臨床藥師微生物室見(jiàn)習(xí)小結(jié)

1、臨床藥師微生物室見(jiàn)習(xí)小結(jié) 臨床藥師微生物室見(jiàn)習(xí)小結(jié) 臨床藥師微生物室見(jiàn)習(xí)小結(jié) 微生物室是我此次臨床藥師進(jìn)修的第一站，也是非常重要的第一步，經(jīng)過(guò)這一個(gè)月的學(xué)習(xí)，我關(guān)于一張張藥物敏感性報(bào)告后的各個(gè)步驟有了更直觀的熟悉，學(xué)習(xí)從臨床檢驗(yàn)的角度看待抗生素的合理使用， 在這一個(gè)月的學(xué)習(xí)中，我了解了微生物室常用的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)方法，熟悉抗菌藥物敏感試驗(yàn)方法和特別耐藥機(jī)制的篩選方法，并跟隨帶教老師參加了簡(jiǎn)單的臨床檢驗(yàn)操作及藥敏報(bào)告的解讀。同時(shí)，熟悉了微生物的基本分類(lèi)，本地區(qū)常見(jiàn)的病原菌及耐藥狀況，以及臨床常見(jiàn)感染性疾病的常見(jiàn)病原菌及耐藥狀況。在老師的耐心教導(dǎo)下，我關(guān)于mrsa、vre、prsp、產(chǎn)esbls菌等幾

2、種特別病原菌的耐藥狀況及藥物選擇有了更加全面系統(tǒng)的學(xué)習(xí)。這一個(gè)月的學(xué)習(xí)讓我受益匪淺。 擴(kuò)大閱讀：微生物實(shí)習(xí)總結(jié) 華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 201*微生物學(xué)教學(xué)實(shí)習(xí)總結(jié) 專業(yè)：課程名稱：實(shí)習(xí)時(shí)間：學(xué)號(hào):植物保護(hù)微生物工程方向指導(dǎo)老師：紀(jì)春艷，阮小蕾，卓侃微生物教學(xué)實(shí)習(xí)201*.04.23-04.27第十周201*30201*19學(xué)生姓名王艷麗班級(jí)：09植保微生物2班一、實(shí)習(xí)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 一土壤微生物的分開(kāi)、培養(yǎng)及識(shí)別 1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛢?nèi)容 目的：1掌握從土壤中分開(kāi)微生物的方法 2掌握常用的分開(kāi)純化微生物的操作技術(shù)內(nèi)容：1用稀釋法分開(kāi)細(xì)菌、放線菌和霉菌2用平板劃線方法分開(kāi)微生物3斜面接種及穿刺接種 2.實(shí)驗(yàn)原理 從

3、混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過(guò)程稱為微生物的分開(kāi)與純化，方法有：?jiǎn)渭?xì)胞挑取法、平板劃線法和稀釋倒平板法。本實(shí)驗(yàn)利用稀釋倒平板從土壤中分開(kāi)細(xì)菌、放線菌和霉菌?；驹頌椋簩⒑懈鞣N微生物的土壤懸浮液進(jìn)行稀釋后涂布接種到各種選擇培養(yǎng)基平板上，在不同條件下培養(yǎng)，從而使各種微生物在各自的培養(yǎng)基上形成單菌落。單菌落是一個(gè)細(xì)胞繁殖而成的集合體，即是一個(gè)純培養(yǎng)。 平板菌落計(jì)數(shù)法是將待測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微生物充分分散為單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到不同選擇性培養(yǎng)基的平板上，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見(jiàn)的菌落，進(jìn)行平板菌落計(jì)數(shù)。 3.實(shí)驗(yàn)材料 1)培養(yǎng)基已滅菌

4、的牛肉膏、高氏一號(hào)、查氏培養(yǎng)基。2)儀器及用具99ml無(wú)菌水1瓶，含9ml無(wú)菌水的試管6支，80%乳酸，95%乙醇，無(wú)菌培養(yǎng)皿，1ml無(wú)菌移液管，土壤樣品、天平、稱量紙、鑰匙、試管架、涂布器。4.操作步驟 一土壤稀釋分開(kāi)法分開(kāi)純化細(xì)菌、放線菌和霉菌1.土壤樣品采集 待測(cè)地塊上，假設(shè)地塊面積小于50平方米，對(duì)角線三點(diǎn)采樣，假設(shè)大于50平方米，對(duì)角線五點(diǎn)采樣。一般定點(diǎn)于耕作層0-20cm，先除去表土1-2cm，以無(wú)菌鏟采土足量充分混勻后用無(wú)菌塑料袋分裝。 2.無(wú)菌操作制備土壤稀釋液 1)制備土壤懸液：稱取土樣1g，迅速倒入含有99ml無(wú)菌水的三角瓶中，振蕩510min，使土樣充分打散，即成10-2

5、的土壤懸液。 2)稀釋：用無(wú)菌移液管吸10-2的土壤懸液1ml，吹入9ml無(wú)菌水即成10-3稀釋液，如此重復(fù)，可依次制成10-310-8的稀釋液。注意：操作時(shí)管尖不能接觸液面，每一個(gè)稀釋度換用一支移液管，每次吸入土液后，要將移液管插入液面，吹吸3次，每次吸上的液面要高于前一次，以減少稀釋中的誤差。3.涂布法測(cè)定菌落數(shù)的方法 1)涂布法：將0.10.2ml菌懸液滴在平板表面中央位置，右手拿無(wú)菌涂布器平放于平板表面，將菌液先沿一條直線輕輕來(lái)回推動(dòng)，使之均勻分布，然后改變方向沿另一垂直線來(lái)回推動(dòng)，平板邊緣可改變方向用涂布器再涂布幾次。 2)接種量和培養(yǎng)基：細(xì)菌：取10-6、10-7、10-8兩管稀釋

6、液各0.2ml，分別接入兩個(gè)牛肉膏蛋白胨瓊脂平板中，涂布均勻。放線菌：取10-2、10-3、10-4兩管稀釋液，在每管中加入10%酚液56滴，搖勻，靜置片刻，然后分別從兩管中吸出0.2ml加入高氏1號(hào)培養(yǎng)基平板中，涂布均勻。霉菌：取10-2、10-3、10-4兩管稀釋液各0.2ml，分別接入查氏培養(yǎng)基中，涂布搖勻。 4.培養(yǎng)將接種好的細(xì)菌、放線菌、霉菌平板倒置，即皿蓋朝下放置，于2830中恒溫培養(yǎng)，細(xì)菌培養(yǎng)12d，放線菌培養(yǎng)57d，霉菌培養(yǎng)35d。觀察生長(zhǎng)的菌落，用于進(jìn)一步純化分開(kāi)或直接轉(zhuǎn)接斜面。 5.劃線分開(kāi)細(xì)菌用接種環(huán)從待純化的菌落或待分開(kāi)的斜面菌種只沾取少量菌樣，在相應(yīng)培養(yǎng)基平板中劃線分

7、開(kāi)。劃線的方法多樣，目的是獲得單個(gè)菌落。常用的劃線方法有兩種：連續(xù)劃線和分區(qū)劃線。 6.穿刺接種霉菌用接種針將培養(yǎng)出的霉菌挑出，接種到新的查氏培養(yǎng)基上。5.注意事項(xiàng) 1)一般土壤中，細(xì)菌最多，放線菌及霉菌次之，而酵母菌主要見(jiàn)于果園及菜園土壤中。故從土壤中分開(kāi)細(xì)菌時(shí)，要取較高的稀釋度，否則菌落連成一片不能計(jì)數(shù)。 2)在土壤稀釋分開(kāi)操作中，每稀釋10倍，最好改換一次移液管，使計(jì)數(shù)準(zhǔn)確。3)放線菌的培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，故制平板的培養(yǎng)基用量可適當(dāng)增多。6.實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 本小組任務(wù)是用涂布法分開(kāi)土壤中的真菌，選用的是查氏培養(yǎng)基，因細(xì)菌長(zhǎng)勢(shì)比真菌快，且培養(yǎng)基中未加鏈霉素、抗生素等抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的物質(zhì)，因此本次實(shí)

8、驗(yàn)用于分開(kāi)的9個(gè)培養(yǎng)皿全部長(zhǎng)出了細(xì)菌，只有處理濃度為10-4土壤懸液中的一個(gè)皿中長(zhǎng)出了少量真菌即霉菌菌落。劃線法分開(kāi)細(xì)菌：其中一個(gè)皿劃線重復(fù)，未達(dá)到劃線稀釋的目的，最后沒(méi)有長(zhǎng)出單菌落，另一個(gè)皿雖劃線無(wú)重復(fù)，但是劃線次數(shù)較少，也沒(méi)有分開(kāi)出單菌落。 霉菌分開(kāi)：接種的地方有霉菌菌落長(zhǎng)出，但其他地方也有霉菌菌落，分開(kāi)結(jié)果不好。二水的細(xì)菌學(xué)檢查細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定1目的要求 通過(guò)實(shí)驗(yàn)掌握水樣的采集和水樣中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定方法。2.實(shí)驗(yàn)原理1)水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定 水中的細(xì)菌總數(shù)越多，說(shuō)明水中有機(jī)物的含量就越高，水體被有機(jī)物污染的程度越重。水中細(xì)菌的種屬繁多，以一定的培養(yǎng)基平板上生長(zhǎng)出來(lái)的菌落，計(jì)算出來(lái)的水中的細(xì)菌

9、的總數(shù)實(shí)際上是一種近似值。 絕大多數(shù)腐生性和致病性的細(xì)菌，可在肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上進(jìn)行生長(zhǎng)。因此應(yīng)用平板菌落計(jì)數(shù)技術(shù)來(lái)測(cè)定水樣中的細(xì)菌總數(shù)基本上能代表水樣中細(xì)菌的數(shù)量。 2)水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定和計(jì)算 在肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上，1ml水樣，經(jīng)37，24h培養(yǎng)后所生長(zhǎng)出來(lái)的總菌數(shù)。我國(guó)飲用水的衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)：在1ml自來(lái)水中細(xì)菌總數(shù)不得超過(guò)100個(gè)。 3.實(shí)驗(yàn)器材 培養(yǎng)基：肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基；滅菌水 其他用具：滅菌三角瓶，滅菌培養(yǎng)皿，滅菌試管等4.操作步驟 1)水樣的采集 自來(lái)水：水龍頭火焰灼燒3min，再開(kāi)放水龍頭流水5min后，以滅菌三角瓶接取水樣。湖水：取距水面10-15cm的深層水樣，最好馬上實(shí)驗(yàn)

10、，否則放入冰箱中保存。 2)細(xì)菌總數(shù)測(cè)定1自來(lái)水 a、用滅菌管吸取1ml水樣，注入滅菌培養(yǎng)皿中，做兩個(gè)皿。 b、分別傾入約15ml已溶化并冷卻到45左右的肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，在桌上作平面旋搖，使水樣與培養(yǎng)基充分混勻。 c、另取一空的滅菌培養(yǎng)皿，傾入約15ml肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，作空白對(duì)照。d、培養(yǎng)基凝固后，倒置于37中，培養(yǎng)24h，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。2湖水a(chǎn)、稀釋水樣： a、取4個(gè)滅菌空試管，分別加入9ml滅菌水。b、取1ml水樣注入第一管9ml滅菌水內(nèi)、搖勻。 c、再自第一管取1ml至下一管滅菌水內(nèi)，如此稀釋到第四管，稀釋度分別為10-1、10-2、10-3、10-4。 b、自最后三個(gè)稀釋度

11、的試管中各取1ml稀釋水加入空的滅菌培養(yǎng)皿中，每一稀釋度做兩個(gè)培養(yǎng)皿。 c、各傾入約15ml已溶化并冷卻到45左右的肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，在桌上作平面旋搖，使水樣與培養(yǎng)基充分混勻。d、培養(yǎng)基凝固后，倒置于37中，培養(yǎng)24h，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。 3)菌落計(jì)數(shù) 1、自來(lái)水：兩個(gè)平板的平均菌落數(shù)即為1ml水樣的細(xì)菌總數(shù)。2、湖水： 1先計(jì)算相同稀釋度的平均菌落數(shù)。假設(shè)其中一個(gè)平板有較大片狀菌苔生長(zhǎng)時(shí)，則不應(yīng)采納，而應(yīng)以無(wú)片狀菌苔生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。假設(shè)片狀菌苔的大小不到平板的1/2，而其余的一半菌落分布又很均勻時(shí)，則可將此一半的菌落數(shù)乘2以代表全平板的菌落數(shù)。 2首先選擇平均菌落數(shù)在30

12、-300之間的，當(dāng)只有一個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時(shí)，則以該平均菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)即為該水樣的細(xì)菌總數(shù)。 3假設(shè)有兩個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)均在30-300之間，則按兩者菌落總數(shù)之比值來(lái)決定。假設(shè)其比值小于2，采用兩者的平均值，假設(shè)大于2，則取其中較小的菌落總數(shù)。 4假設(shè)所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。 5假設(shè)所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。 6假設(shè)所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30-300之間，則以最近300或30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。 5.實(shí)驗(yàn)結(jié)果 自來(lái)水：對(duì)照平板菌落為：0。自來(lái)水樣兩平板的菌落數(shù)

13、分別為：3、1。所以1ml水樣的細(xì)菌總數(shù)為2個(gè)/ml。 湖水 湖水樣不同稀釋度的平均菌落數(shù)10-2湖水1湖水2平均877.510-3433.510-4396.0由于所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，所以按照稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。湖水中的細(xì)菌總數(shù)為7.5×102個(gè)/ml。 6.思索題 1、從自來(lái)水水樣細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)的結(jié)果判斷是否符合飲用水的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)？ 答：由于我國(guó)飲用水的衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)為：在1ml自來(lái)水中細(xì)菌總數(shù)不得超過(guò)100，而小組測(cè)定的自來(lái)水中細(xì)菌數(shù)為2個(gè)/ml。所以從自來(lái)水水樣細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)的結(jié)果看，符合飲用水的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。 2、你所測(cè)的池塘水、河水、湖水的污穢度如何？通過(guò)實(shí)

14、驗(yàn)?zāi)銓?duì)保護(hù)水資源有何熟悉？答：我組所測(cè)的湖水污穢度較高，可能存在誤差。通過(guò)實(shí)驗(yàn)使我們明白只有保護(hù)水源，保證其清潔，才干保證我們?nèi)祟?lèi)自身的利益，無(wú)論是飲食方面，還是環(huán)境方面。 3、試與其他同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較，從中判斷你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果誤差如何？原因是什么？答：與其他同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相比較，我組自來(lái)水水樣細(xì)菌總數(shù)與他組相差不大，但湖水細(xì)菌總數(shù)少一些，可能原因是用傾注法倒入培養(yǎng)基時(shí)，培養(yǎng)基未冷卻至45一下，所以高溫殺死了大量細(xì)菌。 4、請(qǐng)回答：干熱滅菌、高壓濕熱滅菌、過(guò)濾除菌的原理及適用范圍。 答：1干熱滅菌：通過(guò)燒灼或烘烤等方法，使微生物酶、蛋白質(zhì)變性而殺死微生物。干熱滅菌包括： 烘箱熱空氣法：適用于

15、金屬和玻璃器皿的滅菌，也是唯一可用于油料和粉料物質(zhì)的滅菌方法。 火焰焚燒法：常使用酒精燈火焰焚燒接種環(huán)、接種針和試管口等經(jīng)焚燒不會(huì)損壞的物品。2高壓濕熱滅菌：熱蒸汽對(duì)細(xì)胞成分的破壞作用更強(qiáng)，水分子的存在有助于破壞維持蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)的氫鍵和其他互相作用弱鍵，更易使蛋白質(zhì)變形，還可以使細(xì)胞膜脂溶解。高壓真氣還可以破壞核酸結(jié)構(gòu)，殺滅那些蛋白質(zhì)外殼變性后仍具有侵染性的病毒。熱蒸汽比空氣穿透力強(qiáng)，能更加有效地殺滅微生物。蒸汽存在潛熱，當(dāng)氣體轉(zhuǎn)變?yōu)橐后w時(shí)可放出大量熱量，顧可迅速提升滅菌物體的溫度。 水煮沸法：適用于注射器、解剖用具及家庭餐具的消毒。 高壓蒸汽鍋法：主要用于各種耐熱耐濕物品的物品，如一般培養(yǎng)

16、基、生理鹽水等各種溶液、工作服及實(shí)驗(yàn)器材等。 3過(guò)濾除菌：將液體通過(guò)某種多孔的材料，使微生物與液體分開(kāi)。可用于對(duì)熱敏感液體的滅菌，如含有酶或維生素的溶液、血清等。還可用于啤酒生產(chǎn)代替巴斯德消毒。 二、實(shí)習(xí)學(xué)習(xí)參觀益力多公司參觀及珠江啤酒集團(tuán)參觀 一益力多乳制品制作流程及工藝 原料溶解罐用熱水將奶粉及糖類(lèi)溶解成液狀奶殺菌機(jī)殺菌后得到清潔的原料汁種菌罐存儲(chǔ)益力多菌培養(yǎng)罐用益力多菌發(fā)酵，制造發(fā)酵液糖漿罐制造糖漿調(diào)和液儲(chǔ)存罐將糖漿加到發(fā)酵液中制得原料液混合機(jī)將原料液和原料水混合調(diào)配成益力多的味道成形機(jī)制造益力多容器灌裝機(jī)灌裝益力多液封蓋機(jī)封蓋收縮包裝機(jī)5支及50支包裝成形 二微生物與益力多乳制品制作微

17、生物原理 乳制品生產(chǎn)過(guò)程中利用的微生物是乳酸菌。益力多乳制品主要與干酪乳桿菌代田株即益力多菌密切相關(guān)，它利用人們提供的底物原料，在適宜的條件下大量生長(zhǎng)、繁殖，是一種益生菌。益力多乳制品提供的是一種活菌，而不是益力多菌的代謝產(chǎn)物，據(jù)說(shuō)，在一瓶益力多飲品中就有100億個(gè)活性細(xì)菌。益力多菌符合益生菌的7個(gè)條件，即：1.能夠耐受胃液、膽汁、以存活的狀態(tài)到達(dá)腸內(nèi)；2.能夠在腸內(nèi)增殖；3.被科學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)能夠改善腸內(nèi)菌群；4.能夠保證安全性；5.原來(lái)就是人體腸道菌群的一種；6.存活在食品中并能堅(jiān)持有效的菌數(shù)；7.價(jià)廉且容易處理。產(chǎn)品一般可以改善微生物與酶的平衡或刺激特異性與非特特異性免疫，從而改善腸道菌群構(gòu)

18、成。飲用益力多菌可抑制腸內(nèi)有害菌的增殖，有害菌所產(chǎn)生的各種有害物質(zhì)則相應(yīng)減少。此外，益力多菌產(chǎn)生的乳酸及乙酸能刺激腸道運(yùn)行而改善排便。有研究說(shuō)明，益力多菌能使體內(nèi)nk細(xì)胞活性化，促進(jìn)抗體的產(chǎn)生，從而提升人體自身對(duì)細(xì)胞的功擊和病原體感染的防御能力。 三珠江啤酒釀造流程及工藝 麥芽倉(cāng)儲(chǔ)存麥芽粉碎機(jī)粉碎麥芽糖化鍋粉碎后的麥芽和一定量的釀造水混合，麥芽中的蛋白質(zhì)分解成多肽和氨基酸，淀粉分解成麥芽糖、葡萄糖等糖類(lèi)物質(zhì)的過(guò)程大米篩選機(jī)大米粉碎機(jī)原料與處理糊化鍋大米糊化麥芽過(guò)濾槽過(guò)濾糊化雜質(zhì)煮沸鍋過(guò)濾后的麥汁加入酒花、麥汁澄清劑等輔料，完成煮沸過(guò)程，目的是使麥汁達(dá)到一定濃度，殺死麥汁中全部的酶和致病菌及麥汁中的蛋白質(zhì)絮凝等酒花濾除器回旋沉淀槽去除麥汁中的熱凝固物，使煮沸后的麥汁清亮透明麥汁冷卻器利用4冰水，經(jīng)過(guò)薄板換熱器將麥汁冷卻到工藝規(guī)定的溫度空氣過(guò)濾器酵母培養(yǎng)及添加罐培養(yǎng)酵母發(fā)酵罐酵母利用麥汁中碳源和氮源兩大能源物質(zhì)，經(jīng)過(guò)有氧呼吸和無(wú)氧發(fā)酵，將麥汁中的可發(fā)酵性糖分解成酒精、二氧化碳和其他一系列發(fā)酵副產(chǎn)物的過(guò)程啤酒添加劑添加罐緩沖罐硅藻土添加罐硅藻土過(guò)濾罐硅藻土過(guò)濾機(jī)利用硅藻土對(duì)啤酒后期處理冷儲(chǔ)藏過(guò)濾器儲(chǔ)酒罐灌裝出場(chǎng) 四微生物與珠江啤酒釀造微生物原理 用于啤酒釀造的微生物為酵母菌，啤酒的生產(chǎn)是依靠純種啤酒酵母利用麥芽汁中的糖，氨基酸等可發(fā)酵性物質(zhì)通過(guò)一系列