麥斯衣陶芬無花果離體快速增殖研究

1、    麥斯衣陶芬無花果離體快速增殖研究    李金鳳+糜林+陳雪平+萬春雁+霍恒志+陳丙義摘要：以麥斯衣陶芬無花果幼嫩枝條為試材，研究了外植體材料、基本培養(yǎng)基以及激素種類和配比等因素對其離體快速增殖的影響。結(jié)果表明，適宜麥斯衣陶芬無花果離體快速增殖的外植體為腋芽，培養(yǎng)基為改良ms+1mg/l6-ba+0.05mg/lnaa+1mg/lga3+20mg/l蔗糖+7mg/l瓊脂粉，ph值為5.8。關(guān)鍵詞：麥斯衣陶芬無花果；離體繁殖；增殖倍數(shù)：s663.304+.3文獻(xiàn)標(biāo)志碼：a：1002-1302（2014）11-0073-02麥斯衣陶芬無花果，因其果大俗

2、稱巨型無花果，原產(chǎn)美國加州，從日本引入我國。試種觀察結(jié)果表明，麥斯衣陶芬是目前最有推廣前途的無花果優(yōu)良品種之一，適宜長江以南地區(qū)栽培。無花果生產(chǎn)上多采用扦插繁殖1，也有外來無花果嫁接培育方法，但與材料來源多、增殖率高的試管離體快速培養(yǎng)苗木繁殖相比，具有材料來源少、繁殖率低、費(fèi)工費(fèi)時(shí)、受季節(jié)限制嚴(yán)重、場地面積占用大等問題，難以滿足當(dāng)前大面積栽培及推廣的需要；此外，從育種角度來講，無花果為隱頭花序，小花隱生于囊狀總花托內(nèi)，不能利用常規(guī)雜交育種技術(shù)進(jìn)行品種改良和更新。隨著生物技術(shù)在果樹育種中的成熟應(yīng)用，轉(zhuǎn)基因技術(shù)無疑是改良品種的首選方法。而轉(zhuǎn)基因技術(shù)又是以組織培養(yǎng)為前提、為基礎(chǔ)的一門技術(shù)，因此，要想

3、利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)進(jìn)行無花果育種就必須先建立無花果離體培養(yǎng)的快速增殖體系。盡管宋儀農(nóng)等近幾年來對不同品種無花果的組織培養(yǎng)離體快繁技術(shù)作了相應(yīng)的報(bào)道2-5，但沒有麥斯衣陶芬無花果的離體快速增殖方法的相關(guān)報(bào)道?；蛐屯鶝Q定著離體培養(yǎng)的成敗，不同基因型對不同激素的種類及濃度搭配要求不同6-7。本研究以麥斯衣陶芬無花果為試驗(yàn)材料，試圖建立其離體快速增殖的方法，以供參考。1材料與方法1.1材料麥斯衣陶芬（masuidauphine）無花果生長旺盛的幼嫩枝條。1.2方法1.2.1外植體沖洗剪取處于旺盛生長的幼嫩枝條，將其剪成帶單芽的莖段，芽上方剪留0.5cm長，芽下莖段剪留11.5cm長，頂芽單獨(dú)截取。用洗

4、衣粉反復(fù)清洗數(shù)遍，流水沖洗2h，裝入保鮮袋中備用。1.2.2防褐化處理將裝有單芽的保鮮袋放入4的冰箱，預(yù)冷4h后取出，擦干表面水分，置于1500mg/l的維生素c溶液中浸泡30min，備用。1.2.3表面消毒將進(jìn)行過防褐化處理的單芽，先用75%乙醇浸泡30s，無菌清水沖洗2遍，無菌紙擦干表面水分，再轉(zhuǎn)入0.1%hgcl2溶液中消毒8min，不間斷地晃動瓶子，使外植體與溶液充分接觸，促使消毒更徹底。然后，用無菌清水反復(fù)沖洗外植體數(shù)遍，直至將hgcl2完全沖洗干凈，倒掉多余清水，用無菌紙吸干外植體表面水分。1.2.4扦插分別將每個(gè)外植體的剪口處再剪掉0.2cm長，按照芽的極性，將下端扦插入誘導(dǎo)培養(yǎng)

5、基（基本培養(yǎng)基）中，培養(yǎng)2030d，待小苗長至0.40.5cm時(shí)切下，轉(zhuǎn)到增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)。1.2.5篩選外植體以腋芽和頂芽為試材，扦插在基本培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，每瓶培養(yǎng)基中接種3個(gè)外植體，每處理10瓶，設(shè)3次重復(fù)，培養(yǎng)1520d后調(diào)查統(tǒng)計(jì)。1.2.6基本培養(yǎng)基選用ms、3/4ms、1/2ms和改良ms（以ms培養(yǎng)基母液的配方為基礎(chǔ)，用四水硝酸鈣替換大量元素中的無水氯化鈣，經(jīng)換算，其用量為無水氯化鈣的2.12倍）4種基本培養(yǎng)基，分別在其中添加1mg/l6-ba和0.05mg/lnaa對幼苗進(jìn)行培養(yǎng)，每瓶培養(yǎng)基中接種1株幼苗，每處理10瓶，設(shè)3次重復(fù)，培養(yǎng)30d后調(diào)查統(tǒng)計(jì)。1.2.7篩選激

6、素種類及濃度配比細(xì)胞分裂素選用0.5、1、2mg/l6-ba，生長素選用0.05、0.1mg/lnaa，0.4mg/liba和0.2、0.4、0.5、1、2mg/lga3分別進(jìn)行組配，每瓶培養(yǎng)基中接種1個(gè)外植體，每處理10瓶，設(shè)3次重復(fù)，培養(yǎng)30d后調(diào)查統(tǒng)計(jì)。1.2.8生根及移栽選用1/2改良ms+0.5mg/liba+20mg/l蔗糖+7mg/l瓊脂粉、ph值5.8的培養(yǎng)基進(jìn)行生根，并移栽。2結(jié)果與分析2.1外植體對成苗的影響腋芽和頂芽均能培養(yǎng)成健壯苗，且2種外植體的成苗率基本相同（表1）。頂芽經(jīng)過防褐化和消毒處理后極易白化，白化率高達(dá)17%，腋芽白化率僅為6%，且腋芽取材容易，來源廣，綜合

7、考慮，用腋芽作試材更經(jīng)濟(jì)方便。2.2基本培養(yǎng)基對無花果增殖倍數(shù)的影響由表2可以看出，幼苗在改良ms基本培養(yǎng)基中植株長勢健壯，葉色綠，株高達(dá)7.1cm，增殖倍數(shù)最高，達(dá)26.7倍，愈傷組織分化的量也較多，白嫩且晶瑩剔透，說明改良ms基本培養(yǎng)基更適于麥斯衣陶芬無花果離體快速培養(yǎng)。2.3激素種類及濃度配比對無花果離體快速增殖的影響由表3可知，在同時(shí)添加1mg/l6-ba、0.05mg/lnaa和1mg/lga3的改良ms培養(yǎng)基上，試管苗植株長勢最為健壯，葉色綠，葉片大，幼嫩而肥厚，增殖倍數(shù)最高，高達(dá)28.4倍，植株株高最高，達(dá)6.8cm，節(jié)間最長，最大節(jié)間長度1.1cm。6-ba濃度達(dá)到2mg/l時(shí)

8、，植株嚴(yán)重玻璃化。2.4生根及移栽選用1/2改良ms+0.5mg/liba+20mg/l蔗糖+7mg/l瓊脂粉、ph值5.8的培養(yǎng)基，生根率達(dá)到100%，移栽成活率達(dá)98%。3結(jié)論與討論在無花果離體培養(yǎng)過程中，由于其嫩莖及莖尖組織髓部較大，組織結(jié)構(gòu)疏松，使其內(nèi)部具有大量的內(nèi)生菌8，增加了無菌苗的獲得難度。本試驗(yàn)中，選取旺盛生長期的莖尖（頂芽）和腋芽做試材，以減少內(nèi)生菌感染。同時(shí)，利用乙醇和hgcl2結(jié)合滅菌，并適當(dāng)延長滅菌時(shí)間至8min，達(dá)到了較好的滅菌效果。 褐變也是無花果離體培養(yǎng)過程中普遍存在的問題。在研究過程中發(fā)現(xiàn)，較重程度的褐變會嚴(yán)重影響外植體的生長，甚至造成死亡。本試驗(yàn)采用孫麗娟等的

9、方法9，在培養(yǎng)前用1500mg/l維生素c溶液浸泡，大大降低了褐變程度，保證了培養(yǎng)過程中試管苗的正常生長。無花果屬于無性繁殖能力很強(qiáng)的樹種，離體增殖和誘導(dǎo)生根相對比較容易。本研究發(fā)現(xiàn)，在較低的外源激素濃度下即可達(dá)到理想的效果，過高反而不利于生長。本試驗(yàn)結(jié)果表明，適宜麥斯衣陶芬無花果離體快速增殖的培養(yǎng)基為改良ms+6-ba1mg/l+0.05mg/lnaa+1mg/lga3+20mg/l蔗糖+7mg/l瓊脂粉，ph值為5.8。這與段新玲等報(bào)道的培養(yǎng)基3，10-11不同，表明不同基因型材料所要求的培養(yǎng)基種類不同。參考文獻(xiàn)：1李艷玲.無花果春季硬枝扦插技術(shù)j.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2007（2）：22.2宋

10、儀農(nóng)，吳欽林，杜啟蘭，等.無花果的莖段離體快速繁殖技術(shù)j.林業(yè)科技，2002，27（6）：50-51.3段新玲，任東歲，趙書珍.無花果組織培養(yǎng)再生系統(tǒng)的研究j.林業(yè)科學(xué)研究，2001，14（6）：621-627.4李康，陳聚恒，宋鋒惠，等.無花果組織培養(yǎng)及快速繁殖技術(shù)研究j.園藝學(xué)報(bào)，1997，24（1）：90-91.5朱建華，關(guān)麗霞.無花果的組織培養(yǎng)研究j.北方果樹，2002（3）：9-10.6姜靈敏，徐有明，張冬梅，等.紅刺玫愈傷組織誘導(dǎo)再生體系的建立j.江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2012，28（4）：914-916.7周杰，曹清河，周志林，等.菜用型甘薯不同品種組織培養(yǎng)差異研究j.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，20

11、12，40（1）：60，62.8張弘弛，馬養(yǎng)民，劉瑞，等.無花果內(nèi)生真菌的研究.抗植物病原真菌活性的篩選j.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2007，16（2）：232-236.9孫麗娟，關(guān)洪斌，趙晶，等.無花果組織培養(yǎng)中防止外植體褐化的研究j.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（2）：535-536.10胡建剛，郭繼善.無花果的組織培養(yǎng)j.南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1994，18（3）：73-76.11王亮，王彩虹，田義軻，等.無花果品種“中國紫果”離體培養(yǎng)與保存研究j.河北林果研究，2009，24（1）：81-83. 褐變也是無花果離體培養(yǎng)過程中普遍存在的問題。在研究過程中發(fā)現(xiàn)，較重程度的褐變會嚴(yán)重影響外植體的生長，甚至

12、造成死亡。本試驗(yàn)采用孫麗娟等的方法9，在培養(yǎng)前用1500mg/l維生素c溶液浸泡，大大降低了褐變程度，保證了培養(yǎng)過程中試管苗的正常生長。無花果屬于無性繁殖能力很強(qiáng)的樹種，離體增殖和誘導(dǎo)生根相對比較容易。本研究發(fā)現(xiàn)，在較低的外源激素濃度下即可達(dá)到理想的效果，過高反而不利于生長。本試驗(yàn)結(jié)果表明，適宜麥斯衣陶芬無花果離體快速增殖的培養(yǎng)基為改良ms+6-ba1mg/l+0.05mg/lnaa+1mg/lga3+20mg/l蔗糖+7mg/l瓊脂粉，ph值為5.8。這與段新玲等報(bào)道的培養(yǎng)基3，10-11不同，表明不同基因型材料所要求的培養(yǎng)基種類不同。參考文獻(xiàn)：1李艷玲.無花果春季硬枝扦插技術(shù)j.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科

13、技，2007（2）：22.2宋儀農(nóng)，吳欽林，杜啟蘭，等.無花果的莖段離體快速繁殖技術(shù)j.林業(yè)科技，2002，27（6）：50-51.3段新玲，任東歲，趙書珍.無花果組織培養(yǎng)再生系統(tǒng)的研究j.林業(yè)科學(xué)研究，2001，14（6）：621-627.4李康，陳聚恒，宋鋒惠，等.無花果組織培養(yǎng)及快速繁殖技術(shù)研究j.園藝學(xué)報(bào)，1997，24（1）：90-91.5朱建華，關(guān)麗霞.無花果的組織培養(yǎng)研究j.北方果樹，2002（3）：9-10.6姜靈敏，徐有明，張冬梅，等.紅刺玫愈傷組織誘導(dǎo)再生體系的建立j.江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2012，28（4）：914-916.7周杰，曹清河，周志林，等.菜用型甘薯不同品種組織培養(yǎng)

14、差異研究j.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（1）：60，62.8張弘弛，馬養(yǎng)民，劉瑞，等.無花果內(nèi)生真菌的研究.抗植物病原真菌活性的篩選j.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2007，16（2）：232-236.9孫麗娟，關(guān)洪斌，趙晶，等.無花果組織培養(yǎng)中防止外植體褐化的研究j.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（2）：535-536.10胡建剛，郭繼善.無花果的組織培養(yǎng)j.南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1994，18（3）：73-76.11王亮，王彩虹，田義軻，等.無花果品種“中國紫果”離體培養(yǎng)與保存研究j.河北林果研究，2009，24（1）：81-83. 褐變也是無花果離體培養(yǎng)過程中普遍存在的問題。在研究過程中發(fā)現(xiàn)，較重程度的褐

15、變會嚴(yán)重影響外植體的生長，甚至造成死亡。本試驗(yàn)采用孫麗娟等的方法9，在培養(yǎng)前用1500mg/l維生素c溶液浸泡，大大降低了褐變程度，保證了培養(yǎng)過程中試管苗的正常生長。無花果屬于無性繁殖能力很強(qiáng)的樹種，離體增殖和誘導(dǎo)生根相對比較容易。本研究發(fā)現(xiàn)，在較低的外源激素濃度下即可達(dá)到理想的效果，過高反而不利于生長。本試驗(yàn)結(jié)果表明，適宜麥斯衣陶芬無花果離體快速增殖的培養(yǎng)基為改良ms+6-ba1mg/l+0.05mg/lnaa+1mg/lga3+20mg/l蔗糖+7mg/l瓊脂粉，ph值為5.8。這與段新玲等報(bào)道的培養(yǎng)基3，10-11不同，表明不同基因型材料所要求的培養(yǎng)基種類不同。參考文獻(xiàn)：1李艷玲.無花果

16、春季硬枝扦插技術(shù)j.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2007（2）：22.2宋儀農(nóng)，吳欽林，杜啟蘭，等.無花果的莖段離體快速繁殖技術(shù)j.林業(yè)科技，2002，27（6）：50-51.3段新玲，任東歲，趙書珍.無花果組織培養(yǎng)再生系統(tǒng)的研究j.林業(yè)科學(xué)研究，2001，14（6）：621-627.4李康，陳聚恒，宋鋒惠，等.無花果組織培養(yǎng)及快速繁殖技術(shù)研究j.園藝學(xué)報(bào)，1997，24（1）：90-91.5朱建華，關(guān)麗霞.無花果的組織培養(yǎng)研究j.北方果樹，2002（3）：9-10.6姜靈敏，徐有明，張冬梅，等.紅刺玫愈傷組織誘導(dǎo)再生體系的建立j.江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2012，28（4）：914-916.7周杰，曹清河，周志林，等.菜用型甘薯不同品種組織培養(yǎng)差異研究j.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（1）：60，62.8張弘弛，馬養(yǎng)民，劉瑞，等.無花果內(nèi)生真菌的研究.抗植物病原真菌活性的篩選j.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2007，16（2）：232-236.9孫麗娟，關(guān)洪斌，趙晶，等.無花果組織培養(yǎng)中防止外植體褐化的研究j.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（2）：535