非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β的表達(dá)及其與血管生成的關(guān)系

1、非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子的表達(dá)及其與血管生成的關(guān)系 作者：衛(wèi)小紅，杜鳳蘭，王鴻雁 【關(guān)鍵詞】 非小細(xì)胞肺癌 【Abstract】 AIM: To investigate the correlation between the expression of transforming growth factor beta (TGF) and the angiogenesis in nonsmall cell lung cancer (NSCLC). METHODS: MVC and expression of TGF1 in 50 carcinomatous specimens and expres

2、sion of TGF1 in 35 paracarcinomatous specimens from the same 50 cases with NSCLC were detected by SP immunohistochemistry. RESULTS: Active angiogenesis in NSCLC was detected and it was related with NSCLC progression and lymph node metastasis, but not related with histological types. Significant diff

3、erence of the expression of TGF1 was found between stage and (P<0.05), and between stage and (P<0.05), and the positive expression of TGF1 was significantly higher in the patients with lymph node metastasis than those without lymph node metastasis (P<0.01). No significant associ

4、ation was found between the TGF1 expression and the characteristics of the histological types in NSCLC. Positive TGF2 / 111 expression in carcinomatous specimen was stronger than that in paracarcinomatous specimen. TGF1 expression was correlated with tumor angiogenesis. CONCLUSION: TGF highly promot

5、es the progression and lymph node metastasis of NSCLC, mainly by stimulating angiogenesis. 【Keywords】 NSCLC; TGF; angiogenesis; immunohistochemistry 【摘要】 目的：研究血管生成與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF）在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）的表達(dá)及其相互關(guān)系. 方法：通過(guò)應(yīng)用SP免疫組化方法檢測(cè)50例NSCLC組織內(nèi)微血管計(jì)數(shù)（MVC）及50例NSCLC組織和35例癌旁組織中TGF1的表達(dá). 結(jié)果：NSCLC癌組織中存在活躍的血管生成，血管生成與病變分期進(jìn)展

6、和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與組織分型無(wú)關(guān). TGF1陽(yáng)性表達(dá)在NSCLC的I期與II期及I期與III期之間有顯著意義（P<0.05），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與NSCLC組織分型無(wú)關(guān)；NSCLC中TGF1表達(dá)與癌旁組織中比較有顯著意義（P<0.05）；TGF1陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤血管生成有關(guān). 結(jié)論：TGF主要通過(guò)促腫瘤血管生成而促進(jìn)了NSCLC的病期進(jìn)展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移. 【關(guān)鍵詞】 非小細(xì)胞肺癌；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子；血管生成；免疫組織化學(xué) 0引言 腫瘤的血管生成（angiogenesis）與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的全過(guò)程密切相關(guān). 肺癌細(xì)胞通過(guò)合成、分泌血管生成因子調(diào)節(jié)腫瘤組織的血管生成從而

7、影響肺癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移，其中的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforming growth factor, TGF)在原發(fā)性肺癌的表達(dá)、生物學(xué)作用及其與血管生成的關(guān)系為人們所關(guān)注. 為進(jìn)一步了解其在非小細(xì)胞肺癌（nonsmall cell lung cancer, NSCLC）的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中的表達(dá)及與血管生成的關(guān)系，我們采用免疫組化的方法對(duì)TGF1在非小細(xì)胞肺癌及癌旁組織中的表達(dá)及其與腫瘤血管生成的關(guān)系進(jìn)行了觀察. 1材料和方法 1.1材料 199801/200012經(jīng)手術(shù)切除的NSCLC標(biāo)本50(男35，女15)例, 年齡3385（平均58士9）歲. 其中35例含癌旁組織. 鱗癌29例，腺癌21

8、例（包括肺泡細(xì)胞癌3例）. TNM I期18例，II期20例，III期12例. 有肺門(mén)、縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18例. 兔抗人多克隆TGF1抗體，濃度160（武漢博士德生物技術(shù)公司）；鼠抗人VIII因子相關(guān)抗原抗體，濃度1100（北京中山生物技術(shù)有限公司）；鏈霉菌抗生物素蛋白過(guò)氧化酶免疫組化染色超敏試劑盒（福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司）等. 1.2方法 石蠟標(biāo)本切成5 m厚度切片，脫水、透明、中性樹(shù)膠封片. 嚴(yán)格按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行SP免疫組化染色. 取已知含有待檢抗原的切片作為陽(yáng)性對(duì)照，用PBS緩沖液代替第一抗體同上方法染色作為陰性對(duì)照. TGF1表達(dá)以每張切片不少于3個(gè)視野中的細(xì)胞內(nèi)

9、棕黃色顆粒狀染色，且著色明顯高于背景或背景不著色而細(xì)胞著色者為陽(yáng)性表達(dá). 按染色強(qiáng)度（未著色、弱、中、強(qiáng)）及染色陽(yáng)性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)（0%，1%25%，26%50%，>50%），分別積分為0，1，2，3，兩項(xiàng)分?jǐn)?shù)之和為02分者計(jì)為染色（-），36分者計(jì)為染色（）. 以癌旁間質(zhì)細(xì)胞中出現(xiàn)同上染色顆粒為癌旁組織陽(yáng)性表達(dá). 微血管計(jì)數(shù)（microvessel count, MVC）按照Fontanini（J Pathol, 1995;177:57）的方法，用抗FVIIIRA mAB標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞，可見(jiàn)呈棕色或棕黃色染色的血管內(nèi)皮細(xì)胞，先在低倍鏡（4×15）下觀察確定微血管數(shù)量最

10、多的部位，再在高倍鏡（10×15）下，以與周?chē)?xì)胞和結(jié)締組織成分明顯區(qū)別的任何一個(gè)棕色染色的內(nèi)皮細(xì)胞、或細(xì)胞叢為一個(gè)血管，只要結(jié)構(gòu)不相連，其分支結(jié)構(gòu)也計(jì)作一個(gè)血管計(jì)數(shù). 腫瘤內(nèi)硬化區(qū)及與腫瘤交界處軟組織內(nèi)的微血管，有厚的平滑肌及管腔直徑大于8個(gè)紅細(xì)胞的血管除外. 在高倍鏡下分別計(jì)數(shù)3個(gè)視野內(nèi)取其平均值即為該例的平均MVC. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理: 數(shù)據(jù)以x±s表示，采用SPSS 11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，多組間均數(shù)比較采用方差分析，兩兩組間比較采用最小顯著差法；兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)采用非參數(shù)檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用2 檢驗(yàn)；等級(jí)資料采用等級(jí)資料秩和檢驗(yàn). 2結(jié)果 2.1NS

11、CLC組織中的微血管生成NSCLC患者50例的平均MVC為（16.0±4.7）/HP，鱗癌、腺癌的平均MVC值分別為(15.5±4.2)，(17.1±5.7)/HP，二者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）；癌組織與癌旁組織比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示NSCLC癌組織中存在活躍的血管生成（Fig 1），但血管生成與組織分型無(wú)關(guān). II期與III期患者的平均MVC（18.4±3.5)/HP，(21.5±2.5）/HP差別有顯著性（P<0.05），但I(xiàn)I期和III期患者的MVC高于I期患者（10.9±4.1

12、），其差別有顯著性（P<0.01），提示臨床分期越晚，平均MVC越大，血管增生越活躍. 32例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的平均MVC（19.7±5.0）/HP高于18例無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（11.4±5.3），其差別具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），可見(jiàn)NSCLC中的血管生成與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(Tab 1). 2.2TGF1在NSCLC組織中的分布在50例NSCLC中30例可檢測(cè)到TGF1表達(dá)（Fig 2），陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物主要分布于癌細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)（Fig 2A，B）；癌旁組織中檢測(cè)到的TGF1蛋白表達(dá)主要分布于間質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)和極少數(shù)吞噬細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)（Fig 2C

13、，D）. 癌組織TGF1陽(yáng)性率高于癌旁組織（P<0.05），但不同組織分型之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異. 在III期NSCLC患者中TGF1的陽(yáng)性表達(dá)高于期患者，有顯著性差異（P<0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者TGF1表達(dá)率高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（Fig 2）. TGF1表達(dá)陽(yáng)性30例患者的平均MVC為(15.7±5.6)/HP，20例TGF1表達(dá)陰性患者的平均MVC為(12.1±3.0)/HP，二者間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）.表1MVC與NSCLC組織分型、分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系 3討論 腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移伴隨著新生血管的形成1. 腫瘤組織內(nèi)

14、MVC反映了新生血管生成的強(qiáng)度. 本結(jié)果表明NSCLC中存在活躍的血管生成，與癌旁組織比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），但鱗癌和腺癌之間MVC無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，II期和III期患者M(jìn)VC均明顯高于期患者（P<0.05），提示隨病期的進(jìn)展，血管生成增加. 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者的MVC高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，則提示新血管的生成. 因此MVC是關(guān)系NSCLC進(jìn)展、影響預(yù)后的重要指標(biāo)，也是預(yù)測(cè)NSCLC轉(zhuǎn)移及預(yù)后的一項(xiàng)獨(dú)立指標(biāo). TGF是一種多功能的細(xì)胞因子，可由人NSCLC分泌，以TGF1含量最高且具有代表性，與分布在細(xì)胞上的TGF受體結(jié)合發(fā)揮其促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)化和分化、抑制免疫以及刺激

15、細(xì)胞外基質(zhì)增殖的生物學(xué)作用2, 3. TGF參與了肺癌病期的進(jìn)展，其表達(dá)隨著病變的進(jìn)展而增加，可以作為反映NSCLC患者病期進(jìn)展的指標(biāo). 本結(jié)果還顯示，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中TGF1表達(dá)明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例（P<0.01），提示增加的TGF可能提高了非小細(xì)胞肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn). NSCLC細(xì)胞由于其異常的生物代謝，可通過(guò)合成、分泌血管生成因子和血管生成抑制因子調(diào)節(jié)腫瘤組織的血管生成4. 體外實(shí)驗(yàn)表明TGF通過(guò)對(duì)VEGF的旁分泌調(diào)節(jié)作用促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的長(zhǎng)入和毛細(xì)血管腔的形成，因此促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)而發(fā)揮了促腫瘤血管生成作用5. 【參考文獻(xiàn)】 1 Cox G, Jones

16、JL, Walker RA, et al. Angiogenesis and nonsmall cell lung cancer J. Lung Cancer, 2000; 27(2): 81-100. 2 Kang Y, Prentice MA, Mariano JM, et al. Transforming growth factorbeta 1 and its receptors in human lung cancer and mouse lung carcinogenesis J. Exp Lung Res, 2000; 26(8): 685-707. 3 Wieser R. The transforming growth factorbeta signaling pathway in tumorigenesis J. Curr Opin Oncol, 2001; 13(1): 70-77. 4 Kumar R, Kuniyasu H, Bucana CD, et al. Spatial and temporal expression of angiogenesis molecules during tumor growth and progressio