葉綠體中色素的提取和分離

1、【實 驗】葉綠體中色素的提取和分離葉綠體中色素的提取和分離 主講人：主講人： 段段 娜娜 肖祖文肖祖文 助助 理：谷維佳理：谷維佳 黃素芬黃素芬 孫捷吉孫捷吉 馬牧原馬牧原 周梟楠周梟楠色素的提取和分離實驗一、實驗?zāi)康膙 進(jìn)行綠葉中色素的提取和分離v 探究綠葉中含有色素種類數(shù)目和顏色v 培養(yǎng)合作和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)精神 色素的提取和分離實驗二、實驗原理v提取提?。喝~綠體色素易溶于無水乙醇（酒精、汽油、苯、石油醚等）等有機(jī)溶劑中，可以用無水乙醇提取綠葉中的葉綠體色素。v分離分離：紙層析法 不同的葉綠體色素隨層析液在濾紙上擴(kuò)散速度不同。不同的色素會在擴(kuò)散過程中分離開來，形成條帶。 （色素在層析液中溶解度不

2、同，溶解度高的色素分子隨層析液在濾紙條上的擴(kuò)散速度快，溶解度低的色素分子隨層析液在濾紙條上的擴(kuò)散速度慢，因而可用層析液將不同的色素分離。） 色素的提取和分離實驗三、實驗材料【實驗材料實驗材料】：新鮮新鮮菠菜綠葉菠菜綠葉【實驗藥品實驗藥品】：層析液（汽油：石油醚：丙酮：苯層析液（汽油：石油醚：丙酮：苯=20:2=20:2：2:12:1），無水乙），無水乙 醇，石英砂醇，石英砂，碳酸鈣，碳酸鈣【實驗用具實驗用具】：研缽研缽，藥匙，紗布，小燒杯，干燥濾紙，藥匙，紗布，小燒杯，干燥濾紙， 剪刀，試管，毛細(xì)吸管，棉塞剪刀，試管，毛細(xì)吸管，棉塞色素的提取和分離實驗提取葉綠體色素v取材取材：取新鮮菠菜葉取新

3、鮮菠菜葉5g5g，撕去葉脈，盡量剪碎，放入研缽。，撕去葉脈，盡量剪碎，放入研缽。v研磨研磨：向研缽中放入少量向研缽中放入少量石英砂石英砂和和碳酸鈣碳酸鈣（量約為藥匙的（量約為藥匙的1/31/3），），加入加入6ml6ml無水乙醇無水乙醇，充分、迅速地研磨至勻漿狀態(tài)。，充分、迅速地研磨至勻漿狀態(tài)。v過濾過濾：在小燒杯上放上在小燒杯上放上4 4層紗布，將研磨液倒入小燒杯，過層紗布，將研磨液倒入小燒杯，過v 濾制備得到濾液。濾制備得到濾液。【注注】p加石英砂是為了使研磨充分加石英砂是為了使研磨充分p加碳酸鈣是為了防止葉綠體色素被破壞加碳酸鈣是為了防止葉綠體色素被破壞p加入加入CaCOCaCO3 3和

4、石英砂的量均很少，無水乙醇的量不應(yīng)太少和石英砂的量均很少，無水乙醇的量不應(yīng)太少四、實驗步驟色素的提取和分離實驗v制備濾紙條制備濾紙條：將干燥的定性濾紙剪成長與寬略小于試管將干燥的定性濾紙剪成長與寬略小于試管長與寬的濾紙條，將其一端剪去兩個角，并在距這一端長與寬的濾紙條，將其一端剪去兩個角，并在距這一端1cm1cm處用鉛筆劃線。處用鉛筆劃線。v畫濾液細(xì)線畫濾液細(xì)線：用毛細(xì)吸管吸取少量濾液，用毛細(xì)吸管吸取少量濾液，沿鉛筆線均勻沿鉛筆線均勻畫出細(xì)線畫出細(xì)線（細(xì)而齊）（細(xì)而齊）。待濾液干后，。待濾液干后，重復(fù)畫線重復(fù)畫線3-43-4次。次?！咀⒆ⅰ縫畫濾液線時盡量畫直、畫細(xì)、畫濃畫濾液線時盡量畫直、畫

5、細(xì)、畫濃p每次畫完，要等濾液干時再重復(fù)畫，以防濾液擴(kuò)散開使濾液線過每次畫完，要等濾液干時再重復(fù)畫，以防濾液擴(kuò)散開使濾液線過寬，影響結(jié)果寬，影響結(jié)果分離葉綠體色素四、實驗步驟色素的提取和分離實驗v固定裝置：固定裝置：將將3 3mLmL層析液倒入試管中，將畫好線的濾層析液倒入試管中，將畫好線的濾紙條紙條插入層析液中插入層析液中，用棉，用棉塞塞塞緊試管口塞緊試管口。v觀察現(xiàn)象：觀察現(xiàn)象：10min10min后，將濾紙條取出，風(fēng)干。觀察色素后，將濾紙條取出，風(fēng)干。觀察色素帶及其顏色，作好記錄。帶及其顏色，作好記錄。【注注】p放濾液條時，要避免放濾液條時，要避免濾液細(xì)線濾液細(xì)線浸沒到浸沒到層析液。不要讓

6、濾紙條貼在層析管層析液。不要讓濾紙條貼在層析管壁上。壁上。p層析液中一些成分易揮發(fā)，要避免開放在空氣中。層析液中一些成分易揮發(fā)，要避免開放在空氣中。分離葉綠體色素四、實驗步驟1 1、選材時應(yīng)注意選擇鮮嫩、色濃綠、無漿汁的菠菜葉片。、選材時應(yīng)注意選擇鮮嫩、色濃綠、無漿汁的菠菜葉片。2 2、研磨要快，收集的濾液要用棉塞塞住，層析時要加蓋，、研磨要快，收集的濾液要用棉塞塞住，層析時要加蓋，盡量減少有機(jī)溶劑的揮發(fā)。（無水乙醇和層析液都易盡量減少有機(jī)溶劑的揮發(fā)。（無水乙醇和層析液都易揮發(fā)、易燃且有一定毒性）揮發(fā)、易燃且有一定毒性）3 3、每次點樣前要把燒杯中的濾液搖勻。、每次點樣前要把燒杯中的濾液搖勻。

7、4 4、盡量避免手上的雜質(zhì)沾到濾紙條上。、盡量避免手上的雜質(zhì)沾到濾紙條上。5 5、實驗時保持通風(fēng)，安全操作、實驗時保持通風(fēng)，安全操作6 6、實驗注重團(tuán)隊合作，組員們共同完成實驗。、實驗注重團(tuán)隊合作，組員們共同完成實驗。五、注意事項色素的提取和分離實驗六、實驗結(jié)果葉綠素的提取與分離七、實驗總結(jié)最寬（最多）：葉綠素最寬（最多）：葉綠素a最窄（最少）：胡蘿卜素最窄（最少）：胡蘿卜素相鄰距離最近：葉綠素相鄰距離最近：葉綠素a和葉綠素和葉綠素b色素在濾紙上自上而下分布依次為：胡色素在濾紙上自上而下分布依次為：胡蘿卜素蘿卜素葉黃素葉黃素葉綠素葉綠素a 葉綠素葉綠素b 葉綠體中的色素能夠在濾紙上彼此分離的原

8、因是（ ）A色素提取液中色素已經(jīng)分層B陽光的照射使不同色素彼此分開C乙醇有使色素溶解并彼此分離的特性D各種色素在濾紙上隨層析液擴(kuò)散的速度不同 加SiO2、加CaCO3的目的分別是 ：研磨研磨充分；保護(hù)葉綠素充分；保護(hù)葉綠素。 為什么濾液細(xì)線越細(xì)、越齊越好？防止色素帶之間部分重疊。防止色素帶之間部分重疊。 為什么層析液不能沒及濾紙條的濾液細(xì)線？ 防止色素溶解在層析液中，影響實驗結(jié)果。防止色素溶解在層析液中，影響實驗結(jié)果。八、課堂反饋D聚焦高考（2012上海理綜17）圖6表示葉綠體色素提取分離實驗中紙層析的結(jié)果，據(jù)圖判斷用作實驗材料的葉片顏色為（ ） A紅色 B黃色 C綠色 D紫色B聚焦高考（2011江蘇生物4）某研究組獲得了水稻的葉黃素缺失突變體。將其葉片進(jìn)行了紅光照射光吸收測定和色素層析條帶分析（從上至下），與正常葉片相比，實驗結(jié)果是（ ） A.光吸收差異顯著，色素帶缺第2條 B.光吸收差異不顯著，色素帶缺第2條 C.光吸收差異顯著，色素帶缺第3條 D.光吸收差異不顯著，色素帶缺第3條B （1）二氧化硅（SiO2） 使研