安捷倫固相萃取技術及應用

1、12008.10.07 GB/T 22388-2008jD; Agihfit lectioologiesHPLCZorbax SB-C8Zorbax 300SCXLC-MS/MSZorbax 300SCXZorbax Rx-Sil樣品前處理SampliQ SCX安捷倫第一時間推出三聚氧胺的整體解決方案GC-MS DB-5ms/HP-5ms DB-5ms urtra inert：0 Agil«n( lechnlogiei3SPE procedure for melamine extraction#抽至近干：0 Agihnt lechBotegiesHPLC分析圖譜三聚氟胺空白樣品樣品加

2、標2ppmS/N >50冋收率> 85%RSD v 3%國家標準要求 冋收率>80%RSD<10%MMM：0 Agilent lechmlogiei2006-10.31A5071109I 12 -mrm (asroaew 諂o)g4 53?5-351蕪eao2巧252 25-1270er 用 80* wto Ho ito iJiHalt U g, m|26 28 J 12 J4 16 38 4 “quSxi T im (x|26 2 8 ) 312 J4 16 38 i 心皿 br J m (illc-qqq分析圖譜空白奶粉中加入5ppb三聚鼠胺，通過SPE凈化 6.0

3、.4打026155«5刁57為什么要進行樣品前處理?樣品收集樣品分析#原形樣品不適合直接進行進一步分析!為什么？濃度太低-被測物濃度低J淀城限樣品太“臟” 基質組分的存任彤響樣品測定 太“危險"污染物可能成為“色惜柱殺手”X0A-10-31戲：Agilent lechmlogies現實的世界&真實的樣品#02460246Time (min)Time (min)P«9tl0：0 Agileot lechmlagieixoe-10.319一個典型色譜分析中的誤差來源和時間消耗對比Contamination (4%)Introduction (6%)oguphy

4、 (7%)Columns (11%Integration (6%)Instrument (8%)Operator (19%)Calibration (9%)Sample Processing (30%)Data Management (27%)Collecbon (G%)Analysis (6%)Sample Processing (61%)誤差來源時間消耗(R E. Majors, LC/GC2002)：0 Agilent lectiBobgiei2006.10-31樣品前處理過程中的常用技術簡單的方法稀釋進樣 過濾菇質沉淀/趙池樣品凈化濃編效果差逆流色諧分獷印述聚介物(MIPS)免疫親和更

5、強的選擇性樣品凈化濃縮效果Jft佳：0 Agil«fit lechBotegi»sX06-10-3111更加復雜；需要方法開發(fā)與液液萃取相比，SPE的優(yōu)勢減少有機溶劑用量和有機廢棄物 的產生B.提高回收率，改善重現性多種不同選擇性樣品處理量增加，可自動化處理：0 Agilflfit lechoologies2006-101固相萃取(SPE)Solid Phase Extraction：0 Agil«fit lechBotegi»sX06-10-31#相萃取技術屬于色譜技術的一種-化合物要么保留要么流過吸附劑種類選擇眾多，選擇性與HPLC類似，但與 HPL

6、C不能等同很多樣品可以平行處理.40孔以上的萃取裝置可供選 擇方法操作簡單SPE方法可以提供高選擇性，回收率以及更好的凈化 效果此外SPE更被廣泛的應用于：脫鹽Desalting （反相原理reversed-phase principles） 溶劑置換Solvent Exchange （與色畬方法朵容）樣品儲存（樣品穩(wěn)定化）Agilent lechoologies2006.10*31SPE模式一色譜技術被測物吸附模式（吸附洗脫）基質吸附模式（干擾物移除）|破測物4最瑞耳勰1丄棱測物0 口洛質/干擾R*q«16：0 Agilent lechoologiei2006-10-3113固相萃

7、取的基本操作步驟三聚氤胺 with SampliQ SCX'0; Agilvnt lechootogies2006-10-M#活化3mL甲醉，5ml水淋洗洗脫活化 上樣上樣10mL樣品，大于10分鐘淋洗3mL水，3ml甲諄<洗脫6mL氨化甲醉溶液(5%)抽至近干'0; Agilvnt lechootogies2006-10-M#'0; Agilvnt lechootogies2006-10-M#氮氣吹干用流動相定容到ImL,過濾X06-10-31玄” Agilffnt lechaologies樣品前處理方法建立前的清單/了解被測物的物理化學性質以及可能的化學形態(tài)“

8、 了解被測物的濃度范用以及所需的檢測低限“樣品皋質的物理和化學形式/能得到的儀器和設備/能得到樣品量/樣品前處理過程潛在的交義污染2006.10-31*C7 Agildfit lechBologies吸附劑選擇非硅膠"Cdbon, Florisil PR, Alumina廠 正相 Diol, amino, cyano, bare silica硅膠反相 C4& C18 endcapped, C8, C2, phenyl, mixed mode (C8/SCX)聚合物-OPT, SCX, SAX, DVB'0; Agilvnt lechootogies2006-10-M#

9、安捷倫全新固相萃取(SPE)產品.SampliQ!新!聚合物基質填料與施膠填料相比保冊較強.冋收率校陸.而且 仃很好的取現性。町以耐受較寬范用的洛劑.硅膠基質填料-哋供反郴匸柑內丁交換的垃料。二毬健介機理.保證更加穩(wěn)定的鍵介郴。其它填料-Florisil PR,三氧化二鋁和石羅化炭 黑.散裝SPE填料和QuEChERS填料-E種對達 的分敬劑填料用小”自行填魁 憲整的QuEChERS方法所石的填札Ki,xoe. 10*31：0 Agilent lechaologieiI ml 100mg. KXX'p* Jml 200mg. 50<pk iml 500rng SOqpk ；ml

10、SOOmg. 30<pk ；ml lOOOmg. 3(X*pk >G PUte 50mg 2Sp BottHI ml )ml Jml SOOmg. sorpk ；ml SOOmg. 30fpk lOOOmg. Wp« >C Well Ptit® 50mg 3U1K 25g BottleAdditional SorbentsAlimina Alumim Alumina Acid Basic MutraiSiFlortsllCarbonwei-4411wt2-44>r曲必43鉉M2-U32QuEChERS Bulk25 gran bottle 100 g

11、um bottli“<«SuiUtoPSA Carbon C18理2.皿漢匸-：.'M2-M2I ml 30mg. lOOfpk 価I COmg. 50fpk ；ml150mg. 30<*pk ；ml $00 mg. 30i*pft ；ml 1000 mg. Spk 用 Wen Ptite lOmqofAccuocna ptooucu0： Agileat lechaologiesSampliQ產品填料類型AccuBond11 vs. SampliQ C18 回收率對比Internal Standard Added During LoadaAccuBONDl sSa

12、mplIQ C18120-CaftenePrednsoneBromaciWarflnSuftadlmethoxe Teoutruunon17#2006.10.31：0 Agihnt lechoologiM行業(yè)SPE應用SampliQ填料選擇法醫(yī)坐柯體液中的酸性馬物 生物體液中的堿件妁將SAX. OPT Evidex. OPT. SCX醫(yī)藥血酒浪中的樓性代謝物 緘件妁物 生物體液中的巴比妥類HttJ 生物體液中的物“的B受體RliVM牛物體液中的苯F類筠狗 牛物體液中的兒茶圈陡 洽液中的氨單酸 化妝M中的防財 生鈞體液中的縉體馬拐 務體液中的利采列C8/SCX Mixed Mod« O

13、PT C18. OPT. SCXC18. OPT. SCXC18. OPTC18. CN. OPTC18. OPTSAX. SCXSCXC18. SCXC18C18環(huán)境水中仙多壞悄y 石油中的多耳芳婭 水中的多環(huán)芳燒和多眥聯厚 水中的衣的歿陽水中的蘇碗 水中的C18. ENV PS-DVB Ftonsil PRC18C18C18C18. Phenyl. Amino食品安全水果菜中的農 肉制M中的育將竝術 水產M中的畚潮瓜冊奈 仔品中的真商簾親Florisd. Silica. Alumnia C18. OPTC18. OPTSilica. C18. PhenylX06-10.31：0 Ayile

14、nt lechoologies#聚合物SampliQ OPTSampliQ pSCXSampliQ pSAXTN0： Agilent lechaologiesX06.10-31SampliQ PS-DVBAgilent lechoologmX06-10-3119Agilent lechoologmX06-10-31#參數：粒徑25-35um孔徑74-80A using BET measure聚合物質量控制: 成品柱子測試林純度測試（GC）空符純度測試（GC）物測試柱子流阻、心川）渾濁度（NTU）特色:高保優(yōu)秀的回收率和極佳的賣現性°縈規(guī)課耀爐子突發(fā)性干掉不會造成回收無流失固定相.雜質

15、少與大多數有機溶劑兼容.pH使用范圍0/4球形，粒徑范圍窄孔徑1000A using inverse size exclusion 表面積47X505 m2/g額粒質*控制遙悠（人小）光學顯微儻（形狀）質譜（雜廣）Agilent lechoologmX06-10-31#SampliQ OPT-不怕干!# 4加料干或濕的惜況下祁冇較好的帀現件及冋收率禽仃極性.堿性及銃水和中性兒種化合物。2006.10.31Agilffcvt lechoologief聚合物SPE選擇pKa 1-7pKa 4-10pKa 6-14Acidic CompoundsAcid/Base/NeutralBasic Comp

16、oundsSampliQ-SAXSampliQ-OPTSampliQ-SCX所有安捷倫聚合物祁是混合模式所以可以盡可能多的保留不同種類的目標化合物 在方法開發(fā)前.可以簽照這個圖來選擇接近的萃取方式Rapa 28Agilent lechoologiei#SampliQ-OPT推薦操作流程SampliQ-SCX推薦操作流程抽至近r-：0 Agilvnt lechoologmX06-10-3121蛙"Agilant lechoologi"2X6-10-3123蛙"Agilant lechoologi"2X6-10-31#流速-速度殺手適用所有的吸附劑it速是非

17、常關鍵的指標.流速太快. 化合物和吸附劑之間沒有足夠的時間 作用。漁速差異會造成比較差的重復 性結果蛙"Agilant lechoologi"2X6-10-31#方法開發(fā)第一步標準品Agilent lechoologieixce-io-31#Agilent lechoologieixce-io-31#使用標準溶液篩選合適的固相萃取柱 采用常規(guī)方法收集各個步驟的流出物：通過檢測上樣和淋洗過程是否有目標物流出來 確定化合物是否被保留.如果化合物在上樣和淋洗過程就流出.嘗試著改變活化或者淋洗溶液的卩円值如果 效果不明顯，需要嘗試其他的吸附劑.嘗試不同的種類洗脫劑 嘗試不同的洗脫劑

18、濃度X06-10-31X06-10-31增加溶液pH使之高于化合物的pK釦是化合物呈分子狀態(tài).回收率顯著 提商.><增加溶液pH使之高于化合物的pK釧是化合物呈分子狀態(tài).回收率顯著克 Agelerat lechBolegiei：0二 AgtlenC lechoobgies方法開發(fā)一一第二步一一空白基質加標樣品采用第一步得到的方法，將標準品加入樣品基質進行固相萃取。確認基 質不會影響保留和回收率.如果回收率降低，檢査每一個步驟，以確定 樣品損失在哪一個環(huán)節(jié).如果樣品凈化不夠完全，可以嘗試増加淋洗液中有機相的比例或者減少 洗脫液中有機相的比例。備注：目標是得到足夠的回收率和可以接受的凈

19、化水平方法的耐用和重 復性是更為重要的。X06.10-31SPE實例牛奶中四環(huán)素殘留檢測方法優(yōu)化=non-polarAgilent lechaologirsAgilent lechoologieixce-io-3125=polar| I = ionizablepKa = 3.3/7.7/9.7Log P =-1.3Agilent lechoologieixce-io-31#SPE選擇SampliQ OPTpKa 1-7pKa 4-10pKa 6-14Acidic CompoundsAcid/Base/NeutralBasic CompoundsSampliQ-SAX<mpliQ-OPr&

20、gt;SampliQ-SCX#2006.10.31：0： Agilent lechaologies#總體牛奶的凈化效果良好DAD1 A. Sig=350.4 Ref= off (7-287-28： 2008 07-28 1446-37STD.D)CTC MCnrrn4JStd| MN0 OTC ¥9 TCS 3(0 w«oM0二k A .Lft DMCTC1 z ' 1 ' $ 810112114DAD1 A. Sig=350.4 R&f= off(7-28V-28 2008 07-28 154Q-522-2ELUTE.C)nALIrOTC $h.t

21、-io5sample i7riCDh.COODo CD0- All A A.t.Aa一 Q£'I'J81012i14DAD1 A. Sig=350.4 Ref= off (7-28V-28 2008-07-28 16-19-04M-2ELUATE.D)m4J5i blank:L0一.h -A、/v6 1 i810i12i1427回收率比-SampliQ OPT VS其他非極性聚合物小柱化合物牛奶購肉牛奶(效據來自獨立出版物)米諾環(huán)*(MNO)73.187.6土素(OTC)8&06&867.7四環(huán)素(TC)83.381.068.5去甲金MXDMCTC)9

22、3.694.8金 ««(CTC)90.293.367.3甲烯土 WUMC)81.693.3強力得素(DC)92.096.40： Ayilvrvt lechaologies29淋洗4：3ml甲醇洗脫：5ml氮化甲醉(3%)2006.10-31肚用實例蘋果汁中抗真菌劑SampliQ SCX:Agilent lechaologies蘋果汁中的抗真菌劑液相色譜圖：0 Agiknt lechoologiesxce-io-3i31：0 Agiknt lechoologiesxce-io-3i#cflBlankSpiked 0.1ug/g多菌靈IA囉菌靈：0 Agiknt lechool

23、ogiesxce-io-3i#回收率和重復性CompundSpiked level (ug/kg)Recovery (%)RSD (%)多帝靈2598.63.995099.43.2410095.93.27瞰帝靈2599.02.385092.14.9010093.03.79xoe-10.31口* Agehfit lechootogiet應用舉例牛奶中10種磺胺類藥物準備萃取樣品前處理無淋洗*12mL 0.5M HCI小柱SampliQ SCX2mL 5%甲醇水溶液加標0.5 ug/mL楸32mL 20%甲醇水溶液活化2mL2%甲酸甲醉洛液淋洗42x 2mL甲靜平衡2mL 2%甲酸水溶液抽干真空下

24、3 min.上樣5mL全脂奶洗JK2.5mL 5%気水甲靜洛液抽干真空下30秒星終吹干，流動相復溶牛奶中的磺胺藥物 :加標Q” Agilent lechaologieixoe.10-3135Q” Agilent lechaologieixoe.10-31#對照人i、丄Q” Agilent lechaologieixoe.10-31#Q” Agilent lechaologieixoe.10-31#LC/MS/MS 譜圖Q” Agilent lechaologieixoe.10-31#Q” Agilent lechaologieixoe.10-31#Q” Agilent lechaologiei

25、xoe.10-31#Q” Agilent lechaologieixoe.10-31#Gradient t%B0103.510760All 10 sulfa drugs at *0.03mg/mL in solutionA: 0.1% formic acid/H20 (pH = 2.74)B: 0.1% formic acid/ACNQ” Agilent lechaologieixoe.10-31#多種類，多殘留樣品分析前處理方法提取凈化定量確認I QuEChERSJ方法I GC-MSJ LC-MS/MSQuick快速Easy容易Cheap廉價 Effective 有效 Rugged耐用Saf

26、e安全Six aoapteo from Kate P&stovs灼 qsda-ars:口: Agilfffit lechaologiesxoe-10.3137草莓樣品預處理initial millingwithout dry iceFrozen sampleAdd dry ice, jeontinue millin39#Stir while millingGradually increase milling speed：0 Agilent lechoolegies#QuEChERS樣品制備過程：0 Agilent lectioolegies2XB-10-31#QuEChERS樣品制備過程41#QuEChERS method回收率229 種農藥 GC-MS and LC-MS-MS分析#% oo