《微生物肺炎克雷伯》ppt課件

1、標(biāo)本：尿標(biāo)本：尿培育基：血平板、培育基：血平板、MACMACEMBEMB、SSSS、XLDXLDKIAKIA、MIUMIU、葡萄糖蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、枸櫞酸鹽培育基、枸櫞酸鹽培育基、鳥氨酸脫羧酶培育基及對看管鳥氨酸脫羧酶培育基及對看管試劑：革蘭染液、莢膜染液、試劑：革蘭染液、莢膜染液、V-PV-P試劑、試劑、吲哚試劑、吲哚試劑、95%95%乙醇溶液乙醇溶液器材：孵育箱、接種環(huán)、酒精燈、顯微鏡器材：孵育箱、接種環(huán)、酒精燈、顯微鏡察看菌落形狀：血平板上構(gòu)成圓形、凸起、灰白色、不溶血、光亮的大菌落，相鄰菌落易于交融，粘液狀，假設(shè)用接種針蘸取呈長絲狀拽起；MAC上構(gòu)成乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸的菌落，即紅色或

2、粉紅色、較大、渾濁、凸起、有光澤的粘液型菌落EMB上是大、粘稠、紅色、易溶于一片的菌落，SS上是紅色或粉紅色、或具有粉紅中心的無色菌落，XLD上呈不透明黃色的菌落。制片制片1.1.載玻片預(yù)備：玻片先在載玻片預(yù)備：玻片先在9595乙乙醇中去除油污，再在火焰上燒去醇中去除油污，再在火焰上燒去粘附的乙醇，待冷，做好標(biāo)志。粘附的乙醇，待冷，做好標(biāo)志。2.2.涂片：在干凈無油膩的玻片中涂片：在干凈無油膩的玻片中央放一小滴蒸餾水或用接種環(huán)央放一小滴蒸餾水或用接種環(huán)挑挑1-21-2滴水，用無菌的接種環(huán)挑滴水，用無菌的接種環(huán)挑取少量菌種與水滴充分混勻，涂取少量菌種與水滴充分混勻，涂成極薄的菌膜，涂布面積約成極

3、薄的菌膜，涂布面積約1cm21cm2 。 3.3.枯燥：涂片在室溫下使其自然枯燥：涂片在室溫下使其自然枯燥，也可以小心地在酒精燈上枯燥，也可以小心地在酒精燈上高處悄然加熱，使水分蒸發(fā)，但高處悄然加熱，使水分蒸發(fā)，但切勿緊靠火焰或加熱時間過長，切勿緊靠火焰或加熱時間過長，以防標(biāo)本烤枯而變形。以防標(biāo)本烤枯而變形。 4.4.固定：手執(zhí)玻片一端，有菌膜固定：手執(zhí)玻片一端，有菌膜的一面朝上，經(jīng)過微火三次手的一面朝上，經(jīng)過微火三次手指觸摸反面不燙手為宜，待玻指觸摸反面不燙手為宜，待玻片冷卻后再進(jìn)展染色。片冷卻后再進(jìn)展染色。 革蘭染色：挑取可疑菌落涂在干凈的玻片上自然晾干，用結(jié)晶紫1液覆蓋細(xì)菌初染1min，

4、清水沖洗干凈玻片再滴加革蘭染液2液媒染1min，清水沖去外表的染液，用95乙醇3液脫洗約30s以乙醇不再有顏色為好，最后用稀釋的復(fù)紅4液復(fù)染30s。自然晾干后在顯微鏡下察看形狀。莢膜染色1.染色：玻片置于玻片擱架上，加適量以蓋滿菌膜為度草酸銨結(jié)晶紫或石炭酸復(fù)紅染液于菌膜部位，染色1-2min。 2.水洗：斜置載玻片，在自來水龍頭或洗瓶下用小股水流沖洗，直至洗下的水呈無色為止。 3.枯燥：自然枯燥或用吸水紙吸去涂片上的水，用吸水紙時切勿將菌體擦掉。 4.鏡檢：用高倍鏡和油鏡察看并繪細(xì)菌形狀并繪圖于記錄表中。鏡下形狀：G-桿菌，卵圓形或球桿狀細(xì)菌，長成雙陳列，有莢膜，無鞭毛。如有需求，可進(jìn)展莢膜染

5、色，染色后菌體呈卵圓形或球桿狀，成雙陳列，菌體外繞以明顯的莢膜長較菌體寬2-3倍。生化鑒別生化鑒別定科：氧化酶實(shí)驗(yàn)定科：氧化酶實(shí)驗(yàn)- -、IMViCIMViC- - - +- +定屬：定屬：KIAKIAAA+ -AA+ -、MIUMIU- - - - + +、 O/FO/FF F、鳥氨酸脫羧酶實(shí)驗(yàn)、鳥氨酸脫羧酶實(shí)驗(yàn)- -定種：吲哚定種：吲哚- -編碼鑒定編碼鑒定血清學(xué)鑒定血清學(xué)鑒定氧化酶實(shí)驗(yàn)：氧化酶細(xì)胞色素氧化酶是細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的最終呼吸酶。具有氧化酶的細(xì)菌，首先使細(xì)胞色素C氧化，再由氧化型細(xì)胞色素C將鹽酸二甲基對苯二胺或鹽酸四甲基對苯二胺氧化成紅色或藍(lán)色的醌類化合物。主要用于腸桿菌科細(xì)菌

6、與假單胞菌的鑒別，前者為陰性，后者為陽性。奈瑟菌屬、莫拉菌屬細(xì)菌也呈陽性反響。 backI吲哚：有些細(xì)菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚，與對甲基氨基苯甲醛結(jié)合，生成紅色化合物玫瑰吲哚。主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。M甲基紅：某些細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸可進(jìn)一步分解為甲酸、乙酸等酸性物質(zhì)，不再繼續(xù)分解，故培育基pH在4.5以下，參與甲基紅指示劑后呈紫紅色陽性。有些細(xì)菌將分解葡萄糖產(chǎn)生的酸進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為醇酮等非酸性物質(zhì)，使培育基pH在6.2以上，參與甲基紅試劑成橘黃色陰性。普通用于腸桿菌科各菌屬的鑒別。Vi：某些細(xì)菌分解葡萄糖生成丙酮酸，丙酮酸可進(jìn)一步脫羧生成乙酰甲基甲醇，乙酰甲

7、基甲醇在堿性環(huán)境下被氧化成二乙酰，后者與蛋白胨中的精氨酸所含的胍基起作用，生成紅色胍縮二乙酰，為VP實(shí)驗(yàn)陽性。假設(shè)培育基中胍基含量少，參與少量含胍基的化合物如肌酸肌酐，可加速其反響。普通用于腸桿菌科各菌屬的鑒別。C枸櫞酸鹽枸櫞酸鹽培育基中不含任何糖類，枸櫞酸鹽為獨(dú)一碳源，磷酸二氫銨為獨(dú)一氮源。假設(shè)細(xì)菌能利用銨鹽作為獨(dú)一氮源，并能利用枸櫞酸鹽作為獨(dú)一碳源，在枸櫞酸鹽培育基上生長，并分解枸櫞酸鹽為碳酸鹽，使培育基變堿，指示劑溴麝香草酚藍(lán)由綠色變?yōu)樯钏{(lán)色，為枸櫞酸鹽利用實(shí)驗(yàn)陽性。假設(shè)細(xì)菌不能利用枸櫞酸鹽為碳源，那么細(xì)菌不能生長，培育基不變色。backKIA克氏雙糖鐵克氏雙糖鐵斜面培育基，用酚紅作指示

8、劑，在酸性時呈黃色，堿性時呈紅色，培育基中的葡萄糖含量僅為乳糖或蔗糖的1/10，假設(shè)細(xì)菌只分解葡萄糖而不分解乳糖，分解葡萄糖產(chǎn)酸使ph降低，因此斜面和底層均先呈黃色，但因葡萄糖含量較少，所以生成的少量酸可因接觸空氣而氧化，并因細(xì)菌生長繁衍利用含氮物質(zhì)而生成堿性化合物中和，使斜面部分又變成紅色；底層由于處于缺氧形狀，細(xì)菌分解葡萄糖所生成的酸類一時不被氧化而仍堅(jiān)持黃色。假設(shè)細(xì)菌分解葡萄糖、乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，斜面與底層均呈黃色，且有氣泡。細(xì)菌產(chǎn)生硫化氫時與培育基中的硫酸亞鐵作用，構(gòu)成黑色的硫化鐵。主要用于鑒別腸桿菌科細(xì)菌。backMIU動力、吲哚、尿酶培育基為尿素、蛋白胨成分的半固體培育基，指示劑為酚紅

9、。具有色氨酸酶的細(xì)菌能分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚，參與吲哚試劑后，培育基上層的吲哚試劑會變紅；具有尿酶的細(xì)菌能分解尿素產(chǎn)氨，使整個培育基變堿呈紅色；有動力的細(xì)菌沿穿刺線分散生長。backO/F氧化、發(fā)酵不同細(xì)菌對不同的糖分解才干及代謝產(chǎn)物不同，這種才干因能否有氧氣的存在而異。細(xì)菌在分解葡萄糖的過程中，必需有分子氧參與的，稱為氧化型，氧化型細(xì)菌在無氧環(huán)境中不能分解葡萄糖。細(xì)菌在分解葡萄糖的過程中，可以進(jìn)展無氧降解的，稱為發(fā)酵型，發(fā)酵型細(xì)菌在有氧或無氧的環(huán)境中都能分解葡萄糖。不分解葡萄糖的細(xì)菌稱為產(chǎn)堿型。利用此實(shí)驗(yàn)可以區(qū)分細(xì)菌的代謝類型。主要用于腸桿菌科細(xì)菌與非發(fā)酵菌的鑒別，前者均為發(fā)酵型，而后

10、者通常為氧化型或產(chǎn)堿型。back氨基酸脫羧酶實(shí)驗(yàn)：具有氨基酸脫羧酶的細(xì)菌，可分解氨基酸，使其脫掉羧基，生成胺和二氧化碳，稱為脫羧反響；并使培育基變堿，可用指示劑顯示出來。最常用的氨基酸有三種，L-賴氨酸脫羧構(gòu)成尸胺，L-鳥氨酸脫羧構(gòu)成腐胺，L-精氨酸脫羧構(gòu)成精胺。本實(shí)驗(yàn)主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。back吲哚：有些細(xì)菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚，與對甲基氨基苯甲醛結(jié)合，生成紅色化合物玫瑰吲哚。主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。back本卷須知本卷須知1 1、標(biāo)本采集時要用無菌尿杯搜集，條件允、標(biāo)本采集時要用無菌尿杯搜集，條件允許時可采集二次晨尿或尿三杯的中尿進(jìn)展許時可采集二次晨尿或

11、尿三杯的中尿進(jìn)展細(xì)菌培育。細(xì)菌培育。2 2、標(biāo)本接種等操作時要留意無菌操作。、標(biāo)本接種等操作時要留意無菌操作。3 3、制片采取標(biāo)本時要選取優(yōu)勢菌落進(jìn)展涂、制片采取標(biāo)本時要選取優(yōu)勢菌落進(jìn)展涂片，涂片時要適量挑取細(xì)菌，涂開并使其片，涂片時要適量挑取細(xì)菌，涂開并使其均勻分布在載坡片上。均勻分布在載坡片上。4 4、染色時要正確掌握染色的時間和染液的、染色時要正確掌握染色的時間和染液的順序，洗脫時要根據(jù)涂片厚薄靈敏掌握，順序，洗脫時要根據(jù)涂片厚薄靈敏掌握，并要盡量淋洗干凈，以免復(fù)染效果不佳。并要盡量淋洗干凈，以免復(fù)染效果不佳。5 5、鏡檢時要等染片晾干后再在顯微鏡下察、鏡檢時要等染片晾干后再在顯微鏡下察看，以免油鏡察看用的香柏油會溶解標(biāo)本?？?，以免油鏡察看用的香柏油會溶解標(biāo)本。6 6、生化實(shí)驗(yàn)時參照、生化實(shí)驗(yàn)時參照SOPS