2017年第138號(hào)公告附件3解析

1、1附件 3食用油脂中脂肪酸的綜合檢測(cè)法BJS 2017121 范圍本方法適用于食用植物油（花生油、大豆油、玉米油、植物調(diào)和油、橄欖油、葵花籽油、芥花 油、菜籽油、香油、棕櫚油等）是否存在異常的檢測(cè)及識(shí)別。2 方法原理將樣品甲酯化，采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜內(nèi)標(biāo)法定量測(cè)定13 種脂肪酸甲酯含量，再根據(jù)脂肪酸甲酯含量判定油脂是否存在異常，對(duì)異常樣品進(jìn)一步排查確認(rèn)。3 試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682 規(guī)定的一級(jí)水。3.1 試劑3.1.1 正己烷（C6H14）:色譜純。3.1.2 甲醇（CH3OH）:色譜純。3.1.3 無水硫酸鈉（Na2SO4）：分析純。3.1.

2、4 氫氧化鈉（NaOH ）:分析純。3.1.5 三氟化硼甲醇溶液：50%。3.2 溶液配制3.2.1 含 2%氫氧化鈉的甲醇溶液：準(zhǔn)確稱取2 g 氫氧化鈉（3.1.4）于燒杯中，加入甲醇（3.1.2），超聲至氫氧化鈉完全溶解，移入100 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度。3.2.2 15%的三氟化硼甲醇溶液： 取 50%三氟化硼甲醇溶液 （3.1.5）30 mL，緩慢加入到裝有 70 mL甲醇（3.1.2）的燒杯中，用玻璃棒攪拌均勻。3.3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)3.3.1 十一碳酸甘油三酯（C36H68O6,CAS: 13552-80-2 ）標(biāo)準(zhǔn)品，純度 98%。3.3.2 十一碳酸甲酯（C12H24O2

3、,CAS : 1731-86-8）標(biāo)準(zhǔn)品，純度 99%。3.3.3 37 種脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)品，各組分濃度參考附錄A。3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.4.1 十一碳酸甘油三酯內(nèi)標(biāo)溶液（1000 mg/L ）2稱取 0.10 g （精確至 0.0001 g）十一碳酸甘油三酯，加入 50 mL 甲醇溶解，移入 100 mL 容量 瓶中，以甲醇定容，制成儲(chǔ)備液。儲(chǔ)備液于-20C可冷藏保存三個(gè)月。 使用時(shí)以甲醇稀釋成 50 mg/L 的中間液，現(xiàn)用現(xiàn)配。3.4.2 十一碳酸甲酯內(nèi)標(biāo)溶液（1000 mg/L ）稱取 0.10 g （精確至 0.0001 g）十一碳酸甲酯，加入 50 mL 正己烷溶解，

4、移入 100 mL 容量瓶 中，以正己烷定容，制成儲(chǔ)備液。儲(chǔ)備液于-20C可冷藏保存三個(gè)月。使用時(shí)以正己烷稀釋成 50 mg/L 的中間液，現(xiàn)用現(xiàn)配。34 337 種脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液將脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液從安瓿瓶中完全轉(zhuǎn)移至10 mL 容量瓶中，用正己烷定容，于-20C冷藏可保存一周。根據(jù)需要稀釋成適當(dāng)濃度的含5.00 mg/L 十一碳酸甲酯內(nèi)標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。4 儀器與設(shè)備4.1 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC/MS ）。4.2 恒溫水浴：（40C100C）土 1C。4.3 分析天平：感量 0.1 mg。4.4 渦旋振蕩器。4.5 烘箱。5 分析步驟5.1 樣品前處理稱取樣品 0.

5、1 g （精確至 0.1 mg）于 250 mL 燒瓶中，加入 50 mg/L 十一碳酸甘油三酯內(nèi)標(biāo)1mL（相當(dāng)于 50），加入含 2%氫氧化鈉的甲醇溶液（3.2.1） 8 mL,混合搖勻，連接回流冷凝器并在 80C水浴上回流，直至油滴消失；從回流冷凝器上端加入15%三氟化硼甲醇溶液（3.2.2） 7 mL ,繼續(xù)回流 2 min;用去離子水沖洗回流冷凝器，繼續(xù)加熱1 min ;從水浴上取下燒瓶，迅速冷卻至室溫，準(zhǔn)確加入 10 mL 正己烷，振搖 2 min，吸取上層正己烷相，使其通過無水硫酸鈉吸水后， 過 0.22 卩帕勺有機(jī)相濾膜，待 GC/MS 檢測(cè)。5.2 儀器條件a. 色譜柱：毛細(xì)管

6、色譜柱（ DB-23 , 60 mX0.25 mmX0.25 ）耳 n 或性能相當(dāng)者。b. 載氣：高純氦氣。c. 載氣流量：1.0 mL/min。d. 進(jìn)樣口溫度：270C。e. 程序升溫：初始溫度 60C持續(xù) 3.0 min ;60C160C,升溫速率 15C/min ;保持 0 min ;160C210C,升溫速率 8C/min ;保持 0 min ;3210C230C,升溫速率 3.15C/min ;保持 10 min。f.進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，分流比5 : 1。g. 進(jìn)樣體積：1.0wLh. 離子源：EI, 70 eV。i.離子源溫度：230C。j. 四極桿溫度：150C。k. 接口溫度

7、：270C。4l.定量分析為選擇離子掃描（SIM ）, 14 種脂肪酸甲酯的保留時(shí)間、定性及定量離子見表表 114 種脂肪酸甲酯的保留時(shí)間、定性離子和定量離子序號(hào)脂肪酸甲酯定 量離子（m/z）定性離子（m保留時(shí)間（min）1C6:07487、 99、 598.342C8:07487、 127、 5910.443C10:07487、14312.234C11:0 （內(nèi)標(biāo)）7487、200、14313.085C12:07487、143、18313.946C13:07487、143、18514.797C14:07487、143、19915.668C14:1 n57487、166、20816.069C1

8、5:07487、143、21316.5310C16:1 n77487、194、23617.8111C17:07487、143、28418.4212C18:2 n6t6781、 95、 29420.0313C20:3 n67967、9520.7914C20:4 n67991、 67、 10523.625.3 結(jié)果計(jì)算按下式（1）計(jì)算樣品中脂肪酸的含量（以脂肪酸甲酯計(jì)）式中:X 樣品中脂肪酸的含量（以脂肪酸甲酯計(jì)），單位為毫克每千克（mg/kg）c樣品溶液中脂肪酸甲酯的濃度，單位為微克每毫升（/mL）V樣品溶液定容體積，單位為毫升（mL ）m樣品稱取的質(zhì)量，單位為克（g）計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

9、6 結(jié)果判定依據(jù)脂肪酸甲酯含量判定油脂是否存在異常，判定異常時(shí)提示油脂中可能存在反復(fù)高溫處理 并經(jīng)高度精煉獲得的異常油脂。判定依據(jù)見表2。(1)5表 2 依據(jù)脂肪酸甲酯含量判定油脂是否異?；衔锱卸ㄒ罁?jù)（mg/kg）C6:0 x30，油脂可能存在異常，若確認(rèn)不是棕櫚油，可判定為異常油脂樣品C8:0 x120，油脂可能存在異常，若排除棕櫚油干擾 ，且確認(rèn)不是葵花籽油 ，可判定為異常 油脂樣品C10:0 x100，油脂可能存在異常，若排除棕櫚油干擾 ，且確認(rèn)不是芥花油和菜籽油，可判定為異常油脂樣品C12:0400 x130，油脂可能存在異常，若排除棕櫚油和菜籽油干擾，且確認(rèn)不是芥花油和香油，可判定

10、為異常油脂樣品x400，油脂可能存在異常，若排除棕櫚油干擾，可判定為異常油脂樣品C13:0 x10，可判定為異常油脂樣品C14:0 x1200，油脂可能存在異常，若排除棕櫚油干擾，可判定為異常油脂樣品C14:1 n5x10，可判定為異常油脂樣品C15:0600 x240，油脂可能存在異常，若排除棕櫚油干擾，且確認(rèn)不是芥花油和菜籽油，可判定為異常油脂樣品x600，油脂可能存在異常，若排除棕櫚油干擾，可判定為異常油脂樣品C16:1 n7x2000，油脂可能存在異常，若排除芥花油、菜籽油、橄欖油和棕櫚油干擾（1 2），可判定為異常油脂樣品C17:0 x1800，油脂可能存在異常，若排除橄欖油干擾 ，

11、可判定為異常油脂樣品C18:2 n6tx800，可判定為異常油脂樣品C20:3 n6450 x220，油脂可能存在異常，若排除菜籽油干擾，可判定為異常油脂樣品x450，可判定為異常油脂樣品C20:4 n6120 x36，油脂可能存在異常，若排除菜籽油干擾，可判定為異常油脂樣品x120，可判定為異常油脂樣品注：（1）確認(rèn)不是干擾油的方法：采用氣相色譜法測(cè)定樣品中37 種脂肪酸含量，根據(jù) 37 種脂肪酸含量分布結(jié)合附錄 C 進(jìn)行確認(rèn)，檢測(cè)方法參考 GB 5009.168-2016。（2）排除棕櫚油、菜籽油干擾的方法：參考表 3。表 3 排除干擾油的方法化合物方法說明（mg/kg）C8:0 x（樣品

12、中肉豆蔻酸 C14:0 的含量X0.04），可排除棕櫚油干擾C10:0 x（樣品中肉豆蔻酸 C14:0 的含量X0.072），可排除棕櫚油干擾6C12:0 x（樣品中肉豆蔻酸 C14:0 的含量X1.00），可排除棕櫚油干擾 x（樣品中芥酸C22:1 n9 的含量X0.08），可排除菜籽油干擾C15:0 x（樣品中肉豆蔻酸 C14:0 的含量X0.12），可排除棕櫚油干擾C20:3 n6x（樣品中芥酸 C22:1 n9 的含量X0.15），可排除菜籽油干擾C20:4 n6x（樣品中芥酸 C22:1 n9 的含量X0.04），可排除菜籽油干擾C14:0/C12:0 比值x20，可排除棕櫚油干擾7

13、 質(zhì)量控制7.1 方法空白以十一碳酸甘油三酯為空白，進(jìn)行脂肪酸過程空白對(duì)照。7.2 質(zhì)控樣品7.2.1 以正常食用植物油（純大豆油、菜籽油、花生油）做對(duì)照，每批樣品處理過程均以這三種作 為陰性對(duì)照。722 以已確定為“異常油脂”的樣品作陽性對(duì)照，同時(shí)以不同稀釋度進(jìn)行對(duì)照。7.3 質(zhì)譜儀的質(zhì)量數(shù)校正采用儀器自動(dòng)調(diào)諧 PFTBA 進(jìn)行質(zhì)量數(shù)校正。7附錄 A脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液各組分濃度表 A 脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液各組分濃度序號(hào)組分中文名稱組分英文名稱CAS No.簡(jiǎn)稱純度濃度/(mg/mL)1丁酸甲酯Methyl butyrate623-42-7C4:099.90.4022己酸甲酯Methyl

14、 hexa no ate106-70-7C6:099.70.3993辛酸甲酯Methyl octa no ate111-11-5C8:099.90.3994癸酸甲酯Methyl deca no ate ( caprate )110-42-9C10:099.90.3995十一碳酸甲酯Methyl un deca no ate1731-86-8C11:099.50.1996十二碳酸甲酯Methyl laurate111-82-0C12:099.80.3987十三碳酸甲酯Methyl trideca no ate1731-88-0C13:099.40.1998十四碳酸甲酯Methyl myrista

15、te124-10-7C14:099.70.4009順-9-十四碳一烯酸甲酯Myristoleic acid methyl ester56219-06-8C14:1 n599.90.20210十五酸甲酯Methyl pen tadeca no ate7132-64-1C15:099.60.200811順-10-十五烯酸甲酯Cis-10-pe ntadece noic acid methyl ester90176-52-6C15:1 n599.00.19712十六碳酸甲酯Methyl palmitate112-39-0C16:099.90.59813順-9-卜六碳一烯酸甲酯Methyl palmi

16、toleate1120-25-8C16:1 n799.70.19914十七碳酸甲酯Methyl heptadeca no ate1731-92-6C17:099.90.20115順-10- 卜一烯酸甲酯Cis-10-heptadece noic acid methyl ester75190-82-8C17:1 n799.90.20016十八碳酸甲酯Methyl stearate112-61-8C18:099.90.39917反-9-十八碳一烯酸甲酯Tra ns-9-elaidic methyl ester1937-62-8C18:1 n9t96.90.19418順-9-十八碳一烯酸甲酯Cis-

17、9-oleic methyl ester112-62-9C18:1 n9c99.90.39919反，反-9,12-十八碳二烯酸甲酯Li nolelaidic acid methyl ester2566-97-4C18:2 n6t99.90.20020順，順-9,12-十八碳二烯酸甲酯Methyl li noleate112-63-0C18:2 n6c99.90.20021二十碳酸甲酯Methyl arachidate1120-28-1C20:099.90.40122順，順，順-6,9,12-十八碳三烯酸甲酯GAMMA-li nole nic acid methyl ester16326-32-

18、2C18:3 n699.50.19823順-11-二十碳一烯酸甲酯Methyl eicose no ate2390-09-2C20:1 n999.90.20124順，順，順-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯Alpha-Methyl li no le nate301-00-8C18:3 n399.60.200925二十一碳酸甲酯Methyl hen eicosa no ate6064-90-0C21:099.50.20126順，順-11,14-花生二烯酸甲酯Cis-11,14-eicosadie noic acid methyl ester2463-02-7C20:2 n699.90.19927

19、二十二碳酸甲酯Methyl behe nate929-77-1C22:099.80.39828順，順，順一 8,11,14 花生三烯酸甲酯Cis-8,11,14-eicosatrie noic acid methyl ester21061-10-9C20:3 n699.10.19729順-13-二十二碳一烯酸甲酯Methyl erucate (cis-13-docose noic acid methyl ester)1120-34-9C22:1 n999.70.19930順-11,14,17-花生三烯酸甲酯Cis-11,14,17-eicosatrie noic acid methyl est

20、er55682-88-7C20:3 n399.20.19831順-5,8,11,14-花生四烯酸甲酯Methyl cis-5,8,11,14-eicosatet2566-89-4C20:4 n699.30.20032二十三碳酸甲酯Methyl tricosa no ate2433-97-8C23:099.90.20133順-13,16-二十二碳二烯酸甲酯Cis-13,16-docosadie noic acid methyl ester61012-47-3C22:2 n699.90.20034二十四碳酸甲酯Methyl lig no cerate2442-49-1C24:099.80.3993

21、5順-5,8,11,14,17-花生五烯酸甲酯Methyl cis-5,8,11,14,17-eicosatet2734-47-6C20:5 n399.90.19936順-15-二十四一烯酸甲酯Methyl n erv on ate2733-88-2C24:1 n999.90.20037順-4,7,10,13,16,19 -二十二碳六烯酸甲酯cis-4,7,10,13,16,19-Docosahexae no ic acid methyl ester2566-90-7C22:6 n399.70.19810各類典型食用植物油及“異常油脂”參考譜圖圖 B.1 37 種脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)SIM 圖附錄 Biounoance12QiOOQ -110000loaoDO -90000一90ODO -0二5-msCJ70ODO一60000 -500DO -4QiQQ0一3000020)0 DO一10000 -rime-*10.00LU3dJ20.00JOO 不.QO 26 00 23.00 O.QQ圖 B.8 典型“異常油脂”