定性測定的性能驗(yàn)證復(fù)習(xí)過程

1、定性測定的性能驗(yàn)證臨床定性檢驗(yàn)的報(bào)告方式臨床定性檢驗(yàn)的報(bào)告方式l有反應(yīng)、無反應(yīng)、陽性、陰性l是、不是（或有、沒有）性能驗(yàn)證的合格標(biāo)準(zhǔn)從何而來？性能驗(yàn)證的合格標(biāo)準(zhǔn)從何而來？l試劑盒說明書l國際和或國際標(biāo)準(zhǔn)什么時候進(jìn)行性能驗(yàn)證什么時候進(jìn)行性能驗(yàn)證l使用新的檢測試劑或系統(tǒng)時l更換檢測試劑或系統(tǒng)時臨床實(shí)驗(yàn)室為什么更新檢測試劑或臨床實(shí)驗(yàn)室為什么更新檢測試劑或系統(tǒng)系統(tǒng)？新的試劑或系統(tǒng)新的試劑或系統(tǒng)l更易于操作l更高的檢測性能l更經(jīng)濟(jì)l更能滿足實(shí)驗(yàn)室測定要求性能驗(yàn)證前的準(zhǔn)備性能驗(yàn)證前的準(zhǔn)備l應(yīng)熟悉待驗(yàn)證的試劑或系統(tǒng)l進(jìn)行必要的培訓(xùn)，包括樣本的處理和儲存、試劑的處理和儲存、合理的檢測方案、對結(jié)果合理的解釋以及

2、系統(tǒng)的質(zhì)量控制等。l制定質(zhì)量保證計(jì)劃l確定患者樣本的數(shù)量及強(qiáng)弱（評價(jià)重復(fù)性）l確定比較的方法CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline編制性能驗(yàn)證的編制性能驗(yàn)證的SOP定定 義義l篩查試驗(yàn)篩查試驗(yàn)：臨床上，篩查方法通常用于檢測整個人群（或者人群中的特定部分）中特定指標(biāo)的情況。例如對樣本做糞便隱血檢測或者性病研究實(shí)驗(yàn)室（VDRL）梅毒血清學(xué)試驗(yàn)。一般來說，這些用于篩查的定性試驗(yàn)必須具有高敏感性以確保真陽性結(jié)果的檢出。因此通常篩查試驗(yàn)比診斷試驗(yàn)或確認(rèn)試驗(yàn)會

3、產(chǎn)生更多的假陽性結(jié)果。如果篩查試驗(yàn)的假陽性結(jié)果所造成的社會及經(jīng)濟(jì)后果不是非常嚴(yán)重，這種低特異性可通過特異性較好的確認(rèn)試驗(yàn)加以彌補(bǔ)。 盡管陽性篩查試驗(yàn)結(jié)果需要確認(rèn)試驗(yàn)來進(jìn)一步證實(shí)，但是這依然要優(yōu)于假陰性篩查試驗(yàn)結(jié)果的出現(xiàn)。因?yàn)榧訇幮越Y(jié)果會造成更嚴(yán)重的后果，例如疾病通過已感染的血液傳播或者延誤了對于可治愈的嚴(yán)重疾病的治療。CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline定定 義義l診斷試驗(yàn)診斷試驗(yàn)：通常用于臨床懷疑某種特定疾病或狀況是否存在的診斷性定性試驗(yàn)。例如

4、各種微生物培養(yǎng)就是用于檢查感染情況的診斷試驗(yàn)。因臨床上對治療的及時的要求，診斷試驗(yàn)應(yīng)具有很好的敏感性和特異性。如果診斷試驗(yàn)后還進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，那么診斷試驗(yàn)的特異性要求可以稍微降低。CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline定定 義義l確認(rèn)試驗(yàn)確認(rèn)試驗(yàn)：確認(rèn)試驗(yàn)用于驗(yàn)證篩查試驗(yàn)或者診斷試驗(yàn)結(jié)果。如果確診試驗(yàn)證實(shí)了之前的檢測結(jié)果，臨床醫(yī)生即可作出診斷。確認(rèn)試驗(yàn)通過設(shè)計(jì)使其具有較高的特異性（有時甚至以犧牲敏感性為代價(jià)）以及高陽性預(yù)測值。螺旋體抗體熒光吸附（FT

5、A-ABS）梅毒血清學(xué)試驗(yàn)就是一種用于VDRL梅毒血清學(xué)試驗(yàn)等篩查試驗(yàn)之后的確認(rèn)試驗(yàn)。定 義l臨床敏感性臨床敏感性：在患有明確臨床疾病的患者中，其檢測結(jié)果呈陽性或者超過正常值范圍的比率 （即出現(xiàn)陽性結(jié)果和確定患者患?。蛔ⅲ涸撆R床疾病必須由不依賴于被評價(jià)試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)確定。l臨床特異性臨床特異性：在沒有特定臨床疾病的患者中，其檢測結(jié)果呈陰性或者在正常值范圍內(nèi)的比率。定 義l陽性測定能力指數(shù)（陽性測定能力指數(shù)（DI（）：（）：可定義為一實(shí)驗(yàn)對陽性標(biāo)本測定后給出陽性結(jié)果的能力（通常稱為“敏感性”）； DI（）=真陽性/（真陽性+假陰性）100% l陰性測定能力指數(shù)（陰性測定能力指數(shù)（DI（）：（）：則

6、為對陰性樣本測定給出陰性結(jié)果的能力（通常稱為“特異性”）； DI（）= 真陰性/（真陰性+假陽性）100% 定 義l陽性結(jié)果的可靠性（陽性結(jié)果的可靠性（預(yù)示值預(yù)示值）：）：即測定為陽性的標(biāo)本實(shí)際上為陽性的可能性。 =真陽性/（真陽性+假陽性）100%l陰性結(jié)果的可靠性陰性結(jié)果的可靠性:則為一份給出陰性結(jié)果的樣本實(shí)際上為陰性的可靠性。 = 真陰性/（真陰性+假陰性）100%“預(yù)示值預(yù)示值”對臨床檢驗(yàn)結(jié)果影響對臨床檢驗(yàn)結(jié)果影響預(yù)示值對一個有預(yù)示值對一個有95%敏感性和敏感性和95%特異性的特異性的試劑檢測結(jié)果的影響（試劑檢測結(jié)果的影響（100,000人）人） 結(jié)結(jié) 果果 10%感染率感染率 1%感

7、染率感染率 檢出 (+)未檢出 () 檢出(+)未檢出() + 9,500 500 950 50 4,500 85,500 4,950 94,050敏感性(TP/TP+FN) 95% 95%特異性(TN/TN+FP) 95% 95%陽性預(yù)示值TP/TP+FP 9500/9500+4500=67.9%950/950+4950=16%陽性預(yù)示值TN/TN+FN85500/85500+500=99.4%94050/94050+50=99.9%樣本的準(zhǔn)備樣本的準(zhǔn)備l質(zhì)控品：使用商品化質(zhì)控物進(jìn)行，包括陰性和陽性。l樣本的采集和保存：采集時間、保存方式等必須保證一致性。CLSI EP12-A2 User

8、Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline重復(fù)性驗(yàn)證重復(fù)性驗(yàn)證lCUT-OFF的重復(fù)性（同時包含測定下限的驗(yàn)證）l批內(nèi)變異的驗(yàn)證l批間變異的驗(yàn)證重復(fù)性驗(yàn)證的質(zhì)量控制重復(fù)性驗(yàn)證的質(zhì)量控制l質(zhì)控品：如方法學(xué)比較在10天內(nèi)完成，則每一批次都要對每份質(zhì)控樣本進(jìn)行檢測，共提供20次重復(fù)檢測結(jié)果。如果方法比較研究超過20天，則每一批次都要對每份對照樣本進(jìn)行單次檢測，總計(jì)也提供20次重復(fù)結(jié)果。 如出現(xiàn)失控，則當(dāng)次檢測結(jié)果無效。在當(dāng)天或第二天安排新批次的檢測以替換不合格的批次。實(shí)驗(yàn)室要分析失控的原因。不

9、合格批次在10天內(nèi)不應(yīng)超過1次或20天內(nèi)不超過兩次。如若超出，所在實(shí)驗(yàn)室應(yīng)中止檢測工作并咨詢試劑制造商以確定原因并采取糾正措施。CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline重復(fù)性驗(yàn)證：樣本濃度重復(fù)性驗(yàn)證：樣本濃度lCUT-OFF重復(fù)性驗(yàn)證：重復(fù)性驗(yàn)證：樣本濃度應(yīng)接近臨界值臨界值。不宜用陰性或強(qiáng)陽性樣本。l批內(nèi)和批間變異驗(yàn)證：高、中和低三個濃度（與試劑盒說明書中所述相適應(yīng)）CUT-OFF重復(fù)性和重復(fù)性和測定下限驗(yàn)證測定下限驗(yàn)證臨界點(diǎn)臨界點(diǎn)的定義的定義l同樣

10、一份樣本，在多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)中各有50%的幾率獲得陽性或陰性的結(jié)果時該分析物的濃度。CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline臨界點(diǎn)（臨界點(diǎn)（CUT-OFF)與試劑盒陽性反與試劑盒陽性反應(yīng)判斷值（應(yīng)判斷值（CUT-OFF值）的區(qū)別值）的區(qū)別l這里的臨界點(diǎn)指的是一個處于試劑檢測臨界點(diǎn)的樣本濃度，其一旦確定，是不變的。l試劑盒CUT-OFF值指的是一個判斷某一次測定結(jié)果的由陰性和陽性對照信號值按一定公式計(jì)算出來的信號值，每次測定都會有所差異。如何獲得系統(tǒng)或試劑

11、的如何獲得系統(tǒng)或試劑的“臨界點(diǎn)臨界點(diǎn)”l檢測試劑或系統(tǒng)的說明書可能會注明分析物的臨界濃度。l如果臨界濃度未知，則可以將陽性樣本進(jìn)行一系列稀釋，然后將他們進(jìn)行重復(fù)檢測以確定能夠獲得50%陽性和50%陰性結(jié)果的那個稀釋度。這一稀釋度的分析物濃度即為臨界點(diǎn)。CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline臨界點(diǎn)（臨界點(diǎn)（CUT-OFF）的）的(精密度）精密度）重復(fù)性指的是什么？重復(fù)性指的是什么？l是為正在評價(jià)的檢測試劑或系統(tǒng)建立分析物的臨界濃度(C50)，并且確保

12、臨界濃度20%的范圍處于95%區(qū)間內(nèi)(C95)。CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline0%10%20%30%40%50%60%70%80%90%100%C5 C50C95 A ctual ConcentrationPercent Positive Results100%90%80%70%60%50%40%30%20%10%0%Percent Negative ResultsClaimedCutoff不精密度曲線不精密度曲線兩種不同方法的不精密度曲線

13、比較兩種不同方法的不精密度曲線比較0%10%20%30%40%50%60%70%80%90%100%C25 C15 C295 C195 Actual ConcentrationPercent Positive Results驗(yàn)證步驟驗(yàn)證步驟l制備足夠40次重復(fù)檢測的3份樣本：分別為處于臨界濃度、高于臨界濃度20%和低于臨界濃度20%的樣本。l重復(fù)檢測樣本40次，確定每一份樣本結(jié)果為陽性和陰性的百分比。l評價(jià)臨界濃度是否準(zhǔn)確？評價(jià)+20至-20%的濃度范圍是否包含于、位于或者超出這種方法的95%區(qū)間？CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qua

14、litative Test Performance; Approved GuidelineC50是否準(zhǔn)確？是否準(zhǔn)確？ 40次測試 C501陽性結(jié)果=27/40(67.5%)2陽性結(jié)果（14-26）/40（35%-65%）正確陽性結(jié)果重復(fù)性檢測總次數(shù)次數(shù)百分比真正百分比樣本的實(shí)際濃度201050%30%-70%C30-C70402050%35%-65%1005050%40%-60%不同不同C50重復(fù)檢測次數(shù)與檢重復(fù)檢測次數(shù)與檢出陽性數(shù)的關(guān)系出陽性數(shù)的關(guān)系候選方法的候選方法的-20%+20%濃度范濃度范圍是否包含了圍是否包含了C5-C95區(qū)間？區(qū)間？1 +20% 陽性結(jié)果=35/40(87.5%)

15、-20%+20%濃度范圍在C5-C95區(qū)間之內(nèi)用該方法檢測濃度超過C50+20%的樣本檢測結(jié)果不一致-20% 陰性結(jié)果=36/40(90%) -20%+20%濃度范圍包含了C5-C95區(qū)間用該方法檢測，C50+20%的樣本檢測結(jié)果一致-20% 陰性結(jié)果=36/40(90%) 3 +20% 陽性結(jié)果=36/40(90%)-20%+20%濃度范圍只是部分地在C5-C95區(qū)間內(nèi)。（+20%包含了C5-C95區(qū)間，但-20%濃度的樣本在C5-C95區(qū)間內(nèi)。）用該方法檢測，C50+20%的樣本檢測結(jié)果一致。濃度-20%的樣本用該方法卻不一定能得到一致結(jié)果。-20% 陰性結(jié)果=35/40(87.5%)4

16、+20% 陽性結(jié)果=36/40(90%)批內(nèi)重復(fù)性的驗(yàn)證批內(nèi)重復(fù)性的驗(yàn)證l高、中、低三個濃度的樣本，在一批檢測內(nèi)，重復(fù)檢測20次（孔），計(jì)算所得S/CO值的均值和SD，計(jì)算批內(nèi)CV%。l判斷結(jié)論：應(yīng)試劑說明書所標(biāo)明的批內(nèi)變異。ELISA的批內(nèi)變異CV%應(yīng)10%。批間重復(fù)性的驗(yàn)證批間重復(fù)性的驗(yàn)證l高、中、低三個濃度的樣本，在10天以上時間內(nèi)單次（孔或管）重復(fù)進(jìn)行20批檢測，計(jì)算所得S/CO值的均值和SD，計(jì)算批間CV%。l判斷結(jié)論：應(yīng)試劑說明書所標(biāo)明的批間變異。 ELISA的批間變異CV%應(yīng)15%。測定下限的驗(yàn)證測定下限的驗(yàn)證l處于測定下限濃度（如臨界點(diǎn)濃度+20%）的樣本，重復(fù)檢測20次，應(yīng)至

17、少有18次以上為陽性反應(yīng)。特異性驗(yàn)證特異性驗(yàn)證l特定病原體以外感染性疾病患者的樣本。l含有干擾性物質(zhì)的樣本：類風(fēng)濕因子（RF）陽性、含異嗜性抗體、溶血、脂血、高膽紅素樣本。l結(jié)果判斷：非特定病原體感染患者樣本均應(yīng)為陰性。含一定濃度干擾物質(zhì)的樣本檢測應(yīng)為陰性。準(zhǔn)確性驗(yàn)證：方法比較準(zhǔn)確性驗(yàn)證：方法比較l另一種定性方法（如使用者目前正在使用的方法）l“金標(biāo)準(zhǔn)”方法l某種定量方法或臨床診斷。CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline準(zhǔn)確性驗(yàn)證用樣本的要求準(zhǔn)確性

18、驗(yàn)證用樣本的要求l量要足夠大l注意在一次獲得多組樣本時可能存在的偏差l穩(wěn)定l兩種方法同時進(jìn)行檢測CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline方法比較方法比較用樣本數(shù)量用樣本數(shù)量l取決于評價(jià)者的目的。作為最低要求，檢測要持續(xù)到至少用比較方法獲得50個陽性樣本。l并且至少用比較方法獲得50例陰性樣本以確定此種檢測方法的特異性。CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Perfo

19、rmance; Approved Guideline方法比較方法比較持續(xù)時間持續(xù)時間l1020天。CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline數(shù)據(jù)收集的檢查數(shù)據(jù)收集的檢查 l每次實(shí)驗(yàn)，應(yīng)立即記錄所有原始檢測數(shù)據(jù)并復(fù)核，以早期發(fā)現(xiàn)分析系統(tǒng)及人為誤差的來源。l一旦發(fā)現(xiàn)某些結(jié)果是由可解釋的誤差引起的，則應(yīng)將其記錄下來，同時，這些結(jié)果不能用于數(shù)據(jù)分析。l如不能確定誤差產(chǎn)生的原因，則保留原始結(jié)果。不一致結(jié)果的處理不一致結(jié)果的處理l如果比較方法不是100%準(zhǔn)確，可以

20、用“金標(biāo)準(zhǔn)”“參考方法”來檢測在檢測和比較方法間產(chǎn)生差異的樣本。CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline參考血清盤參考血清盤l曾經(jīng)被檢測過的、或者被成熟方法檢測的，或臨床診斷中有意義的臨床樣本對于評價(jià)定性方法來說很有價(jià)值。l陽性樣本濃度高低不等，具有代表性?？烧颊麄€血清盤樣本數(shù)的50%。l陰性樣本可含有干擾物質(zhì)?？烧颊麄€血清盤樣本數(shù)的50%。CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitativ

21、e Test Performance; Approved Guideline方法學(xué)比較的結(jié)果計(jì)算方法學(xué)比較的結(jié)果計(jì)算 比較用方法結(jié)果比較用方法結(jié)果 陽性 陰性 總數(shù)待評價(jià)方法結(jié)果 陽性 A B A + B 陰性 C D C + D 總數(shù) A + C B + DA+B+C+D敏感性=A/（A+C）100% 特異性=D/（D+B）100% 符合率=（A+D）/（A+B+C+D） 100% CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline準(zhǔn)確性驗(yàn)證的其他方面準(zhǔn)確性驗(yàn)證的其他方面l與臨床的“對話”。這也是一個新新的試劑或方法或系統(tǒng)替代舊舊的試劑或方法或系統(tǒng)成功應(yīng)用于臨床的前提。定性測定手工操作的人定性測定手工操作的人員比對：員比對：準(zhǔn)備準(zhǔn)備l人員操作及對