不規(guī)則抗體篩選和鑒定標準操作規(guī)程

1、不規(guī)則抗體篩選和鑒定標準操作規(guī)程1. 檢驗?zāi)康牟灰?guī)則抗體篩選和鑒定可在交叉配合之前進行或一起進行， 這樣有利于患者抗 體的早期確認及鑒定， 發(fā)現(xiàn)臨床上有意義的抗體， 避免一些可能的情況而造成 病情的延誤。2. 檢驗方法 分鹽水介質(zhì)法、抗球蛋白法和微柱凝膠法。3. 檢驗原理讓待檢者的血清與已知血型的試劑紅細胞即篩選紅細胞（I、U、川套）起反 應(yīng)，以發(fā)現(xiàn)在37C中有反應(yīng)活性的抗體。這種抗體可引起新生兒溶血病、溶 血性輸血反應(yīng)、 或使輸入的紅細胞存活期縮短等。 當不規(guī)則抗體篩選試驗陽性 后，再進行不規(guī)則抗體鑒定，即利用譜紅細胞（ 11 套鑒定細胞）與待檢者的 血清反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)結(jié)果判斷機體所產(chǎn)生的同

2、種抗體類別。4. 標本要求受檢者不抗凝靜脈血 4.0ml ，分離血清， 48 小時內(nèi)使用5. 試劑5.1. 篩選紅細胞：由2或3人份的0型紅細胞組成為一套試劑，每套試劑篩選紅細胞中至少有以下常見的抗原：D、C、E、c、e、M、N、S、s、P、Lea、Leb、K、k、Fya、Fyb、Jka、Jkb等。每次用3套試劑（I、U、川）進行抗 體篩選，見表 1005-1 。5.2. 鑒定譜細胞：除包括常見的抗原以外還有：Cw、 Kpa、 Kpb、 Jsa、 Jsb、 Lua、Lub、Xr/mina等。每次用11套試劑進行抗體鑒定，見表1005-2。5.3. 抗球蛋白試劑：多特異性抗球蛋白血清（ IgG、

3、 C3d）。5.4. 致敏紅細胞（質(zhì)控細胞） 。5.5.0.9% 生理鹽水。5.6. Coombs微柱凝膠卡。6. 器材試管、吸管、37 E水浴箱、臺式離心機、濾紙、微量加樣器等。7. 操作程序7.1. 鹽水介質(zhì)法7.1.1 .取受檢者血清2滴于標記有I、U、川的3支小試管中。7.1.2 .對應(yīng)加入I、U、川套2%-5%$選紅細胞生理鹽水懸液1滴，37C 孵育30分鐘。7.1.3.以3000r/min離心10秒，觀察凝集和溶血情況，并記錄反應(yīng)情況于 表1005-1中。如果抗體篩選試驗陽性，繼續(xù)做以下試驗。表1005-1 紅細胞血型篩選細胞反應(yīng)格局表序號血型系Rh-hrKellDuffyKill

4、LewisPMNSsLuth基因DCEceKkFyaFybJkaJkbLeaLebP1MNSsLuaLubIR1R1+00+00+0+0+0+nR2R2+0+00+00+0+00+R1r1+0+0+0+00+0+00+0+試驗結(jié)果（鹽水法、抗球蛋白法、微柱凝膠法）IR1R1nR2R2R1r1注：+為陽性；0為陰性7.1.4再取受檢者血清2滴于標記有111的11支小試管中。7.1.5.在11支小試管中分別加入11套2%5您定譜細胞生理鹽水懸液1滴,37C孵育30分鐘。7.1.6.以3000r/min離心10秒，觀察凝集和溶血情況，并將反應(yīng)情況記錄于表1005-2中表1005-2 紅細胞血型譜細胞

5、反應(yīng)格局表序號血型系Rh-hrKellDuffyKillLewisPMNSsLuth基因DCEceKkFya匸bFyJkaJkbLea1 b LeP1MNSsLuaLub1RwR+00+0+0+0+0+2RiR+00+0+00+0+0+0+3R?R?+0+00+0+00+0+00+4r' r0+0+00+00+5r" r00+0+0+00+0+0+6r r000+0+00+0+0+0+0+7r r000+0+0+0+0+0+0+0+8R)r+00+0+00+00+0+0+9r r000+0+00+0+00+10r r000+0+0+0+00+0+11r r000+0+0+0+

6、00+結(jié)果（鹽水法、抗球蛋白法、微柱凝膠法）1wRi R2R1R3詠4r' r5r" r6r r7r r8Rr9r r10r r11r r注：+為陽性；0為陰性；W為弱陽性7.2抗球蛋白法721.如果鹽水法（1）（3）抗體篩選試驗陰性，繼續(xù)做以下試驗。7.2.2. 再振搖試管，使管底紅細胞重新懸浮，用生理鹽水洗滌3次。7.2.3. 最后一次洗滌后，棄去全部鹽水，將試管邊緣鹽水用濾紙吸干。7.2.4. 立即加入多特異性抗球蛋白血清1滴，混勻。7.2.5以3000r/min離心10秒，輕輕懸浮細胞，肉眼觀察凝集和溶血情況, 并用顯微鏡確證，記錄結(jié)果于表1005-1中。7.2.6.

7、 如果抗體篩選試驗陽性，再取受檢者血清2滴于標記有111的11支小試管中。727.在11支小試管中分別加入11套鑒定譜細胞懸液1滴和多特異性抗球 蛋白血清1滴，37C孵育30分鐘。7.2.8.以3000r/min離心10秒，觀察凝集和溶血情況，并將反應(yīng)情況記錄于表 1005-2 中。7.3. 微柱凝膠法（強生卡）7.3.1. 在CoombS微柱凝膠卡上標記I、U、川，分別加入I、U、川套篩選 紅細胞40卩1和被檢血清40卩I。7.3.2. 將CoombS微柱凝膠卡置于微柱凝膠孵育器內(nèi)，孵育15分鐘。7.3.3. 取出微柱凝膠卡觀察結(jié)果，并記錄于表 1005-1中。7.3.4. 如果抗體篩選試驗

8、陽性，將11套鑒定譜細胞對應(yīng)加入標記有111 的微柱凝膠卡中各40卩I。7.3.5. 然后，再各加入被檢血清40卩I。7.3.6. 重復(fù)操作7.3.2.和7.3.3，觀察結(jié)果，并記錄于表 1005-2中。8. 結(jié)果判斷8.1. 必須記錄觀察到的每個細胞樣本的凝集強度或溶血現(xiàn)象。鹽水法和抗球蛋白法以土+ + + +為陽性凝集結(jié)果； 微柱凝膠法中抗原抗 體復(fù)合物浮在微柱凝膠卡表面或膠中， 為陽性反應(yīng)；沉于尖底部為陰性反應(yīng)，見 圖 1005-1。溶血 濬血 混合（完全）（不完全）凝集圖1005-1微柱凝膠法結(jié)果判斷8.2. 抗球蛋白法陰性無凝集，應(yīng)加入致敏紅細胞（質(zhì)控細胞）1滴，混勻后以1000r/

9、min離心15秒，觀察結(jié)果，若凝集表示試驗結(jié)果為陰性；若不凝集，表示抗球蛋白血清可能失效，試驗無意義8.3. 鹽水法和抗球蛋白法判斷溶血和凝集的終點必須準確和前后一致， 如果溶 血和凝集都存在， 離心后要立即觀察上清液的情況， 然后輕輕地把細胞搖散 以觀察凝集。8.4. 紅細胞血型篩選細胞和譜細胞反應(yīng)格局見表 1005-1 和 1005-2 。9. 注意事項9.1. 每種試驗必須做自身對照， 即待檢者自身血清和自身紅細胞反應(yīng)， 無凝集 則試驗有效；若有凝集則提示存在自身免疫抗體。9.2. 抗體篩選陽性后， 要用生理鹽水洗滌紅細胞 3 次，離心后再觀察結(jié)果， 避 免假陽性反應(yīng)。9.3. 根據(jù)反應(yīng)凝集強度土+ + + +記為陽性結(jié)果，表示待檢者血清中有不規(guī)則抗體， 結(jié)合譜細胞反應(yīng)格局， 確定抗體特性； 無凝集表示待檢者