向文勝毛細(xì)管電泳

1、第十一章第十一章 毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電泳Capillary Electrophoresis 簡(jiǎn)寫(xiě)簡(jiǎn)寫(xiě) CE一什么叫毛細(xì)管電泳。一什么叫毛細(xì)管電泳。1什么叫電泳：什么叫電泳： 電泳是電解質(zhì)中帶電粒子在電場(chǎng)作用下，電泳是電解質(zhì)中帶電粒子在電場(chǎng)作用下，以不同的速度向電荷相反方向遷移的現(xiàn)象。利以不同的速度向電荷相反方向遷移的現(xiàn)象。利用這種現(xiàn)象對(duì)用這種現(xiàn)象對(duì)化學(xué)化學(xué)和和生物化學(xué)組分生物化學(xué)組分進(jìn)行分離的進(jìn)行分離的技術(shù)稱(chēng)之為電泳技術(shù)。技術(shù)稱(chēng)之為電泳技術(shù)。111 概述概述 電泳作為一種分離工具已有近百電泳作為一種分離工具已有近百年的歷史。年的歷史。1937年瑞典科學(xué)家年瑞典科學(xué)家Arne Ti- -seliu

2、s首次采用電泳分離技術(shù)從人的血首次采用電泳分離技術(shù)從人的血清中分離出白蛋白、清中分離出白蛋白、球蛋白、球蛋白、球蛋球蛋白和白和球蛋白。由此而成為球蛋白。由此而成為1948年諾貝年諾貝爾獎(jiǎng)的得主。爾獎(jiǎng)的得主。n2毛細(xì)管電泳與傳統(tǒng)電泳的區(qū)別：毛細(xì)管電泳與傳統(tǒng)電泳的區(qū)別： 由于傳統(tǒng)電泳的局限性由于傳統(tǒng)電泳的局限性:在兩端電壓在兩端電壓達(dá)到一定值時(shí)，會(huì)在電解質(zhì)離子流中產(chǎn)生達(dá)到一定值時(shí)，會(huì)在電解質(zhì)離子流中產(chǎn)生自熱（又稱(chēng)之為：焦耳熱）。這種熱引起自熱（又稱(chēng)之為：焦耳熱）。這種熱引起徑向粘度和速度的梯度變化。從而導(dǎo)致區(qū)徑向粘度和速度的梯度變化。從而導(dǎo)致區(qū)帶展寬、降低效率。而毛細(xì)管電泳與傳統(tǒng)帶展寬、降低效率。

3、而毛細(xì)管電泳與傳統(tǒng)電泳的電泳的根本區(qū)別是：毛細(xì)管電泳是在散熱根本區(qū)別是：毛細(xì)管電泳是在散熱效率極高的毛細(xì)管內(nèi)（效率極高的毛細(xì)管內(nèi)（10-200m）進(jìn)）進(jìn)行。行。 毛細(xì)管電泳的主要優(yōu)點(diǎn)毛細(xì)管電泳的主要優(yōu)點(diǎn)高靈敏。高靈敏。一般紫外檢測(cè)器的檢測(cè)極限在一般紫外檢測(cè)器的檢測(cè)極限在10-13-10-15mol之間，熒光檢測(cè)可達(dá)之間，熒光檢測(cè)可達(dá)10-19-10-21mol.高分辨。高分辨。峰分離效率超過(guò)一百萬(wàn)理論塔板數(shù)，一般峰分離效率超過(guò)一百萬(wàn)理論塔板數(shù)，一般可達(dá)幾十萬(wàn)?？蛇_(dá)幾十萬(wàn)。速度快速度快。許多分析在。許多分析在10分鐘內(nèi)完成，有的可在分鐘內(nèi)完成，有的可在60秒內(nèi)完成。秒內(nèi)完成。進(jìn)樣少進(jìn)樣少。比較其

4、它分離方法需要更少的樣品制備量，。比較其它分離方法需要更少的樣品制備量，一般只需毫微升的進(jìn)樣量。一般只需毫微升的進(jìn)樣量。成本低成本低。毛細(xì)管可長(zhǎng)期使用和極數(shù)量的可自己配制。毛細(xì)管可長(zhǎng)期使用和極數(shù)量的可自己配制的緩沖液的緩沖液 毛細(xì)管電泳法將傳統(tǒng)的電泳分離技術(shù)毛細(xì)管電泳法將傳統(tǒng)的電泳分離技術(shù)和現(xiàn)代的分離技術(shù)（如和現(xiàn)代的分離技術(shù)（如HPLC、GC等）等）中的檢測(cè)器、數(shù)據(jù)處理技術(shù)有機(jī)地結(jié)合中的檢測(cè)器、數(shù)據(jù)處理技術(shù)有機(jī)地結(jié)合起來(lái)。形成了一種新的高效分離技術(shù)。起來(lái)。形成了一種新的高效分離技術(shù)。就其靈敏度、就其靈敏度、分離效果和速度，以及成分離效果和速度，以及成本消耗等方面較液相色譜法具有更多的本消耗等方

5、面較液相色譜法具有更多的優(yōu)勢(shì)和長(zhǎng)處，優(yōu)勢(shì)和長(zhǎng)處，同時(shí)，它與液相色譜法具同時(shí)，它與液相色譜法具有很好的互補(bǔ)性。有很好的互補(bǔ)性。 112 毛細(xì)管電泳基本原理毛細(xì)管電泳基本原理 一根細(xì)內(nèi)徑彈性石英毛細(xì)管的兩端一根細(xì)內(nèi)徑彈性石英毛細(xì)管的兩端至于緩沖液瓶中，瓶?jī)?nèi)溶液與管內(nèi)溶液至于緩沖液瓶中，瓶?jī)?nèi)溶液與管內(nèi)溶液相同。兩個(gè)緩沖液瓶中都放置一個(gè)使高相同。兩個(gè)緩沖液瓶中都放置一個(gè)使高壓電源和毛細(xì)管之間產(chǎn)生電接觸的電極。壓電源和毛細(xì)管之間產(chǎn)生電接觸的電極。樣品引入到毛細(xì)管里是通過(guò)用一個(gè)樣品樣品引入到毛細(xì)管里是通過(guò)用一個(gè)樣品瓶替換一個(gè)緩沖液瓶，并施加電場(chǎng)或者瓶替換一個(gè)緩沖液瓶，并施加電場(chǎng)或者外部壓力實(shí)現(xiàn)。光學(xué)檢測(cè)可

6、在毛細(xì)管的外部壓力實(shí)現(xiàn)。光學(xué)檢測(cè)可在毛細(xì)管的另一端直接通過(guò)管壁進(jìn)行。另一端直接通過(guò)管壁進(jìn)行。113 毛細(xì)管電泳的檢測(cè)器毛細(xì)管電泳的檢測(cè)器UV-VIS吸收檢測(cè)方式質(zhì)量檢測(cè)限（mol）濃度檢測(cè)限（M）優(yōu) 缺 點(diǎn) 10-13 10-1610-15 10-8接近通用型 二極管陣列可給出光譜信息熒光10-15 10-1710-7 10-9 靈敏度高 常需要樣品衍生化激光誘導(dǎo)熒光 10-18 10-2010-14 10-16 極端靈敏 常需要樣品衍生化昂貴安培計(jì)10-18 10-1910-10 10-11 靈敏 選擇性好，對(duì)有電活性組分有用 需專(zhuān)門(mén)的電子裝置和毛細(xì)管處理電導(dǎo)10-15 10-1610-7

7、10-8 通用型 需專(zhuān)門(mén)的電子裝置和毛細(xì)管處理質(zhì)譜10-16 10-1710-8 10-9 靈敏度可給出結(jié)構(gòu)信息 CE和MS的接口復(fù)雜114 毛細(xì)管電泳有關(guān)術(shù)語(yǔ)毛細(xì)管電泳有關(guān)術(shù)語(yǔ) 1.電泳遷移電泳遷移 Electrophoretic Migration。 毛細(xì)管中，帶電粒子在電場(chǎng)作用下作毛細(xì)管中，帶電粒子在電場(chǎng)作用下作定向移動(dòng)的現(xiàn)象稱(chēng)之為電泳遷移。定向移動(dòng)的現(xiàn)象稱(chēng)之為電泳遷移。 2.遷移時(shí)間遷移時(shí)間 Migration Time 毛細(xì)管中，帶電粒子在電場(chǎng)作用下作毛細(xì)管中，帶電粒子在電場(chǎng)作用下作定向移動(dòng)的時(shí)間。單位：分鐘，用定向移動(dòng)的時(shí)間。單位：分鐘，用tm表示。表示。 3電泳速度電泳速度 El

8、ectrophoretic Velocity。 在單位時(shí)間內(nèi)，帶電粒子在毛細(xì)管中在單位時(shí)間內(nèi)，帶電粒子在毛細(xì)管中定向移動(dòng)的距離。單位：厘米秒，用定向移動(dòng)的距離。單位：厘米秒，用Vep表示。表示。 4電場(chǎng)強(qiáng)度電場(chǎng)強(qiáng)度 Electric Field Strength。 在給定長(zhǎng)度毛細(xì)管的兩端施加一個(gè)電壓在給定長(zhǎng)度毛細(xì)管的兩端施加一個(gè)電壓后所形成的電效應(yīng)強(qiáng)度。單位：伏特厘后所形成的電效應(yīng)強(qiáng)度。單位：伏特厘米，用米，用E表示。表示。 5電泳淌度電泳淌度 Electrop Horetic Mobility。帶電粒子在毛細(xì)管中定向移動(dòng)的速帶電粒子在毛細(xì)管中定向移動(dòng)的速度與所在電場(chǎng)強(qiáng)度之比。單位：厘米度與所

9、在電場(chǎng)強(qiáng)度之比。單位：厘米伏特伏特秒，用秒，用ep表示。表示。 6電滲流電滲流 Electroosmotic Flow(EOF) 在毛細(xì)管電泳里所指的電滲是：在在毛細(xì)管電泳里所指的電滲是：在高電壓下，溶液中的正電荷與毛細(xì)管壁高電壓下，溶液中的正電荷與毛細(xì)管壁表面的負(fù)電荷之間作用，引起流體朝負(fù)表面的負(fù)電荷之間作用，引起流體朝負(fù)極方向運(yùn)動(dòng)的現(xiàn)象。極方向運(yùn)動(dòng)的現(xiàn)象。 在毛細(xì)管電泳中，電滲流總是由陽(yáng)極流在毛細(xì)管電泳中，電滲流總是由陽(yáng)極流向陰極。向陰極。 a.石英表面負(fù)電荷（Si-O） b.水合陽(yáng)離子在表面附近積聚 c.電場(chǎng)作用下指向負(fù)極的體相流動(dòng)7毛細(xì)管流型毛細(xì)管流型 Capillary Flow P

10、rofiles 由于毛細(xì)管電泳是屬電驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)，在毛由于毛細(xì)管電泳是屬電驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)，在毛細(xì)管中流體的流型呈扁平型的塞子向前流動(dòng)細(xì)管中流體的流型呈扁平型的塞子向前流動(dòng)的。而在壓力驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)中（如的。而在壓力驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)中（如HPLC）流型呈）流型呈拋物線(xiàn)型向前流動(dòng)。這是導(dǎo)致毛細(xì)管電泳高拋物線(xiàn)型向前流動(dòng)。這是導(dǎo)致毛細(xì)管電泳高效分離的重要原因。我們稱(chēng)之為塞式流。效分離的重要原因。我們稱(chēng)之為塞式流。 8焦耳熱焦耳熱 Joule Heating 在高電場(chǎng)下，毛細(xì)管中的電解質(zhì)會(huì)在高電場(chǎng)下，毛細(xì)管中的電解質(zhì)會(huì)產(chǎn)生自熱現(xiàn)象，稱(chēng)該熱量為焦耳熱。在產(chǎn)生自熱現(xiàn)象，稱(chēng)該熱量為焦耳熱。在毛細(xì)管電泳中焦耳熱的產(chǎn)生與毛細(xì)管的毛細(xì)管電

11、泳中焦耳熱的產(chǎn)生與毛細(xì)管的管徑、緩沖液的濃度有關(guān)。管徑、緩沖液的濃度有關(guān)。 管徑越細(xì)散熱就快，緩沖液濃度越管徑越細(xì)散熱就快，緩沖液濃度越高產(chǎn)熱就多。高產(chǎn)熱就多。 Q=IQ=I2 2RtRt115 毛細(xì)管電泳技術(shù)的分類(lèi)毛細(xì)管電泳技術(shù)的分類(lèi) 根據(jù)毛細(xì)管電泳的原理可分為：根據(jù)毛細(xì)管電泳的原理可分為： 毛細(xì)管區(qū)帶電泳（毛細(xì)管區(qū)帶電泳（CZE）；）； 毛細(xì)管凝膠電泳（毛細(xì)管凝膠電泳（CGE）；）； 毛細(xì)管膠束電動(dòng)力學(xué)毛細(xì)管電泳毛細(xì)管膠束電動(dòng)力學(xué)毛細(xì)管電泳（MECC）；）； 毛細(xì)管等電聚焦電泳（毛細(xì)管等電聚焦電泳（CIEF）；）； 毛細(xì)管等速聚焦電泳（毛細(xì)管等速聚焦電泳（CITP）。 (1).原理：毛細(xì)管

12、區(qū)帶電泳也稱(chēng)為自由溶原理：毛細(xì)管區(qū)帶電泳也稱(chēng)為自由溶液毛細(xì)管電泳，是毛細(xì)管電源中最簡(jiǎn)單的液毛細(xì)管電泳，是毛細(xì)管電源中最簡(jiǎn)單的一種形式。其一種形式。其分離機(jī)理是基于各被分離物分離機(jī)理是基于各被分離物質(zhì)的凈電荷與質(zhì)量之間比值的差異質(zhì)的凈電荷與質(zhì)量之間比值的差異，不同，不同離子按照各自表面電荷密度的差異以不同離子按照各自表面電荷密度的差異以不同的速度在電解質(zhì)中多少，而導(dǎo)致分離。毛的速度在電解質(zhì)中多少，而導(dǎo)致分離。毛細(xì)管區(qū)帶電泳要求緩沖液具有均一性，毛細(xì)管區(qū)帶電泳要求緩沖液具有均一性，毛細(xì)管內(nèi)各處具有恒定的電場(chǎng)強(qiáng)度。細(xì)管內(nèi)各處具有恒定的電場(chǎng)強(qiáng)度。 一、毛細(xì)管區(qū)帶電泳一、毛細(xì)管區(qū)帶電泳CZE毛細(xì)管區(qū)帶電

13、泳的相關(guān)因素毛細(xì)管區(qū)帶電泳的相關(guān)因素a.工作電壓的選擇工作電壓的選擇 在一般情況下，毛細(xì)管的分離柱效隨電在一般情況下，毛細(xì)管的分離柱效隨電壓的增大而提高。當(dāng)超過(guò)極點(diǎn)時(shí)，隨著電壓壓的增大而提高。當(dāng)超過(guò)極點(diǎn)時(shí)，隨著電壓的增大焦耳熱的產(chǎn)生加劇，柱效反而會(huì)下降。的增大焦耳熱的產(chǎn)生加劇，柱效反而會(huì)下降。極點(diǎn)的電壓值視系統(tǒng)配置和分離組分的不同極點(diǎn)的電壓值視系統(tǒng)配置和分離組分的不同而不同。而不同。 b.緩沖液的選擇緩沖液的選擇 一般選磷酸、醋酸和硼酸緩沖液。但應(yīng)一般選磷酸、醋酸和硼酸緩沖液。但應(yīng)注意其注意其pH值和濃度的控制。值和濃度的控制。 pH值的選擇原則：值的選擇原則： 緩沖液的緩沖液的pH值必須比被

14、分離物質(zhì)值必須比被分離物質(zhì)的等電點(diǎn)高或低的等電點(diǎn)高或低1個(gè)個(gè)pH單位，以便得到合單位，以便得到合適的電泳淌度。適的電泳淌度。 在條件許可的情況下盡可能采用酸在條件許可的情況下盡可能采用酸性緩沖液，使得毛細(xì)管壁上的吸附和電滲性緩沖液，使得毛細(xì)管壁上的吸附和電滲流降低，提高毛細(xì)管涂層的壽命。流降低，提高毛細(xì)管涂層的壽命。 緩沖液的濃度選擇：緩沖液的濃度選擇： 在一般情況下，在一般情況下，濃度增加被分離物濃度增加被分離物質(zhì)的遷移速度下降，有利于分離效果的質(zhì)的遷移速度下降，有利于分離效果的提高，提高，尤其是對(duì)某些特殊物質(zhì)的分離。尤其是對(duì)某些特殊物質(zhì)的分離。但隨著緩沖液濃度的增大，粘度增加，但隨著緩沖液

15、濃度的增大，粘度增加，電滲流和焦耳熱增大，給分離造成反作電滲流和焦耳熱增大，給分離造成反作用。因此，在實(shí)際分離中必須對(duì)緩沖液用。因此，在實(shí)際分離中必須對(duì)緩沖液濃度做優(yōu)化選擇。濃度做優(yōu)化選擇。 毛細(xì)管電泳中常用的緩沖液毛細(xì)管電泳中常用的緩沖液 緩沖液緩沖液 pH值的使用范圍值的使用范圍 磷酸鹽磷酸鹽 1.143.14 醋酸鹽醋酸鹽 3.765.76 磷酸鹽磷酸鹽 6.208.20 硼酸鹽硼酸鹽 8.1410.14兩性緩沖液：兩性緩沖液： MES 5.15-7.15PIPES 5.80-7.80HEPES 6.55-8.55Tricne 7.15-9.15Tris 7.30-9.30緩沖液中的不同

16、添加劑選擇：緩沖液中的不同添加劑選擇： 在區(qū)帶電泳中，不同的緩沖液添加劑在區(qū)帶電泳中，不同的緩沖液添加劑可改變分離的選擇性、電泳淌度。因此，可改變分離的選擇性、電泳淌度。因此，在區(qū)帶電泳分離中選用一種合適的緩沖液在區(qū)帶電泳分離中選用一種合適的緩沖液添加劑是改善分離的極有效方法。添加劑是改善分離的極有效方法。 不同的緩沖液添加劑不同的緩沖液添加劑 添加劑添加劑 功功 能能 無(wú)機(jī)鹽無(wú)機(jī)鹽 改變蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)改變蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑 增加溶解度，減少電滲流增加溶解度，減少電滲流尿素尿素 增加蛋白質(zhì)溶解度，使低聚核苷酸變性增加蛋白質(zhì)溶解度，使低聚核苷酸變性磺酸磺酸 離子對(duì)作用，疏水作用離子對(duì)作用，疏

17、水作用陰離子表面活性劑陰離子表面活性劑 改變毛細(xì)管壁的特性改變毛細(xì)管壁的特性纖維素衍生物纖維素衍生物 減少電滲流，提供一個(gè)篩濾介質(zhì)減少電滲流，提供一個(gè)篩濾介質(zhì)胺類(lèi)胺類(lèi) 覆蓋硅烷基團(tuán)覆蓋硅烷基團(tuán)圖中圖中1VB1、2VB12、3. .VB6、4VC、5. .水溶性維生素水溶性維生素K、6煙酸、煙酸、7泛酸。泛酸。 二、毛細(xì)管凝膠電泳二、毛細(xì)管凝膠電泳CGE 原理：原理：凝膠電泳主要用于生物學(xué)上分離凝膠電泳主要用于生物學(xué)上分離大分子物質(zhì)，如蛋白質(zhì)和核酸，它是基于分大分子物質(zhì)，如蛋白質(zhì)和核酸，它是基于分子尺寸，讓溶質(zhì)在合適的起子尺寸，讓溶質(zhì)在合適的起“分子篩分子篩”作用作用的聚合物內(nèi)進(jìn)行電泳而分離。當(dāng)

18、帶電溶質(zhì)在的聚合物內(nèi)進(jìn)行電泳而分離。當(dāng)帶電溶質(zhì)在電場(chǎng)力的推動(dòng)下在聚合物的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)內(nèi)遷移電場(chǎng)力的推動(dòng)下在聚合物的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)內(nèi)遷移時(shí)，其運(yùn)動(dòng)要受到一定程度的阻力，大分子時(shí)，其運(yùn)動(dòng)要受到一定程度的阻力，大分子受到的阻力比小分子大。受到的阻力比小分子大。 毛細(xì)管凝膠的材料毛細(xì)管凝膠的材料: : a. a.凝膠可分為無(wú)機(jī)凝膠和有機(jī)凝膠凝膠可分為無(wú)機(jī)凝膠和有機(jī)凝膠或分為物理和化學(xué)凝膠。或分為物理和化學(xué)凝膠。 無(wú)機(jī)凝膠有多孔硅膠、多孔玻璃；無(wú)機(jī)凝膠有多孔硅膠、多孔玻璃； 有機(jī)凝膠有葡聚糖、交聯(lián)聚丙酰胺有機(jī)凝膠有葡聚糖、交聯(lián)聚丙酰胺和瓊脂糖等。和瓊脂糖等。nb.無(wú)膠篩分無(wú)膠篩分n 使用粘度低的線(xiàn)性聚合物，如甲基

19、纖維使用粘度低的線(xiàn)性聚合物，如甲基纖維素、羥基丙基甲基纖維素，取代聚丙酰胺。素、羥基丙基甲基纖維素，取代聚丙酰胺。這種聚合物的溶液仍有分子篩的作用，只這種聚合物的溶液仍有分子篩的作用，只是不作聚合。因此避免了空泡的形成。它是不作聚合。因此避免了空泡的形成。它與凝膠相比具有方便、簡(jiǎn)單、柱子壽命長(zhǎng)與凝膠相比具有方便、簡(jiǎn)單、柱子壽命長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)，其功能可通過(guò)調(diào)節(jié)不同的線(xiàn)性聚等優(yōu)點(diǎn)，其功能可通過(guò)調(diào)節(jié)不同的線(xiàn)性聚合物加以變化和擴(kuò)充，只需要一根簡(jiǎn)單的合物加以變化和擴(kuò)充，只需要一根簡(jiǎn)單的毛細(xì)管就可進(jìn)行不同分子的分離。缺點(diǎn)是毛細(xì)管就可進(jìn)行不同分子的分離。缺點(diǎn)是分離能力略差于凝膠柱。分離能力略差于凝膠柱。 在毛細(xì)管

20、凝膠電泳中常用的在毛細(xì)管凝膠電泳中常用的材料是十二烷基磺酸鈉聚丙酰材料是十二烷基磺酸鈉聚丙酰胺（胺（SDS-PAGS）、甲基纖維素、）、甲基纖維素、羥基丙基甲基纖維素等羥基丙基甲基纖維素等 毛細(xì)管凝膠電泳的應(yīng)用毛細(xì)管凝膠電泳的應(yīng)用 DNA的測(cè)定：的測(cè)定： 毛細(xì)管凝膠電泳和無(wú)膠篩分技術(shù)已廣泛地用毛細(xì)管凝膠電泳和無(wú)膠篩分技術(shù)已廣泛地用于低聚核酸段、引物、探針和不敏感的低聚于低聚核酸段、引物、探針和不敏感的低聚 DNA的高靈敏分析，以及雙鏈的高靈敏分析，以及雙鏈DNA片段大小的片段大小的測(cè)定，對(duì)未經(jīng)制備的測(cè)定，對(duì)未經(jīng)制備的PCR產(chǎn)物可進(jìn)行高靈敏度產(chǎn)物可進(jìn)行高靈敏度的檢測(cè)。由于毛細(xì)管凝膠電泳具有低消耗

21、、快的檢測(cè)。由于毛細(xì)管凝膠電泳具有低消耗、快速、高效等優(yōu)點(diǎn)，因此，它發(fā)展成為第二代速、高效等優(yōu)點(diǎn)，因此，它發(fā)展成為第二代DNA序列測(cè)定儀。序列測(cè)定儀。 圖圖 X174DNA的的Hae限制酶切產(chǎn)物的分離圖譜限制酶切產(chǎn)物的分離圖譜 SDS- -PAGE毛細(xì)管凝膠電泳在蛋白質(zhì)分離中的毛細(xì)管凝膠電泳在蛋白質(zhì)分離中的應(yīng)用：應(yīng)用： SDS（十二烷基磺酸鈉）是一種陰離子表面活（十二烷基磺酸鈉）是一種陰離子表面活性劑，被分離的蛋白質(zhì)與性劑，被分離的蛋白質(zhì)與SDS鍵合、改性，使蛋白鍵合、改性，使蛋白質(zhì)由球狀轉(zhuǎn)變?yōu)榘魻?，而質(zhì)由球狀轉(zhuǎn)變?yōu)榘魻?，而SDS分子的負(fù)電荷掩蓋了分子的負(fù)電荷掩蓋了蛋白質(zhì)分子原有的電荷，蛋白質(zhì)

22、分子原有的電荷，每克蛋白質(zhì)可吸附約每克蛋白質(zhì)可吸附約1.4克克SDS，從而形成有確定的電荷，從而形成有確定的電荷/體積比的蛋白質(zhì)體積比的蛋白質(zhì)SDS絡(luò)合物，絡(luò)合物，在聚丙烯酰胺凝膠中進(jìn)行電泳時(shí)，在聚丙烯酰胺凝膠中進(jìn)行電泳時(shí)，各蛋白質(zhì)棒狀分子具有相等的電荷密度，因此，各蛋白質(zhì)棒狀分子具有相等的電荷密度，因此，這種電泳分離是純粹地按分子體積大小進(jìn)行的。這種電泳分離是純粹地按分子體積大小進(jìn)行的。在蛋白質(zhì)的測(cè)定中，在蛋白質(zhì)的測(cè)定中，SDS- -PAGE毛細(xì)管凝膠電泳毛細(xì)管凝膠電泳可用于分子量大小的測(cè)定。貝克曼公司生產(chǎn)了專(zhuān)可用于分子量大小的測(cè)定。貝克曼公司生產(chǎn)了專(zhuān)門(mén)測(cè)定蛋白質(zhì)分子量的門(mén)測(cè)定蛋白質(zhì)分子量的

23、SDS- -PAGE14- -200分析盒分析盒圖圖 凝膠電泳測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量分凝膠電泳測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量分離圖譜離圖譜 三、膠束電動(dòng)力學(xué)毛細(xì)管電泳三、膠束電動(dòng)力學(xué)毛細(xì)管電泳MECC MECC是是Terabe在在1984年首先提出年首先提出的。這一技術(shù)的的。這一技術(shù)的最大特點(diǎn)是使毛細(xì)管電最大特點(diǎn)是使毛細(xì)管電泳有可能在用于分離離子化合物的同時(shí)泳有可能在用于分離離子化合物的同時(shí)進(jìn)行中性物質(zhì)的分離，進(jìn)行中性物質(zhì)的分離，因此在各個(gè)領(lǐng)域因此在各個(gè)領(lǐng)域特別是生物制品和藥物制品領(lǐng)域顯示了特別是生物制品和藥物制品領(lǐng)域顯示了廣泛的應(yīng)用前景。廣泛的應(yīng)用前景。 在在MECC中，當(dāng)把離子型中，當(dāng)把離子型表面活性劑加

24、入緩沖液中，并表面活性劑加入緩沖液中，并且其濃度足夠大時(shí)這種表面活且其濃度足夠大時(shí)這種表面活性劑的單體就結(jié)合在一起，形性劑的單體就結(jié)合在一起，形成一個(gè)球體我們稱(chēng)其為成一個(gè)球體我們稱(chēng)其為膠束膠束。目前，以十二烷基磺酸鈉目前，以十二烷基磺酸鈉（SDS）使用最為普遍。圖是）使用最為普遍。圖是SDS的結(jié)構(gòu)。的結(jié)構(gòu)。 原理：原理： 在在MECC的系統(tǒng)中存在兩個(gè)相：的系統(tǒng)中存在兩個(gè)相：流動(dòng)的水流動(dòng)的水相和起到固定相作用的膠束相，被分離物在這相和起到固定相作用的膠束相，被分離物在這兩個(gè)相之間分配，由于它們?cè)谀z束中具有保留兩個(gè)相之間分配，由于它們?cè)谀z束中具有保留能力而產(chǎn)生不同的保留時(shí)間。能力而產(chǎn)生不同的保留時(shí)

25、間。和區(qū)帶電泳一樣，和區(qū)帶電泳一樣，緩沖液在管別壁處形成正電，使其顯示強(qiáng)烈的緩沖液在管別壁處形成正電，使其顯示強(qiáng)烈的向負(fù)極移動(dòng)的電滲流，而向負(fù)極移動(dòng)的電滲流，而SDS膠束由于其外殼膠束由于其外殼帶負(fù)電性具有向正極遷移的傾向。在一般情況帶負(fù)電性具有向正極遷移的傾向。在一般情況下，下，電滲流的速度大于膠束的遷移速度。因此，電滲流的速度大于膠束的遷移速度。因此，迫使膠束最終以較低的速度向負(fù)極移動(dòng)。迫使膠束最終以較低的速度向負(fù)極移動(dòng)。我們我們把這個(gè)移動(dòng)的膠束固定相也稱(chēng)之為把這個(gè)移動(dòng)的膠束固定相也稱(chēng)之為“準(zhǔn)固定準(zhǔn)固定相相”。 _+_+K1K2K3+ + + + + + + + + + + + + + +

26、 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 圖中圖中K1、K2、K3為分配系數(shù)，其為分配系數(shù)，其數(shù)值大小取決于緩沖溶液的數(shù)值大小取決于緩沖溶液的pH和物質(zhì)和物質(zhì)結(jié)構(gòu)，電泳淌度分別大于陽(yáng)離子、中性結(jié)構(gòu)，電泳淌度分別大于陽(yáng)離子、中性離子、陰離子和膠束的淌度。所以，所離子、陰離子和膠束的淌度。所以，所有粒子向陰極

27、移動(dòng)。有粒子向陰極移動(dòng)。 在膠束電動(dòng)力學(xué)色譜中，在膠束電動(dòng)力學(xué)色譜中，中性離子之間的分離中性離子之間的分離是根據(jù)其本身的疏水性的不同而達(dá)到的，不同疏水是根據(jù)其本身的疏水性的不同而達(dá)到的，不同疏水性的粒子和膠束的相互作用不同，疏水性強(qiáng)的作用性的粒子和膠束的相互作用不同，疏水性強(qiáng)的作用力就大，保留時(shí)間就長(zhǎng)，力就大，保留時(shí)間就長(zhǎng)，反之，保留時(shí)間就短。反之，保留時(shí)間就短。 MECC的優(yōu)點(diǎn)：的優(yōu)點(diǎn)： 極高的分離效率。與高效液相色極高的分離效率。與高效液相色譜比較，譜比較，HPLC的分離效率的分離效率5，00025，000理論塔板數(shù)理論塔板數(shù)/m，而，而MECC的分離效率的分離效率50，000500，00

28、0理論塔板數(shù)理論塔板數(shù)/m。 分離速度快。分離速度快。MECC一般只需一般只需20分鐘分鐘以?xún)?nèi)就可完成分離，有時(shí)僅需幾分鐘的時(shí)以?xún)?nèi)就可完成分離，有時(shí)僅需幾分鐘的時(shí)間。間。 可分離中性化合物。可分離中性化合物。 膠束準(zhǔn)固定相的種類(lèi)和選擇膠束準(zhǔn)固定相的種類(lèi)和選擇陰離子表面活性劑陰離子表面活性劑 十烷基硫酸鈉十烷基硫酸鈉 十二烷基硫酸鈉（十二烷基硫酸鈉（SDSSDS） 十四烷基硫酸鈉十四烷基硫酸鈉(STS)(STS) 陽(yáng)離子表面活性劑陽(yáng)離子表面活性劑 十二烷基三甲基季胺氯十二烷基三甲基季胺氯(DTAC)(DTAC) 十二烷基三甲基季胺溴（十二烷基三甲基季胺溴（DTABDTAB） 十六烷基三甲基季胺氯

29、十六烷基三甲基季胺氯(CTAC)(CTAC) 十六烷基三甲基季胺溴（十六烷基三甲基季胺溴（CTABCTAB）在在MECC 中選擇的表面活性劑須符合幾個(gè)要求：中選擇的表面活性劑須符合幾個(gè)要求：n單一粒度非常的小。單一粒度非常的小。n在溶液中是穩(wěn)定的。在溶液中是穩(wěn)定的。n粒子表面帶負(fù)電荷。粒子表面帶負(fù)電荷。n溶質(zhì)（被分離組分）進(jìn)出非常的快溶質(zhì)（被分離組分）進(jìn)出非常的快。n流動(dòng)相流動(dòng)相-緩沖液：緩沖液： 在在MECC中可通過(guò)改變流動(dòng)相進(jìn)行中可通過(guò)改變流動(dòng)相進(jìn)行選擇性的調(diào)節(jié)。主要是改變緩沖液的種選擇性的調(diào)節(jié)。主要是改變緩沖液的種類(lèi)、成分、類(lèi)、成分、pH和離子強(qiáng)度，同時(shí)也可以和離子強(qiáng)度，同時(shí)也可以添加有

30、機(jī)改良劑，如：丙醇、甲醇和乙添加有機(jī)改良劑，如：丙醇、甲醇和乙腈等。腈等。 1.柚皮苷，柚皮苷，2.蘆丁，蘆丁，34，5，7三羥基三羥基5黃黃烷酮，烷酮，4.桔皮素，桔皮素，5.桑色素，桑色素，6.5,7-二羥黃酮二羥黃酮 四、毛細(xì)管等電聚焦電泳四、毛細(xì)管等電聚焦電泳CIEF 毛細(xì)管等電聚焦（毛細(xì)管等電聚焦（CIEF）是一項(xiàng)依）是一項(xiàng)依據(jù)據(jù) pI 進(jìn)行多肽或蛋白質(zhì)分離的進(jìn)行多肽或蛋白質(zhì)分離的“高分高分辨辨”技術(shù)。技術(shù)。CIEF 能分離僅相差能分離僅相差0.005甚甚至更低的至更低的 pI 單位的蛋白質(zhì)。單位的蛋白質(zhì)。 首先用兩性電解質(zhì)在毛細(xì)管首先用兩性電解質(zhì)在毛細(xì)管內(nèi)建立內(nèi)建立pH梯度。兩性電

31、解質(zhì)是指同時(shí)梯度。兩性電解質(zhì)是指同時(shí)具有酸堿性基團(tuán)的兩性離子。具有酸堿性基團(tuán)的兩性離子。當(dāng)把毛細(xì)當(dāng)把毛細(xì)管內(nèi)充滿(mǎn)溶質(zhì)混合物和兩性電解質(zhì)后管內(nèi)充滿(mǎn)溶質(zhì)混合物和兩性電解質(zhì)后 pH 梯度很快形成。各種具有不同等電梯度很快形成。各種具有不同等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)按這一梯度遷移到其等電點(diǎn)點(diǎn)的蛋白質(zhì)按這一梯度遷移到其等電點(diǎn)位置位置（到達(dá)一個(gè)不帶電的區(qū)域），并在（到達(dá)一個(gè)不帶電的區(qū)域），并在該點(diǎn)停留，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為該點(diǎn)停留，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為“聚焦聚焦”。蛋。蛋白質(zhì)在白質(zhì)在 CIEF 中能夠保持在一個(gè)很窄中能夠保持在一個(gè)很窄的區(qū)域內(nèi)，并使不同的蛋白質(zhì)聚焦在不的區(qū)域內(nèi)，并使不同的蛋白質(zhì)聚焦在不同的位置上。同的位置上。原理：原

32、理： 1.進(jìn)樣，把樣品與兩性電解質(zhì)混合。 2.聚焦，在整個(gè)毛細(xì)管長(zhǎng)度范圍內(nèi)建立一個(gè)值梯度，使樣品在毛細(xì)管中向各自的等電點(diǎn)聚焦移動(dòng)，形成一條由不同組分排列的帶子。 3.遷移，陰極緩沖液換成鹽類(lèi)后，加上電壓，讓組分逐個(gè)通過(guò)檢測(cè)器。毛細(xì)管等電聚焦的運(yùn)行過(guò)程分三個(gè)步驟：毛細(xì)管等電聚焦的運(yùn)行過(guò)程分三個(gè)步驟：圖圖 應(yīng)用等電點(diǎn)聚焦電泳分離蛋白質(zhì)圖譜。應(yīng)用等電點(diǎn)聚焦電泳分離蛋白質(zhì)圖譜。1.馬心臟肌馬心臟肌紅蛋白紅蛋白2.馬心臟肌紅蛋白馬心臟肌紅蛋白 3.人紅血球碳酸酐酶人紅血球碳酸酐酶 4.牛紅血牛紅血球碳酸酐酶球碳酸酐酶 5. 乳球蛋白乳球蛋白A 五、毛細(xì)管等速聚焦電泳五、毛細(xì)管等速聚焦電泳CITP 原理：

33、原理：毛細(xì)管等速電泳是電泳中唯一毛細(xì)管等速電泳是電泳中唯一的一種在被分離組分與電解質(zhì)一起向前移的一種在被分離組分與電解質(zhì)一起向前移動(dòng)的同時(shí)，進(jìn)行聚焦分離的電泳方法。動(dòng)的同時(shí)，進(jìn)行聚焦分離的電泳方法。 同等電聚焦電泳一樣等速聚焦電泳在同等電聚焦電泳一樣等速聚焦電泳在毛細(xì)管中的電滲流為零，毛細(xì)管中的電滲流為零，緩沖液系統(tǒng)由前緩沖液系統(tǒng)由前后兩種不同淌度的電解質(zhì)組成。后兩種不同淌度的電解質(zhì)組成。在分離時(shí)，毛細(xì)管內(nèi)首先導(dǎo)入具有比被在分離時(shí)，毛細(xì)管內(nèi)首先導(dǎo)入具有比被分離各組分高電泳淌度的前導(dǎo)電解質(zhì)分離各組分高電泳淌度的前導(dǎo)電解質(zhì)（Leading Electrolye），然后進(jìn)樣，隨），然后進(jìn)樣，隨后再導(dǎo)

34、入比各分離組分低電泳淌度的尾后再導(dǎo)入比各分離組分低電泳淌度的尾隨電解質(zhì)隨電解質(zhì)(Terminating Electrolye)。在。在強(qiáng)電場(chǎng)的作用下，各該分離組分在前導(dǎo)強(qiáng)電場(chǎng)的作用下，各該分離組分在前導(dǎo)電解質(zhì)與尾隨電解質(zhì)之間的空隙中發(fā)生電解質(zhì)與尾隨電解質(zhì)之間的空隙中發(fā)生聚焦分離。聚焦分離。 毛細(xì)管等速聚焦電泳原理圖毛細(xì)管等速聚焦電泳原理圖 樣品尾隨電解質(zhì)前導(dǎo)電解質(zhì)+_ 在 ITP 中之所以會(huì)發(fā)生等速遷移，是因?yàn)楦鱾€(gè)區(qū)帶的電場(chǎng)強(qiáng)度不一樣。在分離過(guò)程中場(chǎng)強(qiáng)會(huì)自行調(diào)整以維持區(qū)帶的等速移動(dòng) （遷移速率 = 淌度場(chǎng)強(qiáng)），淌度大的離子所在的區(qū)帶場(chǎng)強(qiáng)較低，這種現(xiàn)象使各個(gè)區(qū)帶間保持著明顯的界面。等速電泳的操作

35、條件的選擇：等速電泳的操作條件的選擇： 毛細(xì)管電泳的操作中，毛細(xì)管電泳的操作中，使用經(jīng)處理或使用經(jīng)處理或未處理的硅膠毛細(xì)管都是可行的。電滲流未處理的硅膠毛細(xì)管都是可行的。電滲流可用可用0.25% %的羥脯氨酰甲基纖維素抑制，的羥脯氨酰甲基纖維素抑制，一一種理想的前導(dǎo)電解質(zhì)是種理想的前導(dǎo)電解質(zhì)是5nm的磷酸的磷酸；纈氨纈氨酸（酸（100nm用伯胺調(diào)節(jié)到適當(dāng)?shù)挠貌氛{(diào)節(jié)到適當(dāng)?shù)膒H值）是值）是一種有效的尾隨電解質(zhì)。在分離開(kāi)始時(shí)，一種有效的尾隨電解質(zhì)。在分離開(kāi)始時(shí)，電流會(huì)由于高淌度的電解質(zhì)完全充滿(mǎn)毛細(xì)電流會(huì)由于高淌度的電解質(zhì)完全充滿(mǎn)毛細(xì)管而迅速增大。當(dāng)進(jìn)入分離過(guò)程時(shí)，電流管而迅速增大。當(dāng)進(jìn)入分離過(guò)程

36、時(shí)，電流會(huì)隨著低淌度電解質(zhì)進(jìn)入毛細(xì)管而下降。會(huì)隨著低淌度電解質(zhì)進(jìn)入毛細(xì)管而下降。 毛細(xì)管電色譜分析毛細(xì)管電色譜分析 毛細(xì)管電色譜（毛細(xì)管電色譜（capillary electrochromatography，CEC）是毛細(xì)）是毛細(xì)管電泳和液相色譜的融合技術(shù)。管電泳和液相色譜的融合技術(shù)。是在毛是在毛細(xì)管中填充或在毛細(xì)管壁涂布、鍵合色細(xì)管中填充或在毛細(xì)管壁涂布、鍵合色譜固定相，依靠電滲流來(lái)推動(dòng)流動(dòng)相，譜固定相，依靠電滲流來(lái)推動(dòng)流動(dòng)相，使中性和帶電荷的樣品分子根據(jù)它們使中性和帶電荷的樣品分子根據(jù)它們?cè)谠谏V固定相和流動(dòng)相間吸附能力、分配色譜固定相和流動(dòng)相間吸附能力、分配系數(shù)的不同系數(shù)的不同和和電泳速

37、度的不同電泳速度的不同而達(dá)到分而達(dá)到分離分析的一種電分離模式。離分析的一種電分離模式。 毛細(xì)管電色譜相對(duì)于的液相色譜而言，不毛細(xì)管電色譜相對(duì)于的液相色譜而言，不僅克服了高效液相色譜中僅克服了高效液相色譜中壓力壓力流本身流速不均流本身流速不均勻引起的峰擴(kuò)展，勻引起的峰擴(kuò)展，而且柱內(nèi)無(wú)壓降，使得峰擴(kuò)而且柱內(nèi)無(wú)壓降，使得峰擴(kuò)展只與溶質(zhì)擴(kuò)散系數(shù)有關(guān)，因而使毛細(xì)管電色展只與溶質(zhì)擴(kuò)散系數(shù)有關(guān)，因而使毛細(xì)管電色譜的理論踏板數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于高效液相色譜，能達(dá)譜的理論踏板數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于高效液相色譜，能達(dá)到接近于毛細(xì)管電泳的高理論踏板數(shù)。同時(shí)由到接近于毛細(xì)管電泳的高理論踏板數(shù)。同時(shí)由于引入了高效液相色譜的固定相，于引入了高

38、效液相色譜的固定相，使毛細(xì)管電使毛細(xì)管電色譜具備了高效液相色譜固定相所具有的選擇色譜具備了高效液相色譜固定相所具有的選擇性，使它不僅能分離帶電物質(zhì)，也能分離中性性，使它不僅能分離帶電物質(zhì)，也能分離中性化合物。化合物。另外，毛細(xì)管電色譜是微柱分離分析另外，毛細(xì)管電色譜是微柱分離分析技術(shù)，很容易實(shí)現(xiàn)與其它分析技術(shù)的聯(lián)用，如技術(shù)，很容易實(shí)現(xiàn)與其它分析技術(shù)的聯(lián)用，如CEC-MS、CEC-IR和和CEC-NMR的聯(lián)用。的聯(lián)用。 一、毛細(xì)管電色譜的分類(lèi)一、毛細(xì)管電色譜的分類(lèi) 1.按毛細(xì)管柱的類(lèi)型分類(lèi)按毛細(xì)管柱的類(lèi)型分類(lèi) （1）填充柱毛細(xì)管電色譜：）填充柱毛細(xì)管電色譜：將將HPLC填料用適當(dāng)?shù)姆椒ㄌ盍嫌眠m當(dāng)

39、的方法填入填入毛細(xì)管柱，用電滲毛細(xì)管柱，用電滲流或電滲流結(jié)合壓力流推動(dòng)流動(dòng)相進(jìn)行分流或電滲流結(jié)合壓力流推動(dòng)流動(dòng)相進(jìn)行分離分析的技術(shù)，叫填充柱毛細(xì)管電色譜。離分析的技術(shù)，叫填充柱毛細(xì)管電色譜。 （2）開(kāi)管柱毛細(xì)管電色譜：）開(kāi)管柱毛細(xì)管電色譜：將將HPLC固定相用化學(xué)的或物理的方法涂漬在固定相用化學(xué)的或物理的方法涂漬在毛細(xì)毛細(xì)管內(nèi)壁上管內(nèi)壁上，用電滲流或電滲流與壓力一起，用電滲流或電滲流與壓力一起驅(qū)動(dòng)流動(dòng)相的分離技術(shù)，叫開(kāi)管柱毛細(xì)管驅(qū)動(dòng)流動(dòng)相的分離技術(shù)，叫開(kāi)管柱毛細(xì)管電色譜。電色譜。 三三. 按流動(dòng)相的驅(qū)動(dòng)方式分類(lèi)按流動(dòng)相的驅(qū)動(dòng)方式分類(lèi) （1）電滲流驅(qū)動(dòng)的毛細(xì)管電色譜）電滲流驅(qū)動(dòng)的毛細(xì)管電色譜 電

40、滲流驅(qū)動(dòng)的毛細(xì)管電色譜可以在一般電滲流驅(qū)動(dòng)的毛細(xì)管電色譜可以在一般HPCE商品儀器上進(jìn)行，是目前研究較多的電商品儀器上進(jìn)行，是目前研究較多的電色譜。在這種電色譜中，既引入了高選擇性的色譜。在這種電色譜中，既引入了高選擇性的HPLC固定相，提高了電泳的分離能力，又克固定相，提高了電泳的分離能力，又克服了壓力驅(qū)動(dòng)的流體引起的區(qū)帶展寬，可以實(shí)服了壓力驅(qū)動(dòng)的流體引起的區(qū)帶展寬，可以實(shí)現(xiàn)高效、高選擇性分離。但是，現(xiàn)高效、高選擇性分離。但是，因電滲力的限因電滲力的限制，難以驅(qū)趕出在電泳過(guò)程中產(chǎn)生的氣泡，電制，難以驅(qū)趕出在電泳過(guò)程中產(chǎn)生的氣泡，電泳操作常因氣泡而中斷，泳操作常因氣泡而中斷，使實(shí)驗(yàn)失敗。使實(shí)驗(yàn)

41、失敗。（2）電滲流和壓力聯(lián)合驅(qū)動(dòng)的毛細(xì)管電色譜）電滲流和壓力聯(lián)合驅(qū)動(dòng)的毛細(xì)管電色譜 液相泵產(chǎn)生的壓力流可以使操作中產(chǎn)生的氣泡沖液相泵產(chǎn)生的壓力流可以使操作中產(chǎn)生的氣泡沖出毛細(xì)管或者使氣體在高壓下溶解，從而解決了填充出毛細(xì)管或者使氣體在高壓下溶解，從而解決了填充柱電色譜在電泳過(guò)程中產(chǎn)生氣泡的問(wèn)題。用電滲流和柱電色譜在電泳過(guò)程中產(chǎn)生氣泡的問(wèn)題。用電滲流和壓力聯(lián)合驅(qū)動(dòng)的流動(dòng)相，不僅使流動(dòng)相的平均線(xiàn)速比壓力聯(lián)合驅(qū)動(dòng)的流動(dòng)相，不僅使流動(dòng)相的平均線(xiàn)速比相同條件下的相同條件下的HPLC中的大，中的大，縮短了分析時(shí)間，而且縮短了分析時(shí)間，而且能減小壓力流引起的區(qū)帶展寬，使分離效率比能減小壓力流引起的區(qū)帶展寬，

42、使分離效率比HPLC明顯提高，操作的穩(wěn)定性及重復(fù)性也更好，并且在電明顯提高，操作的穩(wěn)定性及重復(fù)性也更好，并且在電滲流和壓力聯(lián)合驅(qū)動(dòng)的毛細(xì)管電色譜中還能像滲流和壓力聯(lián)合驅(qū)動(dòng)的毛細(xì)管電色譜中還能像HPLC那樣進(jìn)行梯度洗脫那樣進(jìn)行梯度洗脫。 除了用泵來(lái)產(chǎn)生壓力流外，還可以采用在柱兩端除了用泵來(lái)產(chǎn)生壓力流外，還可以采用在柱兩端加壓的方式給系統(tǒng)加壓，在這種情況下可以使用較高加壓的方式給系統(tǒng)加壓，在這種情況下可以使用較高濃度的緩沖液和較高的操作電壓。濃度的緩沖液和較高的操作電壓。三、毛細(xì)管電色譜的特點(diǎn)三、毛細(xì)管電色譜的特點(diǎn) 毛細(xì)管電色譜所用儀器及檢測(cè)方式和毛細(xì)管電色譜所用儀器及檢測(cè)方式和毛細(xì)管電泳完全相同

43、，所用固定相也沿襲毛細(xì)管電泳完全相同，所用固定相也沿襲了了HPLC的固定相。毛細(xì)管電色譜結(jié)合了的固定相。毛細(xì)管電色譜結(jié)合了毛細(xì)管區(qū)帶電泳的高效性和毛細(xì)管區(qū)帶電泳的高效性和HPLC選擇性選擇性固定相的優(yōu)點(diǎn)，因此它是將高效、高速、固定相的優(yōu)點(diǎn)，因此它是將高效、高速、高選擇性和富集、預(yù)濃縮樣品集于一身的高選擇性和富集、預(yù)濃縮樣品集于一身的新型分離分析技術(shù)。新型分離分析技術(shù)。 三、毛細(xì)管電色譜的特點(diǎn)三、毛細(xì)管電色譜的特點(diǎn) 分離效率比分離效率比HPLC高高 選擇性比毛細(xì)管電泳高選擇性比毛細(xì)管電泳高 大多數(shù)樣品分析在幾分鐘內(nèi)完成，大多數(shù)樣品分析在幾分鐘內(nèi)完成，復(fù)雜樣品分析也只需幾十分鐘；復(fù)雜樣品分析也只需幾十分鐘； 適合于離子性和中性化合物的分離適合于離子性和中性化合物的分離分析；分析； 適合于微量樣品的分離分析；適合于微量樣品的分離分析； 能實(shí)現(xiàn)樣品的富集和預(yù)濃縮。能實(shí)現(xiàn)樣品的富集和預(yù)濃縮。 毛細(xì)管電色譜分離中的有關(guān)因素一、工作電壓一、工作電壓 增加操作電壓可以增大電滲流速度，縮增加操作電壓可以增大電滲流速度，縮短分析時(shí)間。短分析時(shí)間。由于填充毛細(xì)管電色譜中的由于填充毛細(xì)管電色譜中的電滲流比開(kāi)管柱電色譜的電滲流低得多電滲流比開(kāi)管柱電色譜的電滲流低得多（僅是開(kāi)管柱的（僅是開(kāi)管柱的4060），工作電流），工作電流