干細(xì)胞移植治療急性心肌梗死徐強(qiáng)

1、干細(xì)胞移植治療急性心肌梗死徐強(qiáng)Background第1頁/共54頁Miranda D. Grounds, et al. The Journal of Histochemistry & Cytochemistry 2002,50(5): 589610 第2頁/共54頁第3頁/共54頁第4頁/共54頁第5頁/共54頁ESC and ASC來自胚泡的內(nèi)細(xì)胞群來自胚泡的內(nèi)細(xì)胞群來源于骨髓、外周血、角膜、視網(wǎng)膜、腦、來源于骨髓、外周血、角膜、視網(wǎng)膜、腦、骨骼肌、齒髓、肝、皮膚、胃腸道粘膜層和骨骼肌、齒髓、肝、皮膚、胃腸道粘膜層和胰腺等胰腺等發(fā)育全能性，可誘導(dǎo)分化為機(jī)體發(fā)育全能性，可誘導(dǎo)分化為機(jī)體

2、分化較局限，部分成體干細(xì)胞（造血干細(xì)胞、分化較局限，部分成體干細(xì)胞（造血干細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞）有一定跨骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞）有一定跨系、跨胚層的系、跨胚層的“可塑性可塑性”無限的自我更新能力無限的自我更新能力病理?xiàng)l件下才顯出一定的自我更新潛能病理?xiàng)l件下才顯出一定的自我更新潛能增殖能力強(qiáng)，便于應(yīng)用增殖能力強(qiáng)，便于應(yīng)用增殖能力較弱，故不能完全取代胚胎干細(xì)胞增殖能力較弱，故不能完全取代胚胎干細(xì)胞細(xì)胞可不斷增殖，細(xì)胞可不斷增殖，“永生化永生化”，移植后，移植后有形成腫瘤的可能性有形成腫瘤的可能性成瘤的可能性很小成瘤的可能性很小不能自體移植不能自體移植自體移植可避免免疫排斥自體移

3、植可避免免疫排斥有倫理問題有倫理問題分離和使用不存在倫理問題分離和使用不存在倫理問題第6頁/共54頁BMC(bone marrow cell)第7頁/共54頁Nature/Vol428/3 April 2004/664-8 Problems of HSC第8頁/共54頁HSC（CD34+）Transplatition for AMIJ Thorac Cardiovasc Surg 2005;130:1631-8 第9頁/共54頁第10頁/共54頁骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cell, MSC）第11頁/共54頁 （K.D. Bunting, R.G. Hawley .B

4、iology of the Cell 2003,95:563578）MSC(mesenchymal stem cell) DIFFERITION第12頁/共54頁第13頁/共54頁Current problem-evidence 骨髓干細(xì)胞究竟能否分化成心肌細(xì)胞卻始終有爭議，目前仍無法完全證實(shí)MSC可分化為心肌細(xì)胞。 Stem cells from bone m arrow could be used to repair a variety of tissues.？第14頁/共54頁New Focus-microenvironment 急性心肌梗死后局部微環(huán)境發(fā)生的一系列炎癥反應(yīng)，對(duì)干細(xì)胞的存

5、活、分化、遷移等都有很大影響。第15頁/共54頁MSC原代傳代前細(xì)胞形態(tài)（100） 貼壁細(xì)胞增殖融合，鋪滿瓶底90% 左右，未貼壁細(xì)胞是造血干細(xì)胞及組織碎片第16頁/共54頁p1（100） p4（100） p3（100） p2（100） 第17頁/共54頁流式細(xì)胞鑒定CD106 、CD90表達(dá)陽性， CD31、CD45表達(dá)陰性第18頁/共54頁DiL標(biāo)記結(jié)果（200） 第19頁/共54頁AMINormal復(fù)方丹參滴丸對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療急性心肌梗死干預(yù)作用的實(shí)驗(yàn)研究復(fù)方丹參滴丸對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療急性心肌梗死干預(yù)作用的實(shí)驗(yàn)研究第20頁/共54頁Normal AMI第21頁/共54頁

6、NBT第22頁/共54頁NORMAL AMI第23頁/共54頁AMI Group左室后壁增厚，運(yùn)動(dòng)幅度變小 CDDPMSC Group左室后壁厚度均勻，運(yùn)動(dòng)幅度正常第24頁/共54頁對(duì)AMI大鼠心臟射血分?jǐn)?shù)的影響孫蘭軍等，中華醫(yī)學(xué)臨床雜志，2008，6（2）：4第25頁/共54頁心肌梗死面積測(cè)定結(jié)果模型組MSCs復(fù)方丹參滴丸組第26頁/共54頁 A A，培養(yǎng)MSC用DiI（紅色）和Hoechst33258（藍(lán)色）染色的照片； B B，心臟切片用Hoechst33258染色的照片，箭頭顯示部分移植的MSC； C C，對(duì)照組心臟幾乎沒有MSC定位；第27頁/共54頁第28頁/共54頁極少量移植地細(xì)

7、胞能表達(dá)-actinin，說明開始向心肌細(xì)胞分化，但這種分化是不完全的，因?yàn)闆]有橫紋的出現(xiàn)。相對(duì)較多的細(xì)胞表達(dá)血管性血友病因子(vWF) ，說明移植的MSC能夠向內(nèi)皮細(xì)胞分化。第29頁/共54頁CX-43染色在同一視野看到Dil標(biāo)記的植入的紅色熒光的MSCs和二抗FITC標(biāo)記的相應(yīng)綠色熒光的 CX-43陽性表達(dá)CDDP+MSC組（200）第30頁/共54頁CX-43染色MSC組（200）第31頁/共54頁Troponin 染色CDDP+MSC組（200） 在同一視野看到Dil標(biāo)記的植入的紅色熒光的MSCs和二抗FITC標(biāo)記的相應(yīng)綠色熒光的 Troponin 陽性表達(dá)，第32頁/共54頁Trop

8、onin 染色MSCs Group Troponin 表達(dá)（200） 第33頁/共54頁對(duì)心臟膠原沉積的影響 HE Picrosirius red HE Picrosirius red normalMSCs+CDDPMSCs model第34頁/共54頁各心梗組大鼠的膠原含量無顯著差異。但是，MSC和CDDP+MSC移植使心肌梗死區(qū)I/III型膠原比值分別降低了77和84。說明細(xì)胞移植能增加III型膠原含量，改善心肌順應(yīng)性，可能會(huì)對(duì)心功能有益。第35頁/共54頁*Balcalin induced migration of Mscs第36頁/共54頁 Real-time quantitative

9、 RT-PCR analysis of VEGF, SCF, SDF-1 and MCP-1 mRNA change* p 0.05, * p 0.01, compared to model. (n=6), *第37頁/共54頁*第38頁/共54頁Conclusions CDDP CDDP可能通過多種途徑和機(jī)制干預(yù)誘導(dǎo)植入梗塞大鼠心肌干細(xì)胞的分化成活，并使植入細(xì)胞表達(dá)心肌特異性蛋白，說明植入細(xì)胞已分化為心肌樣細(xì)胞，同時(shí)可抑制膠原沉積，改善微環(huán)境。 有望成為中醫(yī)藥治療心血管疾病的一個(gè)新的發(fā)展方向，作為現(xiàn)代治療方法的補(bǔ)充手段，為臨床帶來廣闊的應(yīng)用前景。第39頁/共54頁第40頁/共54頁Rando

10、mized Clinical Trials of Stem Cell Therapy for MICirculation. 2006;114:353-358. 第41頁/共54頁 Arrhythmias Restenosis, Accelerated Atherosclerosis, and Coronary Obstruction Abnormal Cellular DifferentiationIn addition，Safety Concerns 第42頁/共54頁Is stem cell therapy for cardiac repair ready for patients? No

11、t ready第43頁/共54頁 作為一項(xiàng)新生事物，干細(xì)胞移植可能是治療缺血性心臟病令人激動(dòng)的新選擇。尤其是那些有大面積心肌梗死患者，因其預(yù)后不佳，更有可能從細(xì)胞移植治療中獲益。但迄今為止，臨床試驗(yàn)結(jié)果相互矛盾，仍然處于實(shí)驗(yàn)性治療階段。第44頁/共54頁第45頁/共54頁Miranda D. Grounds, et al. The Journal of Histochemistry & Cytochemistry 2002,50(5): 589610 第46頁/共54頁HSC（CD34+）Transplatition for AMIJ Thorac Cardiovasc Surg 20

12、05;130:1631-8 第47頁/共54頁骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cell, MSC）第48頁/共54頁第49頁/共54頁NORMAL AMI第50頁/共54頁 Real-time quantitative RT-PCR analysis of VEGF, SCF, SDF-1 and MCP-1 mRNA change* p 0.05, * p 0.01, compared to model. (n=6), *第51頁/共54頁Conclusions CDDP CDDP可能通過多種途徑和機(jī)制干預(yù)誘導(dǎo)植入梗塞大鼠心肌干細(xì)胞的分化成活，并使植入細(xì)胞表達(dá)心肌特異性蛋白，說明植入細(xì)胞已分化為心肌樣細(xì)胞，同時(shí)可抑制膠原沉積，改善微環(huán)境。 有望成為中醫(yī)藥治療心血管疾病的一個(gè)