凝膠柱使用注意事項(xiàng)

1、使用注意事項(xiàng)：色譜柱在使用過(guò)程中主要應(yīng)該注意的是：1、 每根色譜柱都有一定的壓力范圍（說(shuō)明書(shū)有說(shuō)明），一般要在合適的壓力下進(jìn)行分析使 用。2、 色譜柱在制作過(guò)程中是在一定的壓力下按一定的方向添裝的，因此要求在使用時(shí)要按 照規(guī)定的方向進(jìn)行連接。 如果不小心裝反了也不用著急， 一般沒(méi)有超壓使用應(yīng)該影響不是很 大。但如果一直使用了很長(zhǎng)時(shí)間如半年或 1-2年，建議你就一直這樣使用下去。3、分析樣品和流動(dòng)相一定要過(guò)濾干凈，不要讓對(duì)柱有害的物質(zhì)通過(guò)色譜柱。4、增加一根保護(hù)柱或柱前保護(hù)對(duì)分析柱是有好處的。5、色譜柱能不能反沖，在第 2中提到了一點(diǎn)，一般咨詢(xún)廠(chǎng)家時(shí)都會(huì)告訴你不能反沖，主要是擔(dān)心反沖會(huì)使柱中的填

2、料松散，那樣整根柱子就報(bào)廢了。這一點(diǎn)應(yīng)該很好理解， 就是在一定壓力一定方向?qū)⑻盍咸畛鋲壕o，如果反向沖操作不當(dāng)很容易就會(huì)使原來(lái)壓緊的填料松散開(kāi)，這是無(wú)法彌補(bǔ)的損壞。但在具體使用中，就我所知可以在壓力低一些，也就是流量小一些的條件下進(jìn)行反沖，只要沒(méi)有影響到柱內(nèi)的填料，將堵塞的物質(zhì)沖出可以有效降低系統(tǒng)壓 力，改善柱效。應(yīng)用：凝膠色譜柱主要進(jìn)行大分子樣品分子量與分子量分布的檢測(cè)，如果樣品分子量差異較大，應(yīng)該也可以進(jìn)行分離。這類(lèi)樣品可以作為寬標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立。另外，凝膠色譜柱檢測(cè)的樣品有油性的高分子物質(zhì)，如樹(shù)脂類(lèi)等，還有水溶性的高分子物質(zhì)如糖類(lèi)等。對(duì)于不同廠(chǎng)家的色譜柱要說(shuō)好壞之分， 我認(rèn)為

3、和以上很多內(nèi)容都有關(guān)系， 樣品是否干凈，流 動(dòng)相是否干凈，人員有沒(méi)有誤操作， 有沒(méi)有保護(hù)柱，每天工作量大小等很多影響因素?？傮w來(lái)說(shuō)應(yīng)該差不多。凝膠色譜柱（水性）的保養(yǎng)與保存：凝膠色譜柱需要注意防止微生物的生長(zhǎng)，被微生物污染后的色譜柱將無(wú)法重現(xiàn)原來(lái)的分離效果與柱效，嚴(yán)重會(huì)使凝膠色譜柱報(bào)廢。為了抑制微生物的生長(zhǎng)，可以使用低溫保存。 值得注意的是溫度不能過(guò)低，以免凍結(jié)，為了不凍結(jié)可以提高保存時(shí)介質(zhì)的離子強(qiáng)度。常用的保存抑菌劑有：0.02%疊氮鈉、0.002%洗必泰（hibitane，雙氯苯雙阪己烷）、0.01%-0.02%三氯丁醇、0.1mol/l氫氧化鈉。也可以用一定量有機(jī)溶劑來(lái)保存，如20%乙醇

4、。值得注意的是，無(wú)論何種保護(hù)方式，都必須根據(jù)色譜柱的特點(diǎn)來(lái)進(jìn)行。液相色譜儀由高壓液體泵、檢測(cè)器及液相色譜柱等三部分組成，其中液相色譜柱的正確安裝和使用，是液相色譜工作的關(guān)鍵；也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路。一、液相色譜柱的安裝：1、液相色譜柱的結(jié)構(gòu)：a、空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。柱接頭采用低死體積結(jié)構(gòu)，柱接頭是兩端螺紋組件，一端是為7/16英寸外螺紋，另一端是3/ 16英寸的內(nèi)螺紋（國(guó)內(nèi)外已規(guī)范化）。7/16英寸外螺紋與1 /4英寸柱管（6.35mm）連接，中間放置壓壞用于密封。3/16英寸的內(nèi)螺紋與 1/16英寸（1.57mm）的連接管連接，中間也放置壓環(huán)用于柱接

5、頭的密封。為了盡量減少柱外死體積，在安裝色譜柱時(shí)，用1.57mm連接管通過(guò)空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底，然后再擰緊空心螺釘。壓環(huán)被空心螺 釘擠壓變形后緊箍在連接管上 （連接管通過(guò)壓環(huán)后露出的管長(zhǎng)度應(yīng)嚴(yán)格控制在2. 5mm長(zhǎng)或其他固定尺寸）。在兩端柱接頭內(nèi)，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片（或?yàn)V網(wǎng)），用于封堵柱填料不被流動(dòng)相沖出柱外而流失。空柱各組件均為316#不銹鋼材質(zhì)，能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對(duì)其有一定的腐蝕性，故使用時(shí)要注意，柱及連接管內(nèi)不能長(zhǎng)時(shí)間存留此類(lèi)溶劑，以避免腐蝕。b、柱填料：液相色譜柱的分離作用是在填料與流動(dòng)相之間進(jìn)行的，柱子的分類(lèi)是依據(jù)填料類(lèi)型而定。正相柱：多以硅膠

6、為柱填料。根據(jù)外型可分為無(wú)定型和球型兩種，其顆粒直徑在3-10叫的范圍內(nèi)。另一類(lèi)正相填料是硅膠表面鍵合一CN , -NH2等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠。反相柱：主要是以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)（ODS）的非極性填料。也有無(wú)定型和球型之分。常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等，其顆粒粒徑在 3 10叫 之間。c、使用0.45 pm的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì)。2, 色譜柱的安裝：a、拆開(kāi)柱包裝盒，確認(rèn)色譜柱的類(lèi)型、尺寸、出廠(chǎng)日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。b、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。c、 按柱管上標(biāo)示的流動(dòng)相流向，將色譜柱的入口端通過(guò)連接管與進(jìn)樣閥出口相連接（如

7、條件允許，建議在柱前使用保護(hù)柱）；柱的出口與檢測(cè)器連接。連接管是外徑為1.57mm、內(nèi)徑為0.1-0.3mm 的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時(shí)一定要設(shè)法降低柱外死體積。連接管通過(guò)空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時(shí)針擰緊空 心螺釘，直到擰不動(dòng)為止，再用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1 /4-1 /2圈，切記不要用力過(guò)大。如色譜柱2、流動(dòng)相的配制：液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng) 相具備以下的特點(diǎn)：a、 流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中（或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱 中）。b、 流動(dòng)相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)（特

8、殊情況除外）。c、流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便在使用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)能得到好的分離效果；同時(shí)降低柱壓降，延長(zhǎng)液體泵的使用壽命 （可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度）。d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用 UV檢測(cè)器，最好使用對(duì)紫外吸 收較低的溶劑配制。e、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。f、在流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè)， 還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。3、流動(dòng)相流速的選擇：因柱效是柱中流動(dòng)相線(xiàn)性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特 定的色譜柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml /min，對(duì)于內(nèi)徑為 4.0mm 柱，流速0.8ml /min為佳。當(dāng)選用最佳流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長(zhǎng)?？刹捎酶淖兞鲃?dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分 析時(shí)間（如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙睛的含量）。注意：1 .由于甲醇廉價(jià)，對(duì)于反相柱推薦使用甲醇體系（必須使用乙睛的場(chǎng)合除外）。2 .對(duì)于正相柱推薦使用沸程為30-60 C的石油?；蛱峒兒蟮募和樽髁鲃?dòng)相，沒(méi)有提純的己烷不得使用。用水最好使用超純水（電阻率大于18兆歐），去離子水及雙蒸水中含有酚類(lèi)雜質(zhì)