抗原抗體反應(yīng)及其應(yīng)用PPT

1、抗原抗體反應(yīng)及應(yīng)用抗原抗體反應(yīng)及應(yīng)用 傅慧傅慧 20182018年年2 2月月2一、抗原抗體反應(yīng)的基本原理一、抗原抗體反應(yīng)的基本原理二、抗原抗體反應(yīng)的類型二、抗原抗體反應(yīng)的類型三、免疫標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用三、免疫標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用內(nèi)容內(nèi)容3一、抗原抗體反應(yīng)的基本原理一、抗原抗體反應(yīng)的基本原理4 抗原與相應(yīng)抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)稱為抗原抗體反應(yīng)。 抗原抗體反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)AgAb（ ）（ ）如同鑰匙和鎖的關(guān)系如同鑰匙和鎖的關(guān)系66 6 抗原抗體反應(yīng)的原理1、抗原抗體結(jié)合力（4種）2、抗原抗體親和力和親合力3、親水膠體轉(zhuǎn)化疏水膠體抗原抗體反應(yīng)的原理抗原抗體反應(yīng)的原理 電荷引力（靜電引力） 范德華引力 氫鍵結(jié)合

2、力 疏水作用力71 1、抗原抗體結(jié)合力、抗原抗體結(jié)合力 - -靜電引力靜電引力（electrostatic forces） 靜電引力或庫侖引力（Cou-lombic forces）是因抗原、抗體帶有相反電荷的氨基（NHNH3 3+ +）與羧基基團(tuán)（COOCOO- -）間相互吸引的能力，之間的引力，距離越近引力越大。81 1、抗原抗體結(jié)合力、抗原抗體結(jié)合力 - -范德華引力范德華引力（Van der Waals forces）分子間（或原子間)相互接近，分子極化產(chǎn)生引力，其作用取決于分子空間構(gòu)型，如：凹槽與凸起互補(bǔ)，抗原與抗體，酶與底物。能量小于靜電引力。91 1、抗原抗體結(jié)合力、抗原抗體結(jié)合力

3、 - -氫鍵結(jié)合力（氫鍵結(jié)合力（hydrogen bond ） 是供氫體上的氫原子與受氫體上氫原子間的引力。其結(jié)合力較強(qiáng)于范德華引力 ，能量大于范德華引力。101 1、抗原抗體結(jié)合力、抗原抗體結(jié)合力 - -疏水作用力疏水作用力（hydrophobic interactions） 水溶液中兩個疏水基團(tuán)相互接觸，由于對水分子的排斥而趨向聚集的力。作用力最強(qiáng)，占總結(jié)合力的50。11靜電引力：異性相吸（electrostatic forces），離子鍵（Ionic bond）范德華引力: 作用最?。╲an der Waals interactions）氫鍵: 最具特異性（hydrogen bond ）

4、疏水作用力: 作用最大 （hydrophobic interactions） 疏水作用力疏水作用力 氫鍵結(jié)合力氫鍵結(jié)合力 靜電引力靜電引力 范德華引力范德華引力1 1、抗原抗體結(jié)合力、抗原抗體結(jié)合力122 2、抗原抗體親和力和親合力、抗原抗體親和力和親合力 是指抗體分子上一個抗原結(jié)合點與對應(yīng)的抗原決定簇之間相適應(yīng)而存在著的引力，是抗原抗體間固有的結(jié)合力。親和力（親和力（affinity)affinity)13親和力是指反應(yīng)系統(tǒng)中復(fù)雜抗原與相應(yīng)抗體之間的結(jié)合能力。與抗體結(jié)合價、抗體的親和性、抗原有效表位數(shù)目等相關(guān)。親合力親合力(avidity)(avidity)2 2、抗原抗體親和力和親合力、抗

5、原抗體親和力和親合力3 3、親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體、親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體 抗體和大多數(shù)抗原同屬蛋白質(zhì)。在通常的血清學(xué)反應(yīng)條件下均帶有負(fù)電荷，使極化的水分子在其周圍形成水化層，成為親水膠體，因此蛋白質(zhì)不會自行凝集出現(xiàn)沉淀。當(dāng)抗原與抗體結(jié)合后，表面電荷減少，水化層變薄;而且由于抗原抗體復(fù)合物形成后，與水接觸的表面積減少，由親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體。此時在電解質(zhì)(如NaCl，的作用下，使各疏水膠體之間進(jìn)一步靠攏、沉淀，形成可見的抗原抗體復(fù)合物。 14 可見反應(yīng)可見反應(yīng) ( (沉淀沉淀) )抗原抗體復(fù)合物抗原抗體復(fù)合物 ( (疏水膠體疏水膠體) )電解質(zhì)電解質(zhì) 抗原抗原( (親水膠體親水膠體) ) 抗

6、體抗體( (親水膠體親水膠體) ) + +15二、抗原抗體反應(yīng)的類型二、抗原抗體反應(yīng)的類型16 抗原抗體反應(yīng)的類型抗原抗體反應(yīng)的類型反應(yīng)類型抗原抗體補(bǔ)體沉淀反應(yīng)可溶無標(biāo)記無凝集反應(yīng)顆粒無標(biāo)記無補(bǔ)體參與反應(yīng) 細(xì)胞無標(biāo)記有中和反應(yīng)毒素等無標(biāo)記無免疫標(biāo)記標(biāo)記標(biāo)記無或17反應(yīng)類型反應(yīng)類型實驗技術(shù)實驗技術(shù)結(jié)果判斷結(jié)果判斷 沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗觀察沉淀，檢測濁度免疫電泳技術(shù)觀察掃描沉淀峰、沉淀弧凝集反應(yīng)直接凝集試驗觀察凝集現(xiàn)象間接凝集試驗觀察凝集現(xiàn)象抗球蛋白試驗觀察凝集現(xiàn)象 補(bǔ)體參與 反應(yīng)補(bǔ)體溶血試驗觀察測定溶血現(xiàn)象補(bǔ)體結(jié)合試驗觀察測定溶血現(xiàn)象 抗原抗體反應(yīng)的類型抗原抗體反應(yīng)的類型18反應(yīng)類型反應(yīng)類型實驗

7、技術(shù)實驗技術(shù)結(jié)果判斷結(jié)果判斷中和反應(yīng)病毒中和試驗檢測病毒感染性毒素中和試驗檢測外毒素毒性免疫標(biāo)記熒光免疫技術(shù)檢測熒光現(xiàn)象放射免疫技術(shù)檢測放射性強(qiáng)度酶免疫技術(shù)檢測酶底物顯色發(fā)光免疫技術(shù)檢測發(fā)光強(qiáng)度金免疫技術(shù)檢測金顆粒沉淀 抗原抗體反應(yīng)的類型抗原抗體反應(yīng)的類型19三、免疫標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用三、免疫標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用20免疫標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)是用熒光素、放射性同位素、酶等標(biāo)記抗體或抗原等所進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)。 特點：敏感度高 特異性強(qiáng) 快速 容易觀察 能進(jìn)行定性、定量、定位檢測等211 1、熒光免疫技術(shù)、熒光免疫技術(shù) 將結(jié)合有熒光素的熒光抗體進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)的技術(shù)。 常用的熒光素有

8、異硫氰酸熒光素（FITC)和羅丹明（RB200)等。它們可與抗體球蛋白中賴氨酸的氨基結(jié)合，在藍(lán)紫光激發(fā)下，可分別出現(xiàn)鮮明的黃綠色及玫瑰紅色。固相吸附抗原或抗體Ab光或Ag光Ab Ag光 或 AgAb光光激發(fā)發(fā)光22自身抗體檢測自身抗體檢測抗核抗體 (均質(zhì)型)抗核抗體 (核膜型)抗核抗體 (斑點型)歐蒙熒光免疫技術(shù)的應(yīng)用熒光免疫技術(shù)的應(yīng)用23熒光免疫技術(shù)的應(yīng)用熒光免疫技術(shù)的應(yīng)用病原體檢測病原體檢測呼吸道合胞病毒流感病毒A/B型副流感病毒免疫病理檢測免疫病理檢測細(xì)胞表面抗原和受體檢測細(xì)胞表面抗原和受體檢測特殊應(yīng)用：流式細(xì)胞分析特殊應(yīng)用：流式細(xì)胞分析242 2、放射免疫技術(shù)及其應(yīng)用、放射免疫技術(shù)及其

9、應(yīng)用用放射性同位素標(biāo)記技術(shù)來檢測抗原抗體反應(yīng)的高靈敏度方法。反應(yīng)特點：靈敏，精確；不穩(wěn)定 ；安全性差標(biāo)記Ag或Ab標(biāo)記物純化抗原抗體反應(yīng)抗原抗體復(fù)合物沉淀測定其放射活性 現(xiàn)臨床實驗室現(xiàn)臨床實驗室應(yīng)用較少應(yīng)用較少廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷領(lǐng)域中各種微量蛋白質(zhì)、激素、廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷領(lǐng)域中各種微量蛋白質(zhì)、激素、小分子藥物和腫瘤標(biāo)志物的定量分析等小分子藥物和腫瘤標(biāo)志物的定量分析等253 3、酶免疫技術(shù)、酶免疫技術(shù)將待測抗原或抗體吸附于固相表面（聚苯乙烯微量反應(yīng)板），與酶標(biāo)記的抗體或抗原反應(yīng)后，加入底物反應(yīng)（顯色或發(fā)光）的分析方法。酶標(biāo)板吸附抗原或抗體洗滌加入酶標(biāo)抗體或抗原Ag-

10、Ab酶或Ab-Ag酶加入酶作用底物顯色反應(yīng)26方法（1）直接法（可檢測抗原或抗體）：酶標(biāo)板吸附抗原或抗體洗滌 AgAb酶或AbAg酶顯色反應(yīng)Ab酶或Ag酶底物27（2）間接法（有兩種抗體參與，一抗做反應(yīng)橋梁）1Ab2Ab酶酶標(biāo)板吸附抗原Ag1Ab洗滌Ag1Ab2Ab酶底物顯色反應(yīng)一抗二抗28酶標(biāo)板吸附抗體AgAb - Ag洗滌Ab酶Ab - Ag - Ab酶底物顯色反應(yīng)（3）夾心法（不同抗體將抗原夾在中間反應(yīng)） 直接夾心法 間接夾心法酶標(biāo)板吸附抗體AgAb Ag1AbAb Ag 1Ab洗滌2Ab酶Ab Ag1Ab 2Ab酶底物顯色反應(yīng)29酶聯(lián)免疫吸附實驗夾心法30ELISA 應(yīng)用的范圍很廣，而且正在不斷地擴(kuò)大。臨床實驗室主要應(yīng)用于：1、傳染病的