5.4產(chǎn)纖維素酶菌株的篩選 產(chǎn)纖維素酶菌株的刷選培養(yǎng)基中含有1%的中性紅水溶液，它能促進(jìn)菌落產(chǎn)生纖維素酶，經(jīng)過接種之后放在40下培養(yǎng)48h，若培養(yǎng)基表面長出菌落并且菌落周圍出現(xiàn)模糊的暈圈者，說明該菌株能產(chǎn)生纖維素酶。菌株產(chǎn)纖維素酶能力的強(qiáng)弱可以通過比較菌落和暈圈的大小來判斷。若菌落越小

21、，暈圈越大說明該菌株產(chǎn)纖維素酶的能力越強(qiáng)。3結(jié)果與分析3.1 菌種分離純化與革蘭氏染色 從健康的飼料雞腸道前段、中段、后段分離出細(xì)菌12株，依次編號為112號。革蘭氏染色結(jié)果表明飼料雞腸道36株菌株中前段的6號、10號、后段的3號、10號、12號菌株為革蘭氏陽性菌，其余23株為革蘭氏陰性菌，有8株為無效菌株。詳情見表1。表1 菌落形態(tài)特征與革蘭氏染色結(jié)果分析 Table 1 colony morphology characteristics and results of grams staining 菌株編號 形態(tài)特征 革蘭氏染色 前段1 很小，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，黃色，不透

22、明 G-前段2 較大，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，淡黃色，不透明 G-前段3 大，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，黃色，不透明 G-前段4 一般，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，淡黃色，透明 G-前段5 較大，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，黃色，不透明 G-前段6 較大，堆積，表面凸起，邊緣不整齊，濕潤，光澤，白色，透明 G+前段7 一般，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，淡黃色，不透明 G-前段8 很小，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，淡黃色，不透明 G-前段9 較大，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，黃色，不透明 G-前段10 大，堆積，表面凸起

23、，邊緣整齊，濕潤，光澤，淡黃色，不透明 G+前段11 很小，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，淡黃色，不透明 G-前段12 較小，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，淡黃色，不透明 G-中段1 較小，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，淡黃色，不透明 G-中段2 較小，堆積，表面凸起，邊緣不整齊，濕潤，光澤，淡黃色，不透明 G-中段3 很小，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，淡黃色，不透明 G-中段4 較大，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，淡黃色，不透明 G-中段5 很小，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，淡黃色，不透明 G-中段6 較大，堆積，表面凸起，邊緣不整齊，濕潤

24、，光澤，淡黃色，不透明 G-中段7 很小，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，淡黃色，不透明 G-中段8 一般，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，黃色，不透明 G-中段9 很小，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，淡黃色，不透明 G-中段10 較大，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，黃色，不透明 G-中段11 很小，堆積，表面凸起，邊緣不整齊，濕潤，光澤，淡黃色，不透明 G-中段12 一般，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，淡黃色，不透明 G-后段1 一般，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，黃色，不透明 G-后段2 一般，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，黃色，不透明

25、G-后段3 一般，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，淡黃色，不透明 G+后段4 小，堆積，表面凸起，邊緣不整齊，濕潤，光澤，黃色，不透明 G-后段5 大，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，深黃色，不透明 G-后段6 較小，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，黃色，不透明 G- 后段7 很大，堆積，表面凸起，邊緣不整齊，濕潤，光澤，淡黃色，不透明 G-后段8 一般，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，黃色，不透明 G-后段9 較小，堆積，表面凸起，邊緣不整齊，濕潤，光澤，黃色，不透明 G-后段10 一般，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，黃色，不透明 G+后段11 一般，堆積，表

26、面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，淡黃色，不透明 G-后段12 很小，堆積，表面凸起，邊緣整齊，濕潤，光澤，黃色，不透明 G+注：表中G- 代表革蘭氏陰性菌，G+ 代表革蘭氏陽性菌，- 代表無效的菌株。3.2 產(chǎn)蛋白酶菌株的篩選 從飼料雞腸道中用FWA培養(yǎng)基培養(yǎng)之后分離出來30株菌株，經(jīng)實(shí)驗培養(yǎng)測試，其中有21株能分泌蛋白酶。其中前段1 2 3 4 7中段2 3 5 6 7 10后段2 3 4 8號共15株菌株不能產(chǎn)蛋白酶。其中產(chǎn)蛋白酶能力最強(qiáng)的是雞腸道后段的12號菌株，其水解圈大小為1.10cm，D:d為3.67，其次為中段8號菌株。其中前段11號、后段1號、9號、10號菌株的產(chǎn)蛋白酶能力也很強(qiáng)

27、。其中產(chǎn)蛋白酶能力較弱的是中段4號菌株，其D:d為1.50。詳情請見表2。表2 飼料雞腸道中產(chǎn)蛋白酶的菌株 Table 2 feed the chicken intestines middle protease strains 菌株 菌落直徑 水解圈直徑 D:d編號 d/cm D/cm 飼前5 0.20 0.45 2.25飼前6 0.15 0.40 2.67飼前8 0.15 0.35 2.33飼前9 0.30 0.75 2.50飼前10 0.30 0.80 2.67飼前11 0.25 0.80 3.20飼前12 0.35 0.70 2.00飼中1 0.40 0.85 2.13飼中4 0.30

28、0.45 1.50飼中8 0.35 1.25 3.57飼中9 0.30 0.70 2.33飼中11 0.25 0.70 2.80飼中12 0.15 0.40 2.67飼后1 0.15 0.45 3.00飼后5 0.15 0.40 2.67飼后6 0.25 0.50 2.00飼后7 0.05 0.10 2.00飼后9 0.10 0.30 3.00飼后10 0.20 0.65 3.25飼后11 0.25 0.60 2.40飼后12 0.30 1.10 3.67 注：表中數(shù)據(jù)按照四舍五入原則精確到小數(shù)點(diǎn)后2位。（下面所有表格相同。）圖1 雞腸道中產(chǎn)蛋白酶的菌株P(guān)icture1 intestinal

29、protease producing strains in the chicken 3.3 產(chǎn)脂肪酶菌株的篩選 從雞腸道中分離出來的菌株中總共有18株菌株能分泌脂肪酶，其中雞腸道前段7號中段1、 2、3、5、6、7、8、10號以及后段1、2、3、4、5、6、9、10、12等18株菌株不能分泌脂肪酶。產(chǎn)脂肪酶能力最強(qiáng)的菌株是飼料雞腸前段2號，水解圈直徑為1.40cm，D:d為7.00；其次為中段12號菌株，D:d為5.33；另外前段4號、11號產(chǎn)脂肪酶的能力也不錯。產(chǎn)脂肪酶能力較弱的菌株為前段9號、中段11號、后段7號、11號等菌株。詳情請見表3。表3 雞腸道中產(chǎn)脂肪酶的菌株 Table 3 s

30、trains of intestinal lipase in the chicken 菌株 菌株直徑 暈圈直徑 D:d編號 d/cm D/cm 飼前1 0.55 1.30 2.36飼前2 0.20 1.40 7.00飼前3 0.25 0.50 2.00飼前4 0.15 0.70 4.67飼前5 0.25 0.80 3.20飼前6 0.20 0.75 3.75飼前8 0.10 0.30 3.00飼前9 0.45 0.55 1.22飼前10 0.45 1.30 2.89飼前11 0.35 1.40 4.00飼前12 0.35 0.90 2.57飼中4 0.25 0.85 3.40飼中9 0.15

31、0.45 3.00飼中11 0.15 0.25 1.67飼中12 0.15 0.80 5.33飼后7 0.10 0.15 1.50飼后8 0.05 0.10 2.00飼后11 0.15 0.25 1.67圖2 雞腸道中產(chǎn)脂肪酶的菌株P(guān)icture 2 chicken intestine middle lipase strain 3.4 產(chǎn)纖維素酶菌株的刷選 此次從雞腸道分離出來的細(xì)菌中有10株能分泌纖維素酶，其他的26株菌株不能產(chǎn)生該酶。產(chǎn)酶能力最強(qiáng)的是雞腸道中段的11號菌株，其水解圈大小為0.25cm，D:d為2.50。其中腸道前段的3號、12號以及中段的9號菌株產(chǎn)纖維素酶的能力不錯，它們的

32、D:d大小都在2.00左右。在這些產(chǎn)纖維素酶的菌株中，雞腸道12號以及后段10號菌株產(chǎn)纖維素酶的能力較弱，D:d大小為1.50。見表4。表4 雞腸道中產(chǎn)纖維素酶的菌株 Table 4 chicken intestine middle cellulase strains 菌株 菌株直徑 暈圈直徑 D:d編號 d/cm D/cm 飼前3 0.15 0.30 2.00飼前5 0.15 0.25 1.67飼前9 0.20 0.35 1.75飼前12 0.15 0.35 2.33飼中6 0.15 0.25 1.67飼中9 0.15 0.30 2.00飼中11 0.10 0.25 2.50飼中12 0.2

33、0 0.30 1.50飼后5 0.15 0.25 1.67飼后10 0.10 0.15 1.50 圖3 雞腸道中產(chǎn)纖維素酶的菌株P(guān)icture 3 chicken intestine middle cellulase strains 3.5 產(chǎn)淀粉酶菌株的篩選 經(jīng)實(shí)驗證明，從雞前、中、后三段腸道分離出來的36株菌株中能夠分泌淀粉酶的菌株共有12株，占總的33.3%。余下的24株菌株不能分泌淀粉酶，占總數(shù)的66.7%。產(chǎn)酶菌株當(dāng)中雞腸道中段的12號菌株產(chǎn)酶能力最強(qiáng)，其水解圈直徑大小為0.70cm，菌株直徑大小為0.40cm，其D:d大小為1.75。菌株當(dāng)中前段4號、8號以及后段當(dāng)中的6號菌株產(chǎn)酶

34、能力都不錯，它們的D:d大小都在1.70以上。而這些產(chǎn)酶菌株當(dāng)中以腸道后段3號菌株的產(chǎn)酶能力最弱，其D:d大小僅為1.33。詳情請見表5。表5 雞腸道中產(chǎn)淀粉酶的菌株 Table 5 chicken intestine middle amylase strains 菌株 菌株直徑 暈圈直徑 D:d編號 d/cm D/cm 飼前1 0.55 0.80 1.45飼前3 0.50 0.70 1.40飼前4 0.35 0.60 1.71飼中8 0.35 0.60 1.71飼中12 0.40 0.70 1.75飼后1 0.35 0.55 1.57飼后3 0.60 0.80 1.33飼后5 0.40 0.

35、65 1.63飼后6 0.35 0.60 1.71飼后9 0.50 0.70 1.40飼后10 0.50 0.75 1.40飼后11 0.35 0.55 1.57圖3 雞腸道中產(chǎn)纖維素酶的菌株P(guān)icture 3 Chicken intestine middle cellulase strains4 討論與小結(jié)4.1 本次實(shí)驗從健康的飼料雞個體腸道前中后三段分離得到的36株菌中，有21株能分泌蛋白酶，占菌株總數(shù)的58.3%；有18株菌能分泌脂肪酶，占總菌株數(shù)的50.0%；有12株菌株能分泌淀粉酶，占菌株總數(shù)的33.3%；有9株能分泌纖維素酶，占總數(shù)的25.0%。由實(shí)驗數(shù)據(jù)可知在飼料雞腸道內(nèi)產(chǎn)蛋白

36、酶和脂肪酶的菌株占多數(shù)，而產(chǎn)淀粉酶和纖維素酶的菌株數(shù)目占少數(shù)。由于這些產(chǎn)酶菌株的作用，使得雞的腸道細(xì)菌群能夠維持平衡，提高了飼料的消化利用率，促進(jìn)了雞的生長。4.2 在21株產(chǎn)蛋白酶的菌株中，革蘭氏陰性菌株有17株，革蘭氏陽性菌株有4株；在18株分泌脂肪酶的菌株中，革蘭氏陰性菌株有16株，革蘭氏陽性菌株為2株；在12株產(chǎn)淀粉酶的菌株中，有10株為革蘭氏陰性菌，2株為革蘭氏陽性菌；在9株產(chǎn)纖維素酶的菌株中，有8株為革蘭氏陰性菌，1株為革蘭氏陽性菌?？偟?6株菌中有23株為革蘭氏陰性菌，占總數(shù)的63.9%，這說明在飼料雞腸道內(nèi)革蘭氏陰性菌的產(chǎn)酶能力比陽性菌強(qiáng)。4.3 本次實(shí)驗中可以看出產(chǎn)蛋白酶能力

37、最強(qiáng)的是雞腸道后段的12號菌；產(chǎn)脂肪酶的能力最強(qiáng)的是腸道前段2號菌；產(chǎn)纖維素酶能力最強(qiáng)的是雞腸道中段11號菌；產(chǎn)淀粉酶能力最強(qiáng)的是雞腸道中段12號菌。4.4 本次實(shí)驗中產(chǎn)4種酶的菌株有1株，產(chǎn)3種酶的菌株有8株，產(chǎn)2種酶的菌株有13株，產(chǎn)1種酶的菌株有6株，還有2株菌不產(chǎn)4種酶中的任何一種。4.5 本次試驗產(chǎn)蛋白酶的21株菌株中腸道前段有7株，中段有6株，后段有8株，可知飼料雞腸道內(nèi)產(chǎn)蛋白酶的菌株分布比較均勻；產(chǎn)淀粉酶的12株菌中腸道前段有3株，中段2株，后段7株，可知在飼料雞腸道中消化分解淀粉的菌株多分布在腸道后段；產(chǎn)脂肪酶的18株菌株中腸道前段有11株，中段4株，后段3株，可知在飼料雞腸道

38、內(nèi)能消化纖維素的菌株多分布于腸道前段；產(chǎn)纖維素的9株菌株中腸道前段有3株，中段4株，后段2株，由此可知，在飼料雞腸道內(nèi)消化分解纖維素酶的菌株分布比較均勻。4.6 在第一次菌體分離與純化的過程中，將菌落作稀釋劃線培養(yǎng)時，有的菌體受到污染，又重新將菌體分離劃線培養(yǎng)。此過程雖然比較簡單，但也要細(xì)致小心，不能讓其受到污染，避免產(chǎn)生實(shí)驗誤差。4.7 革蘭氏染色鏡檢過程中，極個別菌株表現(xiàn)為紫短桿和紅長桿或者既有桿菌又有球菌，導(dǎo)致無法確認(rèn)革蘭氏陰性還是陽性。4.8 飼料雞腸道產(chǎn)酶菌群的篩選和分布研究有利于在不同養(yǎng)殖環(huán)境條件下掌握飼料雞養(yǎng)殖的最佳投養(yǎng)方式獲得最大的產(chǎn)出，掌握和了解雞腸道菌群的組成和作用，將雞腸道分離出來的菌群制成微生態(tài)制劑可以用來調(diào)節(jié)雞腸道菌群組成能幫助養(yǎng)殖者更好地開展雞的生長發(fā)育以及抗病防病的管理工作。同時產(chǎn)酶菌群的分離也將為生產(chǎn)和各個領(lǐng)域提供益生菌原料而起到不可估量的作用。5 參考文獻(xiàn)1 東秀珠, 蔡妙英. 常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊M. 北京: 科學(xué)出版社, 2001.2 靳旭. 馬雞中國特有的珍禽J. 知識就是力量,2005.3 張國,張正旺. 山西五鹿山保護(hù)區(qū)褐馬雞種群密度調(diào)查J. 動物學(xué)雜志,2001.4 Papasouliotis K, Sparkes A H, Werrett G, et al. Assessmentof t he