血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶測(cè)定

1、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測(cè)定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測(cè)定 比色分析法比色分析法實(shí) 驗(yàn) 提 綱 實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 酶活性測(cè)測(cè)定原理與與方法2 比色分析法原理與與公式計(jì)計(jì)算3 722分光光度計(jì)計(jì)操作方法與與注意事項(xiàng)項(xiàng)4 思考題題51實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?234掌握血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測(cè)定的原理熟悉血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測(cè)定的方法熟悉比色分析法了解722分光光度計(jì)的使用方法2酶活性測(cè)定原理與方法酶活性測(cè)定原理與方法酶活性測(cè)定原理酶活性測(cè)定原理 2,42,4二硝基苯肼二硝基苯肼 ( (黃色黃色) )丙酮酸二硝基苯腙丙酮酸二硝基苯腙(紅棕色紅棕色)NaOHNaOHOC(CH2)2COOHCOOH+OC(CH2)2COOHCOO

2、H+SCH3CH2CHNH2COOHCH2SCH3CH2CHNH2COOHCH2SCH3CH2CHNH2COOHCH2SCH3CH2CHNH2COOHCH2NH2CH(CH2)2COOHCOOHNH2CH(CH2)2COOHCOOH-酮戊二酸酮戊二酸丙氨酸丙氨酸谷氨酸谷氨酸丙酮酸丙酮酸GPTGPT丙酮酸丙酮酸酶活性測(cè)定方法酶活性測(cè)定方法2酶活性測(cè)定原理與方法酶活性測(cè)定原理與方法1 1試管號(hào)試管號(hào)標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)空白管空白管測(cè)定管測(cè)定管測(cè)定測(cè)定空白管空白管丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液（丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液（mlml）(1ml=100g)(1ml=100g)0.10.1新鮮血清（新鮮血清（mlml）0.10.10.1

3、0.1底物液（底物液（3737）（）（mlml）0.50.50.50.50.50.50.1mol/L0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（磷酸鹽緩沖液（mlml）(pH=7.4)(pH=7.4)0.10.1 此前三管置于此前三管置于3737保溫保溫3030分鐘分鐘2 2，4-4-二硝基苯肼二硝基苯肼(ml(ml）0.50.50.50.50.50.50.50.5底物液（底物液（mlml）0.50.5充分混合，置于充分混合，置于3737保溫保溫2020分鐘分鐘0.4mol/L NaOH0.4mol/L NaOH（mlml）5 55 55 55 52 23 3酶活性測(cè)定方法酶活性測(cè)定方法2酶活性測(cè)定原理與方

4、法酶活性測(cè)定原理與方法標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)空白管標(biāo)準(zhǔn)空白管測(cè)定管測(cè)定管測(cè)定空白管測(cè)定空白管顏色深淺不一顏色深淺不一酶活性測(cè)定方法酶活性測(cè)定方法2酶活性測(cè)定原理與方法酶活性測(cè)定原理與方法試管號(hào)試管號(hào)標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)空白管空白管測(cè)定管測(cè)定管測(cè)定測(cè)定空白管空白管丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液（丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液（mlml）(1ml=100g)(1ml=100g)0.10.1新鮮血清（新鮮血清（mlml）0.10.10.10.1底物液（底物液（3737）（）（mlml）0.50.50.50.50.50.50.1mol/L0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（磷酸鹽緩沖液（mlml）(pH=7.4)(pH=7.4)0.10.1 此前三

5、管置于此前三管置于3737保溫保溫3030分鐘分鐘2 2，4-4-二硝基苯肼二硝基苯肼(ml(ml）0.50.50.50.50.50.50.50.5底物液（底物液（mlml）0.50.5充分混合，置于充分混合，置于3737保溫保溫2020分鐘分鐘0.4mol/L NaOH0.4mol/L NaOH（mlml）5 55 55 55 5酶活性測(cè)定方法酶活性測(cè)定方法2酶活性測(cè)定原理與方法酶活性測(cè)定原理與方法標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)空白管標(biāo)準(zhǔn)空白管測(cè)定管測(cè)定管測(cè)定空白管測(cè)定空白管如何排除干擾如何排除干擾? ?真正丙酮酸定量真正丙酮酸定量? ?顏色深淺不一顏色深淺不一: :還有其他酮酸的影響還有其他酮酸的影響3

6、比色分析法原理與公式計(jì)算比色分析法原理與公式計(jì)算比色分析法原理比色分析法原理定義定義通過比較有色物質(zhì)溶液顏色的深淺，測(cè)知該通過比較有色物質(zhì)溶液顏色的深淺，測(cè)知該物質(zhì)濃度的方法。物質(zhì)濃度的方法。12原理原理LambertLambertBeerBeer定律定律3比色分析法原理與公式計(jì)算比色分析法原理與公式計(jì)算比色分析法公式推導(dǎo)比色分析法公式推導(dǎo)2A A標(biāo)標(biāo)/A/A測(cè)測(cè)= C= C標(biāo)標(biāo)/C/C測(cè)測(cè)數(shù)學(xué)表達(dá)式數(shù)學(xué)表達(dá)式A = K A = K C C L L溶液吸光度溶液吸光度溶液吸光系數(shù)溶液吸光系數(shù)溶液濃度溶液濃度液層厚度液層厚度1公式推導(dǎo)公式推導(dǎo)本實(shí)驗(yàn)公式計(jì)算本實(shí)驗(yàn)公式計(jì)算3比色分析法原理與公式計(jì)算

7、比色分析法原理與公式計(jì)算A A標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)A A標(biāo)準(zhǔn)空白標(biāo)準(zhǔn)空白0.1ml0.1ml血清所產(chǎn)生的丙酮酸血清所產(chǎn)生的丙酮酸gg數(shù)數(shù)A A測(cè)定測(cè)定A A測(cè)定空白測(cè)定空白C C標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性單位的定義：谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性單位的定義：1ml1ml血清于血清于3737與底物作用與底物作用3030分鐘，產(chǎn)生分鐘，產(chǎn)生2.5g2.5g丙酮酸丙酮酸為為1 1個(gè)個(gè)GPTGPT活性單位?；钚詥挝弧；盍挝换盍挝?ml/ml0.1ml0.1ml血清所產(chǎn)生的丙酮酸血清所產(chǎn)生的丙酮酸gg數(shù)數(shù)10102.52.512上述各管靜置上述各管靜置1010分鐘后，使用分鐘后，使用722722分光光度計(jì)，在分光光度計(jì)，在520n

8、m520nm處，處，以蒸餾水校正零點(diǎn)，測(cè)定各管相應(yīng)吸光度值。以蒸餾水校正零點(diǎn)，測(cè)定各管相應(yīng)吸光度值。標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)空白管標(biāo)準(zhǔn)空白管測(cè)定管測(cè)定管測(cè)定空白管測(cè)定空白管酶活性測(cè)定方法酶活性測(cè)定方法2酶活性測(cè)定原理與方法酶活性測(cè)定原理與方法4722722分光光度計(jì)使用方法及注意事項(xiàng)分光光度計(jì)使用方法及注意事項(xiàng)使用方法接通電源前，檢查儀器部件是否完好，工作電壓是否正常。將比色杯內(nèi)放好空白液（蒸餾水）、標(biāo)準(zhǔn)液、標(biāo)準(zhǔn)空白液、測(cè)定液、測(cè)定空白液，置于比色池中（由下向上的順序放置）。（見圖）1234蓋上暗箱蓋，選擇 儀器自動(dòng)校正空白液“A”=0，并由下向上的順序讀取各管“A”（即A標(biāo)準(zhǔn)、A標(biāo)空、 A測(cè)定、 A

9、測(cè)空）。（見圖）start接通電源打開暗箱蓋，進(jìn)入光度測(cè)量界面。選擇 測(cè)定的波長（520nm）。（見圖）GOTO 4722722分光光度計(jì)使用方法及注意事項(xiàng)分光光度計(jì)使用方法及注意事項(xiàng)使用方法4722722分光光度計(jì)使用方法及注意事項(xiàng)分光光度計(jì)使用方法及注意事項(xiàng)使用方法4722722分光光度計(jì)使用方法及注意事項(xiàng)分光光度計(jì)使用方法及注意事項(xiàng)使用方法注意事項(xiàng)4722722分光光度計(jì)使用方法及注意事項(xiàng)分光光度計(jì)使用方法及注意事項(xiàng)手持比色杯磨砂面，比色杯光面對(duì)準(zhǔn)光路。手持比色杯磨砂面，比色杯光面對(duì)準(zhǔn)光路。比色杯內(nèi)液體體積占總體積比色杯內(nèi)液體體積占總體積2/32/3，比色杯外壁不可有液體，比色杯外壁不可有液體，則需擦鏡紙沾去。則需擦鏡紙沾去。與比色杯由下向上所放位置對(duì)應(yīng)，儀器所報(bào)數(shù)據(jù)順序則由與比色杯由下向上所放位置對(duì)應(yīng)，儀器所報(bào)數(shù)據(jù)順序則由1-51-5。1235思考題思考題123實(shí)驗(yàn)操作中第一次實(shí)驗(yàn)操作中第一次37 保溫保溫30分鐘和第二次分鐘和第二次37 保保溫溫20分鐘，各有什么意義？分鐘，各