血細(xì)胞形態(tài)學(xué)采樣、制片染色與檢查要求：

1、白細(xì)胞是無色有核的血細(xì)胞，在血液中一般呈球形，根據(jù)形態(tài)差異 可分為顆粒和無顆粒兩大類。顆粒白細(xì)胞（粒細(xì)胞）中含有特殊染色 顆粒，用瑞氏染料染色可分辨出三種顆粒白細(xì)胞即嗜中性粒細(xì)胞、嗜 酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞；無顆粒白細(xì)胞包括單核細(xì)胞和淋巴細(xì) 胞。人體內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)和種類白細(xì)胞的百分比是相對穩(wěn)定的。正常人每立 方毫米的血液時白細(xì)胞為止500010000個。各種白細(xì)胞的百分比 為：中性粒細(xì)胞5070%；嗜酸性粒細(xì)胞14%；嗜好堿性粒細(xì)胞 01%；淋巴細(xì)胞2040%；單核細(xì)胞為17%。機(jī)體發(fā)生炎癥或 其他疾病都可引起口細(xì)胞總數(shù)及各種口細(xì)胞的百分比發(fā)生變化，因此 檢查白細(xì)胞總數(shù)及白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)成為輔助

2、診斷的一種重要方法。血細(xì)胞形態(tài)學(xué)采樣、制片染色與檢查要求：（一）采樣、制片及染色，三道工序至關(guān)重要：是細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查的 成敗關(guān)鍵。要得到合格的涂片標(biāo)本，做好上述工序，應(yīng)注意以下要求:米樣、制片：玻片耍求：國內(nèi)10mmx 26mmx 76mm±0. 5,美國nccls規(guī)定10mmx 25mmx75mm±0.5,要嚴(yán)格清潔，接近中性.推片：選擇優(yōu)質(zhì)推片，推片兩端邊緣整齊、平滑。也可選用有機(jī)玻璃, 其大小、厚度與坡片相同，兩端之邊緣應(yīng)加工光滑，以利推片用。采外周血（樣），擦去第一滴血，迅速采血，量適中，如綠豆粒大小, 具有一定推片技術(shù)，推片傾斜45° ±,推成

3、血膜長度25mm35mm,寬度1820mm,血膜四周留有空隙區(qū)，血膜終尾離玻片終端至少lomm, 血膜均勻，薄如蟬翼，尾端形如弧狀，迅速扇（搖）干，血膜具有頭、 體、尾不同厚薄區(qū)域。此外，涂片時，還要考慮患者的血液狀態(tài)，如 貧血程度、血液粘稠度、wbc或有核細(xì)胞多少等因素，調(diào)整推片技巧。2. 涂片染色：是識別細(xì)胞形態(tài)的重要標(biāo)記工序：（1）常規(guī)瑞氏-姬姆薩染色要點(diǎn)：要得到滿意、漂亮的血細(xì)胞涂片染色標(biāo)本，新鮮涂片迅速染色是很重 要的。染色液配制要合格；涂片切勿用甲醛固定，否則不著色；染色的好壞與染色液、緩沖液的質(zhì)量及比例、加液間隔時間、保持玻 片染色液面的張力等染色技巧均有重大關(guān)系。染液要覆蓋涂膜

4、面，再 加緩沖液（1:2）,其量要充足、混均，染色時間要30分鐘以上。（2）細(xì)胞著色的觀察：當(dāng)染液與緩沖液混合后，甲醛吸水液溫升高，發(fā)生劇烈反應(yīng)，直至液 膜表面的“染色?！背示鶆蚍植?，隨染色時間的推延，“染色?！庇伞叭旧×！本奂伞叭旧罅！保饾u由外緣向內(nèi)緣推進(jìn)至染色面 中心（此過程需要20-30分鐘以上），則表明細(xì)胞著色已完成， 再用自來水緩流沖洗，使染色液沉渣及染色粒浮去，使其充分起分色 作用，去除細(xì)胞染色中浮色，顯示出胞核結(jié)構(gòu)及細(xì)胞清晰形態(tài)，待干, 鏡檢。wbc形態(tài)學(xué)診斷技巧：1wbc數(shù)值準(zhǔn)確性估計(jì)：(1) 目前自動化計(jì)數(shù)儀時有出現(xiàn)結(jié)果的偏差，低倍鏡觀察血涂片可 以粗略估計(jì)wbc數(shù)值

5、及分布。低倍視野wbc數(shù)：正常約35個，增多6 個以上，減低3個以下。(2) wbc如推至片尾，分布不均，估計(jì)將有一定難度。較大的細(xì)胞如 單核、異淋及中性粒細(xì)胞及不成熟細(xì)胞多在片尾，體部則多為較小的 淋巴細(xì)胞，使分類造成偏差，所以分類部位在適當(dāng)調(diào)整。2.白細(xì)胞計(jì)數(shù)值限度分級：(1) wbc正常范圍:4. 010. 0x107l;(2) wbc正常限度以下：輕度減少 «4.03.0x107l),中度減少 «3.02.0x107d,極度減少«2.0x109/l);(3) wbc正常高限度以上：分輕度增多(>10. 020. 0x 107l),中度增多(>2

6、0. 040. 0 x 107l),明顯增多(>40. 0-80. 0 x 109/l)極度增多(>80.0x107l)o以此與所測知wbc計(jì)數(shù)值作粗略對比，推斷wbc計(jì)數(shù)值的準(zhǔn)確性。(4) 如在血片分類計(jì)數(shù)過程中發(fā)現(xiàn)較多有核紅細(xì)胞時，計(jì)出血片中有核紅所占%率，即以校正原wbc計(jì)數(shù)值減去有核紅所占 比例，求出外周血中wbc總數(shù)值，另作wbc分類計(jì)100個過程中遇到多少有核紅細(xì)胞，即有核紅細(xì)胞 個/100個wbc,或作血片有核細(xì)胞分類計(jì)數(shù)(包括有核紅細(xì)胞)，計(jì)出有核紅細(xì)胞 所占%率。3. wbc分類正常范圍及其病理性改變：(1) wbc分類正常范圍:新牛兒出牛后最初24小吋口細(xì)胞數(shù)高

7、，主要為中性粒細(xì)胞，至第34周，中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比例倒轉(zhuǎn)，直至4歲淋巴細(xì)胞比例仍 多。見表一表1 正常成人白細(xì)胞分類范圍：%有絕對值/ 109 l中性粒細(xì)胞40752.87. 5x109淋巴細(xì)胞20 501.53. 5x109單核細(xì)胞2 100. 20. 8x109嗜酸性粒細(xì)胞1 60. 040. 4x109嗜堿性粒細(xì)胞<10. 0150. 1x109病理性形態(tài)學(xué)改變：%1 中性粒細(xì)胞中性粒細(xì)胞分葉分化程度，核僅一葉或二葉，其百分率增加時謂之“左移”，反之，多數(shù)細(xì)胞四葉以上謂之右移，一般認(rèn)為正常中性粒細(xì)胞胞核分葉情況：-2葉者為2040%1葉者為 5%>5葉以上者提示有巨幼細(xì)胞

8、性貧血的可能。右移現(xiàn)象：-多見于巨幼細(xì)胞性貧血、肝臟疾患，并可以5葉與4葉所 占比例計(jì)算，得出簡單實(shí)用的分葉指數(shù)：分葉指數(shù)二5葉/4葉x 100%正常核分葉指數(shù)：0-17%-還見于缺鐵性貧血、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、遺傳性高分葉癥（顯性遺 傳）及某些敗血癥（以左移多見）。左移現(xiàn)象-見于感染、敗血癥、出血、小兒慢性中性粒細(xì)胞減少癥等。 中性粒細(xì)胞毒性顆粒及空泡改變：中性粒細(xì)胞市于受到外來刺激（包 括感染及應(yīng)激反應(yīng)）引起顆粒變性，粗大著色深染及漿內(nèi)空泡等病理 性改變。上述改變及白細(xì)胞數(shù)增多和出現(xiàn)幼稚及原始細(xì)胞則為類白血 病反應(yīng)。慢性粒細(xì)胞白血?。╟gl）的中性成熟粒細(xì)胞一般胞漿顆粒較正常稀 少，但無空泡及

9、毒性顆粒，而慢性中性粒細(xì)胞口血?。╟nl）的中性 成熟粒細(xì)胞則與類口血病反應(yīng)形態(tài)相似。假性嗜酸性顆粒形態(tài)異常：類似嗜酸性樣顆粒的出現(xiàn)。-在某些干細(xì) 胞疾病如mds、粒細(xì)胞缺乏癥、腎性貧血某些患者中性粒細(xì)胞的顆粒 增多遺傳性白細(xì)胞異常疾?。菏窍忍煨园准?xì)胞異常疾病，臨床上雖罕見， 但為了提高辨別的能力，應(yīng)有所認(rèn)識。%1 嗜酸性粒細(xì)胞：此種細(xì)胞在人體每日規(guī)律性變動，晨至午下降， 午后始升，午夜至次晨3時達(dá)高峰數(shù)值，哮喘患者及夜間工作者其規(guī) 律與正常相反，晨9至12時達(dá)高峰。臨床上嗜酸性粒細(xì)胞增多見：過敏性疾病、寄生蟲病、皮膚病、與 化學(xué)藥物有關(guān)等。%1 嗜堿性粒細(xì)胞：在正常人血液中為數(shù)其少，該細(xì)胞嗜

10、堿性顆粒含大量組織胺及肝素類 物質(zhì)，臨床上主要因骨髓增殖性疾病常伴嗜堿性粒細(xì)胞增多如cgl、cgl嗜堿 變、嗜堿性粒細(xì)胞白血病、mae。、真性紅細(xì)胞增多癥、骨髓纖維化、 何杰金淋巴瘤、溶血性貧血、腫瘤等，還可見于感染恢復(fù)期、甲狀 腺功能低下肝硬化、結(jié)核病、流感、以及月經(jīng)初潮等.%1 淋巴細(xì)胞：淋巴細(xì)胞為免疫反應(yīng)細(xì)胞，來源于骨髓淋巴干細(xì)胞，經(jīng)胸腺素作用分 化為t淋巴細(xì)胞，參與細(xì)胞免疫，另一類經(jīng)骨髓而成為b淋巴細(xì)胞，產(chǎn) 生免疫球蛋白，可作為體液免疫。外周血內(nèi)淋巴細(xì)胞可分為大、中、小淋巴細(xì)胞，其形態(tài)一般不難辯認(rèn)。 在臨床由于各種因素刺激出現(xiàn)異常淋巴細(xì)胞，常出現(xiàn)于病毒感染性疾 病，如傳染性單核細(xì)胞增多癥、傳染性淋巴細(xì)胞增多癥，傳染性肝炎、 水痘、風(fēng)疹、流感、結(jié)核病、藥物過敏、慢性感染、放射病、應(yīng)激狀 態(tài)及免疫異常等。異常淋巴細(xì)胞其胞體增大，比正常淋巴大一倍以上，核染色質(zhì)疏松、 增多，胞漿豐富或不規(guī)則、有很強(qiáng)嗜堿性呈深蘭色、不均勻不透明或 有泡沫或深蘭色、周邊著色加深，可見嗜天青紅顆粒或空泡。%1 單核細(xì)胞：1是血中吞噬性細(xì)胞，參與免疫作用，在新生兒岀生后一